Reference materials used for specific safety evaluation of human immunoglobulin and human albumin products: features of development, certification and application

Human immunoglobulin and human albumin products can negatively affect patients’ health. The residual content of haemagglutinins, anti-D antibodies, prekallikrein activator, as well as the level of anticomplementary activity, are controlled during both production and testing for compliance with normative documentation. Methods for their quantitative evaluation are based on the effects of erythrocytes hemolysis or agglutination and on the amidolytic product properties of cascade reactions. These methods require the obligatory use of reference materials (RMs). The development of RMs, acting as the carrier of the quantitative characteristics of the human immunoglobulins and human albumin impurities, is fraught with the difficulty of selecting a candidate, substantiating the certification methodology, and determining the relevant characteristics. In this research, we used human immunoglobulin solutions with normalized haemagglutinin content, anti-D antibodies or anti-complementary activity in a different range, whose quality was studied using haemagglutination and chromogenic methods, and the complement fixation test. Methodological approaches to the RM development and certification were justified using system analysis and forensic audit methods. The results demonstrate the necessity of using RMs to assess the stability of analytical work by applying anti-complementary activity determination, haemagglutinin content or anti-Dantibody methods. It is established that RMs allow the quantitative content of haemagglutinins, anti-D antibodies and prekallikrein activator to be established. The value of the CRM characteristics should be approximated to the qualitative composition of these impurities in the analysed products, but in amounts not detectable (to produce negative RM components) or exceeding permissible maxima (to produce positive RM components)

Standardisation of the method for prekallikrein activator determination in human immunoglobulin and albumin products

Assessment of prekallikrein content is essential for safety control of human immunoglobulin and albumin products. The inherent variability of human prekallikrein reagents and chromogenic substrates indicates the need for standardisation of the chromogenic assay, using the components of a reference standard (RS) not only for construction of calibration curves, but also for confirmation of validity, consistency, and reproducibility of results within different established ranges. The aim of the study was to improve the quality control of human plasma products in terms of prekallikrein activator content. Materials and methods: prekallikrein activator content was determined by the chromogenic assay according to the procedure described in General Monograph 1.8.2.0013.18 of the Russian Pharmacopoeia, using various prekallikrein reagents. An RS was developed in a spiking test, using human albumin solution and Hageman factor beta-fragment reagent. Shewhart control charts were prepared based on the results of determination of prekallikrein activator content in the RS control component.Results: a two-component RS for prekallikrein activator content with an assigned Hageman factor beta fragment content was developed using the spiking test. The authors substantiated the necessity of using a Russian-produced prekallikrein reagent as the RS component. The in-house reference standard IRS 42-28-445 was certified using all available human prekallikrein reagents, and the IRS 42-28-446 was certified using the prekallikrein reagent included in the kit. The certified prekallikrein activator content is: 51 IU in the batches 1 of IRS components intended for prekallikrein determination; 8.3–11.9 IU/mL in the IRS 42-28-445 control component, after reconstitution in 1.0 mL of purified water, and 5.4–6.6 IU/mL after reconstitution in 2.0 mL of purified water; and 9.1–11.1 IU/mL and 5.6–6.4 IU/mL in the IRS 42-28-446 control component after reconstitution in 1.0 mL and 2.0 mL of purified water, respectively. The IRS component intended for prekallikrein determination is designed for calibration curve construction, while the IRS control component is designed for assessing the validity of test results and preparation of control charts. The analysis of the control charts for the control component made it possible to evaluate the consistency of the analytical process. Conclusions: the components of the developed RSs in combination with Shewhart control charts allow for both determination of prekallikrein activator content, and control of the analytical process, as well as assessment of changes related to the replacement of the reagent batch. The RS control component allows for assessment of analytical process consistency and ensures the standardisation of the test procedure

Стандартные образцы в оценке специфической безопасности препаратов иммуноглобулинов и альбумина человека: особенности разработки, аттестации и применения

