Desenvolvimento de marcadores moleculares microssatélites e análise da diversidade genética de Guadua chacoensis (Rojas) Londoño & P M.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2016.O bambu (Poaceae: Bambusoidae), tem sido utilizado pela humanidade desde tempos remotos até os dias atuais. Historicamente, tem sido cultivado e explorado intensamente em vários países asiáticos, no entanto, vários povos utilizaram as diferentes espécies de bambu como material de construção, utensílios e alimentação, entre outros. No Brasil, existem muitas espécies nativas pertencentes à subfamília Bambusoideae. Entre estas, destaca-se o Guadua chacoensis, pelas suas características morfológicas e de rusticidade no ambiente em que ocorre. Contudo, na literatura há um limitante número de estudos científicos sobre esta e demais espécies de bambu. Os principais dados gerados são em espécies asiáticas, onde o uso dos bambus é mais intenso. No Brasil, ainda há pouco conhecimento a respeito da diversidade genética existente e das características populacionais dos bambuzais. Devido a este panorama, o objetivo deste estudo foi desenvolver marcadores microssatélites para a espécie G. chacoensis e utilizar os microssatélites desenvolvidos em populações nativas desta espécie. Amostras de folhas de plantas identificadas morfologicamente como G. chacoensis foram coletadas e realizada a extração de DNA total, utilizando o KIT Nucleo Spin Plant II (Macherey-Nagel, Düren, Alemanha). O DNA isolado de tecidos foliares foi sequenciado na plataforma Illumina MiSeq (San Diego, Estados Unidos das Américas). As sequências obtidas foram analisadas com o software CLC Genomics Worckbench® 8.0v. Para a identificação de locos microssatélites e desenho de iniciadores dos marcadores (forward | reverse) foram utilizados o software SSRLocator. Os marcadores selecionados foram validados para uso por meio da genotipagem de 168 indivíduos oriundos de oito populações distintas, sendo, seis destas, populações nativas da Mata Atlântica, coletadas no Parque Nacional do Iguaçu, Foz do Iguaçu, PR e duas populações cultivadas, uma em Florianópolis e outra em Rancho Queimado, SC, BR. Os marcadores com maior potencial de polimorfismo foram selecionados, sintetizados com fluorescência e utilizados para avaliar a diversidade genética nas populações nativas coletadas, totalizando 575 indivíduos coletados. Dentre os marcadores microssatélites obtidos, foram selecionados 35 pares (forward | reverse) para serem submetidos a testes de amplificação e otimização do protocolo de PCR. Destes, foram identificados 13 marcadores com maior potencial de uso. A validação dos marcadores para uso futuro foi realizada com indivíduos em seis populações distintas. Os 13 marcadores com maior potencial de polimorfismo foram selecionados e confeccionados com fluorescênciapara serem genotipados na plataforma ABI 3500xL Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, Estados Unidos das Américas). Dos 13 marcadores, sete (54%) detectaram polimorfismo, enquanto um não apresentou resultados satisfatórios de amplificação e foi descartado das análises seguintes. Os sete locos polimórficos encontrados são passiveis de serem empregados em estudos genéticos da espécie G. chacoensis. Com base na genotipagem das populações, foram verificados 25% de locos polimórficos, sendo Gcha 02 o loco com maior número de alelos (5). Alelos privados foram identificados no loco Gcha 02 para a população PF, no loco Gcha 05 para a população AF e dois alelos do loco Gcha 21 na população EF. A maior distância genética foi observada entre as populações IF e as demais, EF, AF e CF (0,150). As populações IF e PF apresentaram diferença genética menor entre si e maior distância genética quando comparadas as demais. A análise da estrutura populacional demonstra que a maior diversidade genética está entre os indivíduos, ao passo que as populações apresentaram elevada identidade genética. As populações de G. chacoensis presentes no Parque Nacional do Iguaçu apresentam reduzido polimorfismo nos locos microssatélites empregados neste estudo. Provavelmente devido à reduzida distância geográfica em que se encontram, bem como pela propagação vegetativa.Abstract : Since ancient times, bamboo (Poaceae: Bambusoidae) has been used by mankind. Historically, several Asian countries have intensively cultivated and exploited bamboo species, mainly as building material, utensils, food, among others. Brazil holds many indigenous species belonging to the subfamily Bambusoideae. Among them, Guadua chacoensis stands out by their morphological characteristics and hardiness. However, a limited number of scientific studies on bamboo species can be found in the literature. In general, these studies focus on Asian species, which have most intense use. In Brazil, little is known about the genetic diversity and population characteristics of bamboo groves. Thus, the objective of this study was to develop microsatellite markers for G. chacoensis and use these developed microsatellites in naturally occurring populations. Leaf samples of individuals morphologically identified as G. chacoensis were collected for DNA extraction using the Nucleo Spin Plant II Kit (Macherey-Nagel, Düren, Germany). A single individual were arbitrarily chosen for sequencing in Illumina MiSeq platform (San Diego, United States of America). The obtained sequences were analyzed with CLC Genomics Worckbench® 8.0v software. Microsatellite identification and primer design (forward | reverse) were made on SSRLocator software. The selected markers were validated for use by genotyping 168 individuals from eight different populations: six naturally occurring populations of the Atlantic Florest, in the Iguaçu National Park, Foz do Iguaçu, PR; and two grown populations, one in Florianópolis and another in Rancho Queimado, SC, BR. Among the obtained microsatellite markers, 35 pairs were selected (forward | reverse) to undergo amplification testing and PCR optimization. The 13 markers with higher polymorphism potential were selected and fluorescence-dyed for genotyping in 3500xL ABI Genetic Analyzer platform (Applyed Biosystems, Foster City, United States of America). The validation of these markers was performed with individuals of six different populations, totaling 575 individuals collected. Seven markers (54%) were polymorphic, five were monomorphic, and one was discarded for not showing satisfactory results of amplification. The seven polymorphic loci found are likely to be used in genetic studies G. chacoensis species. Based on the population genotyping, 25% of loci were polymorphic, with Gcha 02 presenting the highest number of alleles (5). Private alleles were identified in loci Gcha 02 (PF population), Gcha 05 (AF population), and Gcha 21 (EF population). The largest genetic distance (0.150) wasobserved between IF population and the others (EF, AF, and CF). The IF and PF populations had lower genetic difference between them and greater genetic distance when compared with others. The population structure analysis shows that greater genetic diversity is among individuals, while populations showed high genetic identity. Populations of G. chacoensis in the Iguaçu National Park have reduced polymorphism in microsatellite loci used in this study, probably due to the limited geographical distance between them and the vegetative propagation characteristic of the species

