Cryopreservation of plant germplasm in Argentina

This review describes the current status of development of methods for cryopreservation (at -196ºC) of plants germplasm in Argentina. Arachis pintoi, a forage legume, has been maintained as seeds using vitrification method. Additionally, apical meristems, shoot tips, and somatic embryos have been cryopreserved using encapsulation-dehydration. Zygotic embryos, encapsulated and dehydrated, have permitted the cryopreservation of seven species of the genus Ilex. Various explants (apical meristems, uninodal segments, buds and somatic embryos) of Melia azedarach have been cryopreserved using the encapsulation-dehydration method. Protocols based in encapsulation-dehydration have also been developed for shoot tips of Citrus sinensis, seeds and protocorms of Oncidum bifolium and anthers of Oryza sativa. Vitrification protocols have been developed forcryopreservation of shoot tips of Solanum tuberosum and seeds of Toona ciliata.Fil: Mroginski, Luis Amado. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Rey de Badaró, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

Regeneration of plants from apical meristem tips and nodal segments of Arachis pintoi

The in vitro regeneration potential of shoot apical tips (2 to 3 mm in length), meristems (0.3 to 0.5 mm in length), and nodal segments (4 to 7 mm long with an axillary bud) of diploid (2n = 2x = 20) and triploid (2n = 3x = 30) cytotypes of Arachis pintoi was evaluated. Explants were cultured on MS medium supplemented with different concentrations and combinations of naphthaleneacetic acid (NAA) and benzyladenine (BA). In one experiment the effect of gibberellic acid was tested. The cultures were done in liquid and solid media. Plant regeneration can be readily achieved from all explants in one step of 30 d culture on MS + 0.01 mg/L each of NAA and BA or two steps consisting of 1) shoots regeneration through culture of explants on MS + 0.01 mg/L each of NAA and BA, and 2) induction of rooting in regenerated shoots by reculture on MS + 0.01 mg/L NAA. The plantlets were successfully transferred to pots in a greenhouse.Fil: Rey de Badaró, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Mroginski, Luis Amado. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

Organogenesis and plant regeneration of Arachis villosa Benth. (Leguminosae) through leaf culture

With the aim of developing an efficient plant regeneration protocol, leaflet explants of three accessions of Arachis villosa Benth. (S2866, S2867 and L97) were cultured on basic Murashige and Skoog medium supplemented with different combinations of plant growth regulators: α-naphthalenacetic acid, indole-3-butyric acid, 6-benzylaminopurine, kinetin and thidiazuron. The accession L97 was the only one able to differentiate buds through indirect organogenesis. The most suitable combination for bud regeneration was the basic medium added with 13.62 μM thidiazuron and 4.44 μM 6-benzylaminopurine. These results show the important role of the genotype in morphogenetic responses and the organogenetic effect of thidiazuron in Arachis villosa accession L97. A thidiazuron lacking media (only 0.54 μM α-naphthalenacetic acid, 13.95 μM kinetin and 13.32 μM 6-benzylaminopurine were added) promoted the elongation of the regenerated buds. Adventitious rooting was achieved 90 days after the isolated shoots were transferred to a rooting medium containing 0.54 μM α-naphthalenacetic acid.Fil: Fontana, María Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Mroginski, Luis Amado. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Rey de Badaró, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

Enhanced seed germination of Ilex dumosa R. (Aquifoliaceae) through in vitro culture of cut pyrenes

An in vitro culture protocol was developed that increased the germination percentage and decreased the lag time to germination for Ilex dumosa R. pyrenes as a tool for replacing the laborious task of embryo rescue technique. This method involves transversely cutting surface-sterilized pyrenes with a scalpel blade, then placing the micropylar one-third end with the rudimentary embryo (0.25 mm long) on solidified (agar 0.65%) quarter-strength salts and vitamins of Murashige and Skoog, 1962 medium with 3% sucrose, and incubating in a growth room at 27 ± 2 8C with a 14-h photoperiod (116 mmolm?2 s?1). Most of the cut pyrenes (greater than 50%) germinated within the first month after inoculation and achieved maximum germination (70%) in 2 months compared with whole pyrenes, which began to germinate 3 months after sowing and required more than 8 months for maximum germination (37%). Moreover, the germination percentage of cut pyrenes was significantly higher than the germination of isolated embryos (34%). Thus, the cut pyrenes culture is a simpler and more effective technique than embryo rescue. Easily, on average, a trained operator is able to culture ~1000 cut pyrenes per day instead of ~100 isolated embryos.Fil: Dolce, Natalia Raquel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Mroginski, Luis Amado. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Rey, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste (i); Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentin

A cryopreservation protocol for immature zygotic embryos of species of Ilex (Aquifoliaceae)