Human immunoglobulin and human albumin products can negatively affect patients’ health. The residual content of haemagglutinins, anti-D antibodies, prekallikrein activator, as well as the level of anticomplementary activity, are controlled during both production and testing for compliance with normative documentation. Methods for their quantitative evaluation are based on the effects of erythrocytes hemolysis or agglutination and on the amidolytic product properties of cascade reactions. These methods require the obligatory use of reference materials (RMs). The development of RMs, acting as the carrier of the quantitative characteristics of the human immunoglobulins and human albumin impurities, is fraught with the difficulty of selecting a candidate, substantiating the certification methodology, and determining the relevant characteristics. In this research, we used human immunoglobulin solutions with normalized haemagglutinin content, anti-D antibodies or anti-complementary activity in a different range, whose quality was studied using haemagglutination and chromogenic methods, and the complement fixation test. Methodological approaches to the RM development and certification were justified using system analysis and forensic audit methods. The results demonstrate the necessity of using RMs to assess the stability of analytical work by applying anti-complementary activity determination, haemagglutinin content or anti-Dantibody methods. It is established that RMs allow the quantitative content of haemagglutinins, anti-D antibodies and prekallikrein activator to be established. The value of the CRM characteristics should be approximated to the qualitative composition of these impurities in the analysed products, but in amounts not detectable (to produce negative RM components) or exceeding permissible maxima (to produce positive RM components).Введение. Проблема безопасного применения препаратов иммуноглобулинов и альбумина человека обусловлена их возможным влиянием на системы комплемента, калликреин-кининовую, систему гемостаза пациента. Остаточное содержание гемагглютининов, анти-D антител, активатора прекалликреина, уровень антикомплементарной активности, обуславливающих нежелательные явления при применении этих препаратов, регламентируется и контролируется как на этапах производства, так и в ходе испытаний по подтверждению соответствия требованиям нормативной документации. Методы их количественной оценки основаны на эффектах гемолиза или агглютинации эритроцитов, на амидолитических свойствах продуктов каскадных реакций и сопряжены с использованием реагентов биологического происхождения, что предопределяет обязательное использование стандартных образцов. Разработка стандартных образцов, являющихся носителем количественной характеристики примесей препаратов иммуноглобулинов и альбумина человека, сопряжена со сложностями подбора кандидата, обоснованием методики аттестации и установлением соответствующих характеристик, а также обуславливает особенности применения. Материалы и методы. В работе использованы растворы иммуноглобулинов человека с нормируемым содержанием гемагглютининов, анти-D антител или антикомплементарной активностью в различном диапазоне, качество которых было изучено с использованием методов гемагглютинации, реакции связывания комплемента, хромогенным методом; методические подходы к разработке и аттестации стандартных образцов обосновывали с использованием методов системного анализа и документальной экспертизы. Результаты исследования. Показана необходимость использования стандартных образцов для оценки стабильности аналитической работы при применении методик определения антикомплементарной активности, содержания гемагглютининов или анти-D антител. Установлено, что стандартные образцы, являясь средством передачи единицы величины в совокупности с методикой испытаний, также позволяют установить количественное содержание гемагглютининов, анти-D антител, активатора прекалликреина. Обоснована необходимость максимального приближения значения аттестуемых характеристик стандартного образца к качественному составу этих примесей в анализируемых препаратах, но в количествах, не выявляемых (для изготовления отрицательных компонентов стандартных образцов) или превышающих предельно допустимые (для изготовления положительных компонентов стандартных образцов). Обсуждение и заключение. Обоснованные методические подходы позволили разработать и аттестовать соответствующие отраслевые стандартные образцы, используемые при изучении специфической безопасности препаратов иммуноглобулинов и альбумина человека