Phenology and thermal accumulation in grapevines in the Fronteira Oeste region of Rio Grande do Sul, Brazil

O objetivo deste trabalho foi avaliar a exigência térmica, obtida por diferentes métodos de cálculo, para caracterizar a fenologia das videiras (Vitis vinifera) 'Cabernet Sauvignon', 'Tannat', 'Ruby Cabernet' e 'Merlot', cultivadas na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul. O desenvolvimento fenológico foi acompanhado durante cinco safras – 2005/2006 a 2009/2010. As temperaturas mínimas e máximas do ar foram coletadas diariamente e foram testados oito métodos de soma térmica: M1.1, M1.2 e M1.3, que utilizaram somente a temperatura base inferior (10°C); M2.1 e M2.2, que consideraram também a temperatura ótima de desenvolvimento de 25°C; e M3.1, M3.2 e M3.3 que, além das anteriores, utilizaram 35°C como temperatura base superior do desenvolvimento. Estes métodos foram comparados pelo erro‑padrão das estimativas de soma térmica. O teste SNK foi utilizado para a comparação da exigência térmica entre as cultivares. O método M3.3 foi o que melhor simulou o desenvolvimento em 'Tannat' e 'Merlot' (1.823,1 e 1.780,8 graus‑dia respectivamente). No entanto, o menor desvio foi obtido em 'Cabernet Sauvignon' e 'Ruby Cabernet', pelo método M3.1 (1.958,9 e 1.944,8 graus‑dia respectivamente). Os métodos que empregaram as três temperaturas cardinais apresentaram maior precisão. 'Tannat' e 'Merlot' são as cultivares de videira que apresentam a menor exigência térmica para completar o ciclo.The objective of this work was to evaluate the thermal requirement, obtained by different thermal time calculation methods, to characterize the grapevine (Vitis vinifera) phenology of 'Cabernet Sauvignon', 'Tannat', 'Ruby Cabernet', and 'Merlot' grown in the Fronteira Oeste region, of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. The phenological development was followed for five seasons – 2005/2006 to 2009/2010. Minimum and maximum air temperatures were recorded daily, and the following eight thermal time methods were tested: M1.1, M1.2, and M1.3, which use only the down threshold temperature (10°C); M2.1 and M2.2, which also consider 25°C as the optimum temperature for development; and M3.1, M3.2, and M3.3, which, besides using the prior temperatures, consider 35°C as the upper threshold temperature of development. These methods were compared using the standard error (SE) estimates of accumulated heat. The SNK test was used to compare the thermal requirement between cultivars. M3.3 was the method that best simulated 'Tannat' and 'Merlot' development (1,823.1 and 1,780.8 degree‑day respectively). However, the least deviation was obtained in 'Cabernet Sauvignon' and 'Ruby Cabernet' using the M3.1 method (1,958.9 and 1,944.8 degree‑ day respectively). Methods employing the three cardinal temperatures showed greater accuracy. 'Tannat' and 'Merlot' are the cultivars that show the lowest thermal requirement to complete the cycle