Tropical Ilex species have recalcitrant seeds. This work describes experiments demonstrating the feasibility of long-term conservation of Ilex brasiliensis, I. brevicuspis, I. dumosa, I. intergerrima, I. paraguariensis, I. pseudoboxus, I. taubertiana, and I. theezans through cryopreservation of zygotic rudimentary embryos at the heart developmental stage. The embryos were aseptically removed from the seeds and precultured (7 days) in the dark, at 27± 2ºC on solidified (0.8% agar) 1/4MS medium, [consisting of quarterstrength salts and vitamins of Murashige and Skoog (1962) medium] with 3% sucrose and 0.1 mg/l Zeatin. The embryos were then encapsulated in 3% calcium alginate beads and pretreated at 24 h intervals in liquid medium supplemented with progressively increasing sucrose concentrations (0.5, 0.75 and 1 M). Beads were dehydrated for 5 h with silicagel to 25% water content (fresh weight basis) and then placed in sterile 5 ml cryovials. Then the beads were either plunged rapidly in liquid nitrogen were they were kept for 1 h (rapid cooling) or cooled at 1ºC min-1 to -30ºC. Then the beads were immersed in liquid nitrogen for 1 h (slow cooling). The beads were rewarmed by immersion of the cryovials for 1 min in a water bath thermostated at 30ºC. Finally, beads were transferred onto culture medium (1/4MS, 3% sucrose, 0.1 mg/l zeatin, solidified with 0.8% agar) and incubated in a growth room at 27 ± 2ºC under a 14 h light (116 μmol. m-2.s-1)/ 10 h dark photoperiod. Maximum recovery percentages between 15 and 83% (depending on de the species and the treatment) were obtained with the cryopreserved embryosFil: Mroginski, Luis Amado. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Sansberro, Pedro Alfonso. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Scocchi, Adriana M.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Luna, Claudia Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Rey de Badaró, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

Técnicas de cultivo in vitro y almacenamiento a baja temperatura para la conservación de explantes de té

Los resultados de este trabajo permiten concluir que es posible la conservación a corto/mediano plazo de explantes de té mediante el uso de la baja temperatura. La sobrevivencia, formación de vástagos y longitud de vástagos son influenciados por el tiempo de exposición a las bajas temperaturas. Es posible la conservación de plantas de té utilizando segmentos uninodales a bajas temperaturas, por un período máximo de 5 meses sin subcultivo, momento a partir del cual la sobrevivencia y calidad de los explantes declinan rápidamente. Los segmentos uninodales y yemas axilares son los explantes que permiten una mejor conservación y generación de vástagos.Fil: Molina, Sandra Patricia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Cerro Azul; ArgentinaFil: Pérez, María Laura. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Rey, Hebe Yolanda. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Mroginski, Luis Amado. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentin

Conservación de Germoplasma in Vitro

Desde sus inicios, el hombre ha dependido básicamente de los vegetales como fuente de energía. Al aumentar rápidamente la población, se ha hecho necesario implantar técnicas de explotación, en particular agropecuarias, que han contribuido a la destrucción de las poblaciones pioneras vegetales que fueron producto de siglos de evolución. Por otro lado, las técnicas modernas de producción de variedades mejoradas altamente homogéneas han provocado la reducción de la variabilidad genética de las especies cultivadas, ocasionando una “erosión genética”. En este contexto es cuando se recurre a las fuentes genéticas originales de la variabilidad, las que se deben preservar adecuadamente. Cuando se habla de preservación de germoplasma hay que subrayar que el objetivo es conservar, con la mayor integridad posible, la variabilidad genética de las poblaciones seleccionadas.Fil: Scocchi, Adriana. No especifíca;Fil: Rey de Badaró, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

Semilla Sintética

Resulta difícil tratar de determinar el origen de la idea de la producción de semillas sintéticas o artificiales. Es uno de los resultados de la aplicación en la Agricultura de los embriones somáticos descriptos por primera vez en 1958, por Jakob Reinert y por F.C. Steward y colaboradores. Sin embargo, un gran propulsor de su utilización para la propagación en gran escala de plantas fue Toshio Murashige quien en un Simposio realizado en 1977 en Ghent (Bélgica) presentó formalmente la idea de la producción de las semillas sintéticas, entendiendo como tal a un simple embrión somático encapsulado. Esta semilla se diferencia de la semilla verdadera en que el embrión es somático (producido por el fenómeno conocido como embriogénesis somática) y no cigótico y que si tiene endosperma y cubierta, éstos son artificiales. Esta semilla, puesta en condiciones adecuadas, germina y se convierte en una planta.Fil: Rey de Badaró, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Mroginski, Luis Amado. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentin

Conservación in vitro de germoplasma de Arachis pintoi (Leguminosae)

Studies on in vitro storage of either the cytotype diploid (2n=2x=20) or triploid (2n= 3x= 30) ofArachis pintoi were conducted to preserve germplasm under slow-growing conditions. Shoot tips (2-3 mm in length), excised from ín vitro-grown plants, could be effectively maintained for 1 year- in Murashige and Skoog médium (MS) supplemented with 0.01 mg/L NAA. Plants and shoots were regenerated on 83% of the shoot tips cultured. Rooting of the regenerated shoots was achieved by reculturing them on MS + 0.01 mg/L NAA. Subsequent plantlets were then successfully transferred to pots in the greenhouse.Fil: Rey de Badaró, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Mroginski, Luis Amado. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin

Cryopreservation of Arachis pintoi seeds

Studies on the storage of seeds of the diploid cytotype (2n=2x= 20 chromosomes) of Arachis pintoi (Leguminosae) were conducted to preserve germplasm for the long term in liquid nitrogen (-196°C). The best cryo-procedure comprised: desiccation of the seeds to 4% water content (14 days at 40°C) and, subsequently, direct cooling in nitrogen liquid. The cryotubes were then rapidly warmed in a water bath at 38°C. With this treatment, after 7 days in a germinator up to 90% of the seeds germinatedFil: Rey de Badaró, Hebe Yolanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; ArgentinaFil: Mroginski, Luis Amado. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Botánica del Nordeste. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Botánica del Nordeste; Argentin