АДЪЮВАНТНАЯ ТЕРАПИЯ ПАЦИЕНТОВ С ГАСТРОИНТЕСТИНАЛЬНЫМИ СТРОМАЛЬНЫМИ ОПУХОЛЯМИ: СТРАТИФИКАЦИЯ БОЛЬНЫХ ПО ГРУППАМ РИСКА

The experience of adjuvant treatment of patients with gastrointestinal stromal tumors (GIST) demonstrated its high efficiency, allowing to increase disease-free survival by almost 2 times. Currently, low-risk patients after radical surgical treatment need dynamic observation, patients with moderate-risk recommended to receive adjuvant treatment with imatinib for 1 year and high risk patients – for 3 years. This article presents an overview of the most important prognostic factors, the analysis of which will allow clinical oncologist to stratify patients into risk groups more accurately and thus increase the effectiveness of the targeted therapy.Опыт проведения адъювантной терапии больных с гастроинтестинальными стромальными опухолями (ГИСО) продемонстрировал свою высокую эффективность, позволив увеличить безрецидивную выживаемость пациентов почти в 2 раза. В настоящее время пациенты группы низкого риска после проведения радикального хирургического лечения остаются под динамическим наблюдением, больным ГИСО группы умеренного риска рекомендовано проведение адъювантной терапии иматинибом в течение 1 года, высокого риска — 3 лет. В статье представлен обзор наиболее значимых прогностических факторов, анализ которых позволит клиническому онкологу наиболее точно стратифицировать больных по группам риска и тем самым увеличить эффективность проводимой таргетной терапии

Оценка стабильности аналитической работы методики определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека

The evaluation of anticomplementary activity, being an obligatory component of the quality control ofhuman immunoglobulin preparations, requires the use of a number of reagents of biological origin that are difficult to standardise. In order to standardise the quality control method used for determination of antiсomplementary activity it is advisable to use a reference standard which demonstrates whether obtained results comply with the acceptance criteria, and helps to assess the stability of analytical performance. The aim of the study was to assess the stability of analytical performance of the test procedure used for determination of antiсomplementary activity of human immunoglobulin preparations using human immunoglobulin reference standards of various grades. Materials and methods: anticomplementary activity was determined by the complement fixation test in accordance with the general monograph of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation (14th ed.) OFS.1.8.2.0007.15 using different batches of guinea pig complement and sheep red blood cells. The test procedure was standardised using the OSO 42-28-430-2018 human immunoglobulin reference standard and the human immunoglobulin BRP, batch 1 (cat. No. Y0001504). The obtained results of anticomplementary activity of the reference standards were used to construct Shewhart control charts, using the certified values as control limits. Results: the analysis of the constructed Shewhart charts helped to assess trends, and estimate the influence of different batches of guinea pig complement and sheep red blood cells on the stability of analytical performance of the test procedure used for determination of antiсomplementary activity of human immunoglobulin preparations. Conclusions: the use of the OSO 42-28-430-2018 reference standard in combination with Shewhart control charts for the quality control of human immunoglobulin preparations in terms of Anticomplementary activity makes it possible to control the testing process, and assess any of its changes associated with the replacement of the batch of the reagent. At the same time, the reference standard of the European Pharmacopoeia, which has a wide range of permissible values, can only be used to confirm the acceptance of the results. Further studies to determine the mean value of the anticomplementary activity of control samples, as well as the standard deviation, may increase the possibilities of using this reference standard for assessment of analytical performance stability.Оценка уровня антикомплементарной активности, являясь обязательной составляющей контроля качества лекарственных препаратов иммуноглобулинов человека, сопряжена с необходимостью использования в методике целого ряда трудно стандартизуемых реагентов биологического происхождения. С целью стандартизации методики контроля качества препаратов по показателю «Антикомплементарная активность» целесообразно использование стандартного образца, который позволяет установить соответствие критериям приемлемости результатов, а также оценить стабильность аналитической работы. Цель работы: оценка стабильности аналитической работы методики при проведении испытаний лекарственных препаратов иммуноглобулинов человека по показателю «Антикомплементарная активность» с использованием стандартных образцов иммуноглобулинов человека различной квалификации. Материалы и методы: антикомплементарную активность определяли в реакции связывания комплемента в соответствии с ОФС.1.8.2.0007.15 Государственной фармакопеи Российской Федерации (XIV изд.) с использованием различных серий комплемента морских свинок и эритроцитов барана. Для стандартизации методики применяли стандартный образец иммуноглобулина человека ОСО 42-28-430-2018 и стандартный образец иммуноглобулина человека (антикомплементарная активность и молекулярные параметры) BRP серия 1 (кат. № Y0001504). По результатам определения уровня антикомплементарной активности этих стандартов осуществляли построение контрольных карт Шухарта, используя аттестованные значения в качестве контрольных границ. Результаты: анализ построенных карт Шухарта позволил оценить тренды, влияние различных серий комплемента морских свинок, эритроцитов барана на стабильность аналитической работы методики определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека. Выводы: использование ОСО 42-28-430-2018 в методике контроля качества препарата иммуноглобулина человека по показателю «Антикомплементарная активность» в сочетании с контрольными картами Шухарта позволяет контролировать процесс анализа, оценивать его изменения, связанные со сменой серии реагентов. В то же время стандартный образец Европейской фармакопеи, имея широкий диапазон допустимых значений, может быть использован лишь для подтверждения приемлемости результатов. Дополнительные исследования по установлению среднего значения уровня антикомплементарной активности контролей, а также стандартного отклонения могут расширить возможности использования этого стандарта для оценки стабильности аналитической работы методики