Estimativa do plastocrono das videiras 'Cabernet Sauvignon' e 'Chardonnay' na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul

The objective of this work was to estimate the plastochron index of the 'Cabernet Sauvignon' and 'Chardonnay' grapevine varieties in Fronteira Oeste, in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. The experiment was conducted in 2010, in a completely randomized design, using 'Cabernet Sauvignon' and 'Chardonnay' grapevines grown in the municipalities of Itaqui, São Borja, and Maçambará, which were referred to as sites 1, 2, and 3, respectively. Phenological monitoring of the varieties was done from the beginning of sprouting until the pruning of canes (green trimming). The daily thermal sum (dTS, ºC day) was calculated using the cardinal temperatures for node appearance in grapevines (10, 25, and 35ºC), whereas the accumulated thermal sum (aTS, oC day) was obtained by adding up the dTS. The plastochron index was estimated by the inverse of the angular coefficient of the linear regression between the number of nodes per cane and aTS. In all three sites, both 'Cabernet Sauvignon' and 'Chardonnay' required degree-days of 10°C and aTS of 810ºC to complete the cycle from the beginning of sprouting until the end of flowering. The estimated plastochron indexes of the 'Cabernet Sauvignon' and 'Chardonnay' grapevines, in Fronteira Oeste, in the state Rio Grande do Sul, were 40.4 and 49.7ºC day per node, respectively.O objetivo deste trabalho foi estimar o plastocrono das variedades de videira 'Cabernet Sauvignon' e 'Chardonnay' na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul. O experimento foi conduzido em 2010, em delineamento experimental inteiramente casualizado, com as videiras 'Cabernet Sauvignon' e 'Chardonnay' cultivadas nos municípios de Itaqui, São Borja e Maçambará, denominados locais 1, 2 e 3, respectivamente. Realizou-se o monitoramento fenológico das variedades desde o início da brotação até a realização da desponta dos ramos. A soma térmica diária (STd, oC dia) foi calculada a partir das temperaturas cardinais para o aparecimento de nós em videira (10, 25 e 35ºC), enquanto a soma térmica acumulada (STa, ºC dia) foi obtida pela soma da STd. O plastocrono foi estimado pelo inverso do coeficiente angular da regressão linear entre o número de nós por sarmento e a STa. Nos três locais, tanto 'Cabernet Sauvignon' como 'Chardonnay' necessitaram de graus-dia de 10°C e STa de 810°C para completar o ciclo desde o início da brotação até o fim da floração. Os plastocronos estimados das variedades 'Cabernet Sauvignon' e 'Chardonnay', na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul, foram de 40,4 e 49,7ºC dia por nó, respectivamente

Exploring phenotypic plasticity leaf trait relationships in fungal-resistant grapevines using linear regression: Implications of the genotype environment interaction

Accurate and non-destructive models for predicting leaf area (LA) are essential for monitoring vineyard growth and developing automated algorithms. In this study, we developed and compared the performance of eight linear regression models for predicting LA in eleven fungal-resistant grapevine genotypes. We also explored the phenotypic plasticity of leaf traits and their relationship with LA using kernel density estimation analysis. We found that genotype played a major role in defining leaf shape, and genotype-environment interaction was observed. The best models for LA estimation were identified for each genotype, and a leaf deformation index was proposed. Our results provide accurate and robust models for estimating LA in fungal-resistant grapevine genotypes and demonstrate the relationship between leaf traits and the environment. Additionally, we present a method for defining leaf asymmetry. Overall, this study contributes to the development of non-destructive and automated techniques for monitoring vineyard growth