Стандартизация метода определения содержания активатора прекалликреина в лекарственных препаратах иммуноглобулинов и альбумина человека

Assessment of prekallikrein content is essential for safety control of human immunoglobulin and albumin products. The inherent variability of human prekallikrein reagents and chromogenic substrates indicates the need for standardisation of the chromogenic assay, using the components of a reference standard (RS) not only for construction of calibration curves, but also for confirmation of validity, consistency, and reproducibility of results within different established ranges. The aim of the study was to improve the quality control of human plasma products in terms of prekallikrein activator content. Materials and methods: prekallikrein activator content was determined by the chromogenic assay according to the procedure described in General Monograph 1.8.2.0013.18 of the Russian Pharmacopoeia, using various prekallikrein reagents. An RS was developed in a spiking test, using human albumin solution and Hageman factor beta-fragment reagent. Shewhart control charts were prepared based on the results of determination of prekallikrein activator content in the RS control component.Results: a two-component RS for prekallikrein activator content with an assigned Hageman factor beta fragment content was developed using the spiking test. The authors substantiated the necessity of using a Russian-produced prekallikrein reagent as the RS component. The in-house reference standard IRS 42-28-445 was certified using all available human prekallikrein reagents, and the IRS 42-28-446 was certified using the prekallikrein reagent included in the kit. The certified prekallikrein activator content is: 51 IU in the batches 1 of IRS components intended for prekallikrein determination; 8.3–11.9 IU/mL in the IRS 42-28-445 control component, after reconstitution in 1.0 mL of purified water, and 5.4–6.6 IU/mL after reconstitution in 2.0 mL of purified water; and 9.1–11.1 IU/mL and 5.6–6.4 IU/mL in the IRS 42-28-446 control component after reconstitution in 1.0 mL and 2.0 mL of purified water, respectively. The IRS component intended for prekallikrein determination is designed for calibration curve construction, while the IRS control component is designed for assessing the validity of test results and preparation of control charts. The analysis of the control charts for the control component made it possible to evaluate the consistency of the analytical process. Conclusions: the components of the developed RSs in combination with Shewhart control charts allow for both determination of prekallikrein activator content, and control of the analytical process, as well as assessment of changes related to the replacement of the reagent batch. The RS control component allows for assessment of analytical process consistency and ensures the standardisation of the test procedure.Оценка содержания активатора прекалликреина является необходимой составляющей контроля специфической безопасности лекарственных препаратов иммуноглобулинов и альбумина человека. Вариабельность свойств биологических реагентов прекалликреина человека, хромогенного субстрата указывает на необходимость стандартизации хромогенного метода использованием компонентов стандартного образца (СО) не только для построения калибровочного графика, но и для подтверждения достоверности, стабильности и воспроизводимости полученных результатов в различных диапазонах значений в пределах регламентированных. Цель работы: совершенствование процедуры контроля качества препаратов из плазмы крови человека по содержанию активатора прекалликреина. Материалы и методы: содержание активатора прекалликреина определяли хромогенным методом по общей фармакопейной статье 1.8.2.0013.18 Государственной фармакопеи Российской Федерации с использованием реагентов прекалликреина различных производителей. СО разрабатывали на основе метода добавок с использованием раствора альбумина человека и реагента ß-фрагмента фактора Хагемана. По результатам определения содержания активатора прекалликреина в компоненте контроля строили контрольные карты Шухарта. Результаты: методом добавок разработан двухкомпонентный СО содержания активатора прекалликреина с регламентированным количеством ß-фрагмента фактора Хагемана; обоснована необходимость комплектации СО реагентом прекалликреина отечественного производства; отраслевой стандартный образец (ОСО) 42-28-445 аттестован с использованием всех доступных реагентов прекалликреина человека, ОСО 42-28-446 – с использованием реагента прекалликреина, входящего в состав набора. Аттестованное значение содержания активатора прекалликреина составило: в компоненте для оценки содержания активатора прекалликреина серии 1 обоих ОСО – 51 МЕ; в компоненте контроля ОСО 42-28-445 при восстановлении в 1,0 мл воды очищенной – 8,3–11,9 МЕ/мл, при восстановлении в 2,0 мл воды очищенной – 5,4–6,6 МЕ/мл; в компоненте контроля ОСО 42-28-446 – 9,1–11,1 и 5,6–6,4 МЕ/мл соответственно. Компонент для оценки содержания активатора прекалликреина предназначен для построения калибровочного графика, компонент контроля – для оценки достоверности результатов испытаний и построения контрольных карт. Анализ полученных карт для компонента контроля позволил оценить стабильность аналитической работы. Выводы: компоненты разработанных СО в сочетании с контрольными картами Шухарта позволяют не только определять содержание активатора прекалликреина, но и контролировать процесс анализа, оценивать его изменения, связанные со сменой серии реагентов. Компонент контроля позволяет оценивать стабильность аналитической работы и обеспечивает стандартность методики

Liposomes: a new non-pharmacological therapy concept for seasonal-allergic-rhinoconjunctivitis

Mucosal barrier disorders play an important role in the pathomechanism of the allergic disease. A new approach for their treatment uses liposomes, which consist of phospholipids that make up 75% of the protective nasal surfactant layer. Our aim was to investigate the efficacy of liposomal-based therapy, as a comprehensive treatment alternative to guideline cromoglycate-based therapy, in the treatment of seasonal allergic rhinoconjunctivitis (SAR). We compared nasal and conjunctival symptom reduction with LipoNasal n nasal spray used as monotherapy (LNM), or LipoNasal n nasal spray and Tears Again eye spray combination therapy (LTC), against standard cromoglycate combination therapy (CGC). This prospective, controlled, open observational study was conducted monocentrically. According to their symptoms and preferences 72 patients with SAR were distributed in three equal groups. The study comprised two visits at an interval of 7 days. The efficacy was examined by daily documenting nasal and conjunctival symptom scores. The Nasal-Spray-Sensory-Scale and the Eye-Drops/Spray-Sensory-Scale were used to investigate the tolerability. Quality of life (QoL) was evaluated, using the RHINASTHMA QoL German adapted version. LNM achieved significant improvement in nasal (p < 0.001) and conjunctival symptoms (p = 0.050). The symptom reduction using CGC was equally significant. LTC led to significant nasal symptom relief (p = 0.045). QoL did not improve significantly in all groups (p > 0.05). The tolerability of all treatments was good and no adverse reactions were observed. In all treatment groups the improvement of the nasal and conjunctival symptom scores exceeds the minimal clinically important difference (MCID). The results demonstrate good tolerability and efficacy of non-pharmaceutical liposomal-based treatment (LipoNasal n and Tears Again), given as monotherapy or combination therapy, for nasal and conjunctival symptoms caused by SAR. This study indicates that liposomal-based treatment for SAR may be a comparable alternative to cromoglycate therapy. Further studies are needed to verify these findings