Fenologia e acúmulo térmico em videiras viníferas na região da Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul

Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a exigência térmica, obtida por diferentes métodos de cálculo, para caracterizar a fenologia das videiras (Vitis vinifera) 'Cabernet Sauvignon', 'Tannat', 'Ruby Cabernet' e 'Merlot', cultivadas na Fronteira Oeste do Rio Grande do Sul. O desenvolvimento fenológico foi acompanhado durante cinco safras - 2005/2006 a 2009/2010. As temperaturas mínimas e máximas do ar foram coletadas diariamente e foram testados oito métodos de soma térmica: M1.1, M1.2 e M1.3, que utilizaram somente a temperatura base inferior (10°C); M2.1 e M2.2, que consideraram também a temperatura ótima de desenvolvimento de 25°C; e M3.1, M3.2 e M3.3 que, além das anteriores, utilizaram 35°C como temperatura base superior do desenvolvimento. Estes métodos foram comparados pelo erro-padrão das estimativas de soma térmica. O teste SNK foi utilizado para a comparação da exigência térmica entre as cultivares. O método M3.3 foi o que melhor simulou o desenvolvimento em 'Tannat' e 'Merlot' (1.823,1 e 1.780,8 graus-dia respectivamente). No entanto, o menor desvio foi obtido em 'Cabernet Sauvignon' e 'Ruby Cabernet', pelo método M3.1 (1.958,9 e 1.944,8 graus-dia respectivamente). Os métodos que empregaram as três temperaturas cardinais apresentaram maior precisão. 'Tannat' e 'Merlot' são as cultivares de videira que apresentam a menor exigência térmica para completar o ciclo

Fisiologia da interação e mecanismos moleculares de resistência da videira (Vitis vinifera) ao Plasmopara viticola (BERK. & M. A. CURTIS) Berl. & De Toni

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2021.A videira, uma das espécies frutíferas mais cultivadas mundialmente, apresenta suscetibilidade a diversos patógenos, destacando-se como principal causador de danos o míldio, (Plasmopara viticola). Locos de resistência contra este patógeno (Rpv) são descritos para outras espécies do gênero Vitis. Rpvs estão associados ao reconhecimento patogênico, provavelmente via nucleotide-bind Leucine-rich repeat, desencadeando reações celulares de imunidade, Effector-Triggered Immunity (ETI). A cascata de sinais ativada resulta na morte celular, inibindo o progresso do patógeno. Pouco se sabe quanto aos mecanismos moleculares ativados por Rpvs, atuando isoladamente ou piramidados. Portanto, o objetivo com esta tese de doutorado foi caracterizar, a nível celular, as interações entre plantas portadoras de Rpvs e o P. viticola. A tese divide-se em 3 capítulos, no primeiro é apresentado a cinética da expressão gênica para os genes JAZMONATE ZIM DOMAIN 1 (JAZ1) e JAZ3, MYC2, TOPLESS, PATHOGENESIS RELATED-1 (PR1) e PR10, NONEXPRESSOR OF PATHOGENESIS RELATED 1 (NPR1), WRKY70, AtMYB44, STILBENE SYNTHASE (STS), GLICOSILTRANSFERASE (GT) e RESVERATROL O-METHYLTRANSFERASE (ROMT), bem como, dos níveis hormonais para ácido jasmônico (AJ), ácido salicílico (AS), ácido abscísico (ABA), ácido giberélico (GA4), ácido indolacético (AIA), zeatina (Z) e trans-zeatina-ribose (t-Z-R), em genótipos portadores de genes Rpvs expostos ao patógeno. Na avaliação da expressão gênica, foram utilizados genótipos contendo ausência de Rpv (genótipo suscetível), Rpv3-1, Rpv1+Rpv3-1 e Rpv3-3+Rpv10. A quantificação hormonal foi feita nos mesmos genótipos e também no genótipo Rpv3-1+Rpv3-3. No segundo capítulo, é apresentado a expressão diferencial de proteínas, identificadas em culturas celulares, contendo Rpv1+Rpv3-1, Rpv3-1 e rpv (suscetível), expostas ao patógeno. As culturas celulares foram obtidas a partir de calos foliares, mantidos em meio de cultura sólido e inoculados com P viticola, a coleta foi realizada em 24 horas após a inoculação. Os resultados apontam para a resposta de expressão diferencial de proteínas e processos biológicos nas células a partir de genótipos com resistência genética, resultando na indução de estresse oxidativo e morte celular, enquanto que no genótipo suscetível foi verificada maior quantidade de proteínas reguladas negativamente ou silenciadas com a inoculação do patógeno. O terceiro capítulo relata as atividades realizadas durante o período sanduíche na Fondazione Edmund Mach (FEM, Trento-IT). Foi desenvolvido uma avaliação temporal de uma pesquisa de médio prazo com o objetivo de conhecer o perfil metabólico de genótipos de videira contendo diferentes locos de resistência ao P. viticola quando expostos ao referido patógeno em distintos anos. Foram utilizados os genótipos F12P127 (Rpv3-1+Rpv3-3+Rpv10) e F12P60 (Rpv3-1+Rpv12), além das cultivares Bianca (Rpv3-1) Jasmine (Rpv12) BC4 (Rpv1), Solaris (Rpv3-3+Rpv10), pertencentes a coleção de germoplasma da FEM. Foram quantificadas as expressões dos compostos primários, fenólicos, voláteis e lipídicos em 0, 12, 48 e 96 horas posterior a inoculação (hpi). A principal alteração metabólica ocorre nas primeiras horas, principalmente pela sinalização do estresse oxidativo e a indução da morte celular. Com os resultados obtidos nos três capítulos foi possível descrever fisiológica e bioquimicamente a interação da videira e o P. viticola nos níveis de expressão gênica, mudanças no perfil de proteínas e modulação dos compostos metabólicos, durante o processo de interação planta patógeno.Abstract: Grapevine is one of the most cultivated fruit worldwide; however, it is susceptible to several pathogens, as downy mildew (Plasmopara viticola), which is one of the main grapevine pathogens. Resistance loci (Rpv) against this pathogen have been described for Vitis species. Rpvs are associated with pathogenic recognition, probably via nucleotide-bind Leucine-rich repeat, triggering cellular immune reactions, by Effector-Triggered Immunity (ETI), resulting in cell death, and inhibition of the pathogen's progress. Little is known about the molecular mechanisms activated by Rpvs, acting alone, or pyramided. The aim of the present work was to characterize the interactions between exposed plants carrying Rpvs and P. viticola. The thesis is composed by 3 chapters. In the first one it is presented the kinetics of the gene expression for the genes JAZMONATE ZIM DOMAIN 1 (JAZ1) and JAZ3, MYC2, TOPLESS, PATHOGENESIS RELATED-1 (PR1) and PR10, NONEXPRESSOR OF PATHOGENESIS RELATED 1 (NPR1), WRKY70, AtMYB44, STILBENE SYNTHASE (STS), GLYCOSTRANSFERASE (GT) and RESVERATROL O-METHYLTRANSFERASE (ROMT), as well as hormone levels for jasmonic acid (JA), salicylic acid (SA), abscisic acid (ABA), gibberellic acid (GA4), indoleacetic acid (IAA), zeatin (Z) and trans-zeatin-ribose (tZR), in genotypes with Rpvs exposed to pathogen. For gene expression, genotypes containing Rpv3-1, Rpv1+Rpv3-1 and Rpv3-3+Rpv10 and rpv (susceptible) were used. For hormonal quantification, the genotype Rpv3-1+Rpv3-3 was added. In the second chapter, it is presented the differential expression of proteins, identified in cell cultures, containing Rpv1+Rpv3-1, Rpv3-1 and rpv, exposed to contamination with P. viticola. The cell cultures were obtained from leaf calluses, cultivated in gelled culture medium, and inoculated with P. viticola; the collection being performed 24 hours after inoculation. The results pointed out the differential expression of proteins and biological processes in cells from genotypes with genetic resistance, resulting in the induction of oxidative stress and cell death. In the susceptible genotype, a greater amount of negatively regulated or silenced proteins was observed with the pathogen inoculation. The third chapter reports activities carried out in the sandwich period at the Fondazione Edmund Mach (FEM, Trento-IT). Part of a research was developed with the objective of understand the metabolic profile of grapevine genotypes carrying different Rpv loci against when exposed to P. viticola. The genotypes F12P127 (Rpv3-1+Rpv3-3+Rpv10) and F12P60 (Rpv3-1+Rpv12) were used, in addition to the cultivars Bianca (Rpv3-1), Jasmine (Rpv12), BC4 (Rpv1), and Solaris (Rpv3-3+Rpv10), belonging to the germplasm collection FEM. The expressions of primary, phenolic, volatile and lipid compounds were quantified at 0, 12, 48 and 96 hours post inoculation (hpi). The main metabolic alteration occurs in the first hours, mainly by signaling oxidative stress and inducing cell death. The results obtained allowed the physiological and biochemical characterization of the interaction between grapevine and P. viticola in the levels of gene expression, changes in the protein profile and modulation of the metabolic compounds, during the pathogen plant interaction process