Substrate docking to γ-secretase allows access of γ-secretase modulators to an allosteric site

γ-Secretase generates the peptides of Alzheimer's disease, Aβ40 and Aβ42, by cleaving the amyloid precursor protein within its transmembrane domain. γ-Secretase also cleaves numerous other substrates, raising concerns about γ-secretase inhibitor off-target effects. Another important class of drugs, γ-secretase modulators, alter the cleavage site of γ-secretase on amyloid precursor protein, changing the Aβ42/Aβ40 ratio, and are thus a promising therapeutic approach for Alzheimer's disease. However, the target for γ-secretase modulators is uncertain, with some data suggesting that they function on γ-secretase, whereas others support their binding to the amyloid precursor. In this paper we address this controversy by using a fluorescence resonance energy transfer-based assay to examine whether γ-secretase modulators alter Presenilin-1/γ-secretase conformation in intact cells in the absence of its natural substrates such as amyloid precursor protein and Notch. We report that the γ-secretase allosteric site is located within the γ-secretase complex, but substrate docking is needed for γ-secretase modulators to access this site

Molecular Profiling Reveals Diversity of Stress Signal Transduction Cascades in Highly Penetrant Alzheimer's Disease Human Skin Fibroblasts

The serious and growing impact of the neurodegenerative disorder Alzheimer's disease (AD) as an individual and societal burden raises a number of key questions: Can a blanket test for Alzheimer's disease be devised forecasting long-term risk for acquiring this disorder? Can a unified therapy be devised to forestall the development of AD as well as improve the lot of present sufferers? Inflammatory and oxidative stresses are associated with enhanced risk for AD. Can an AD molecular signature be identified in signaling pathways for communication within and among cells during inflammatory and oxidative stress, suggesting possible biomarkers and therapeutic avenues? We postulated a unique molecular signature of dysfunctional activity profiles in AD-relevant signaling pathways in peripheral tissues, based on a gain of function in G-protein-coupled bradykinin B2 receptor (BKB2R) inflammatory stress signaling in skin fibroblasts from AD patients that results in tau protein Ser hyperphosphorylation. Such a signaling profile, routed through both phosphorylation and proteolytic cascades activated by inflammatory and oxidative stresses in highly penetrant familial monogenic forms of AD, could be informative for pathogenesis of the complex multigenic sporadic form of AD. Comparing stimulus-specific cascades of signal transduction revealed a striking diversity of molecular signaling profiles in AD human skin fibroblasts that express endogenous levels of mutant presenilins PS-1 or PS-2 or the Trisomy 21 proteome. AD fibroblasts bearing the PS-1 M146L mutation associated with highly aggressive AD displayed persistent BKB2R signaling plus decreased ERK activation by BK, correctible by gamma-secretase inhibitor Compound E. Lack of these effects in the homologous PS-2 mutant cells indicates specificity of presenilin gamma-secretase catalytic components in BK signaling biology directed toward MAPK activation. Oxidative stress revealed a JNK-dependent survival pathway in normal fibroblasts lost in PS-1 M146L fibroblasts. Complex molecular profiles of signaling dysfunction in the most putatively straightforward human cellular models of AD suggest that risk ascertainment and therapeutic interventions in AD as a whole will likely demand complex solutions

РЕЙКЬЯВИК-1986: ПРОРЫВ В «ХОЛОДНОЙ ВОЙНЕ»

The article attempts to review purposes, plans, progress and results of the Soviet-American summit on October 11–12, 1986 in Reykjavik from the position of the Secretary general of the CPSU Central Committee Mikhail Gorbachev.В статье делается попытка рассмотреть цели, планы, ход и итоги советско-американской встречи на высшем уровне 11–12 октября 1986 года в Рейкьявике с позиций Генерального секретаря ЦК КПСС М.С. Горбачева