Emergência de plântulas de porta-enxertos de pessegueiro submetidos a diferentes períodos de estratificação Emergence of seedlings of rootstock of the peach when submitted to different periods of stratification

Objetivou-se com este trabalho, avaliar a germinação e o desenvolvimento de plantas oriundas de duas cultivares de pessegueiro 'Capdeboscq' e 'Okinawa' sob diferentes períodos de armazenamento, em viveiro comercial da empresa Frutplan Mudas Ltda, em Pelotas - RS, no período de maio a dezembro de 2009. Os caroços das duas cultivares foram armazenados em embalagens de papel por um período de 120 dias, sendo realizados os seguintes procedimentos: 10 dias de temperatura ambiente + 110 dias de frio; 40 dias de temperatura ambiente + 80 dias de frio; 70 dias de temperatura ambiente + 50 dias de frio; 100 dias de temperatura ambiente + 20 dias de frio e 120 dias de temperatura ambiente. Utilizando câmara fria programada para 6 ± 2 °C. O experimento foi conduzido em blocos casualizados, com quatro repetições e 25 sementes por parcela, no arranjo fatorial 2x5 (duas cultivares e cinco períodos de estratificação). As variáveis analisadas foram: porcentagem de plântulas emergidas, altura das plantas, diâmetro do tronco medido a 10 cm do colo, índice de velocidade de emergência em campo (IVEC) e dias para obtenção de 70% de emergência. A emergência da cv. Okinawa foi próximo a zero, com isto não foi considerada para avaliação de plântulas. Para a cv. Capdeboscq verificou-se diferenças significativas apenas para a variável dias para obtenção de 70% de emergência de plântulas, 112 a 123 dias, exceto para o tratamento com maior horas de frio que não atingiu os 70% de emergência. Conclui-se que os períodos de estratificação e frio não se mostraram vantajosos para obtenção de porta-enxertos de pessegueiro destas cultivares nas condições em que foi conduzido o experimento.The objective of this study was to evaluate the germination and development of plants from two cultivars of the peach, 'Capdeboscq' and 'Okinawa', for different periods of storage, at the commercial nursery of the company Frutplan Mudas Ltda., in Pelotas, Rio Grande do Sul, from May to December of 2009. The kernels of both cultivars were stored in paper wrappings for a period of 120 days, with the following procedures being carried out: 10 days at room temperature + 110 days of low temperature, 40 days at room temperature + 80 days of low temperature, 70 days at room temperature + 50 days of low temperature, 100 days at room temperature + 20 days of low temperature, and 120 days at room temperature, using a cold room programmed for 6 ± 2 °C. The experiment was carried out in a randomized block design, with four replications and 25 seeds per plot, in a 5x2 factorial layout (two cultivars and five periods of stratification). The variables analyzed were: the percentage of seedling emergence; plant height; trunk diameter measured at 10 cm from the soil, speed of emergence in the field (SEF) and days taken to reach 70% emergence. The emergence of cv. Okinawa was close to zero and therefore it was not considered when evaluating the seedlings. For the cv. Capdeboscq, significant differences were found only for the variable of days taken to achieve 70% seedling-emergence, 112 to 123 days, except for that treatment with the greatest time at low-temperatures, which did not reach 70% emergence. It is concluded that periods of stratification and low temperatures offer no advantage to obtaining rootstocks of these peach cultivars, for the conditions under which the experiment was carried out