Práticas de produção, armazenamento e utilização do plasma rico em plaquetas e produtos relacionados no Brasil: estudo transversal

Introduction: Platelet-rich plasma (PRP) is a technology with potential application in several areas of Medicine and Dentistry. The high    variability observed during the  production process imposes a challenge for the regulation of its production and use. Objectives: To evaluate current practices of production, storage and use of platelet-rich plasma and related products in Brazil, allowing the identification of operational variability throughout these processes. Method: Crosssectional study with data collection carried out by using a self-applied electronic questionnaire,with protection of anonymity. Questions were defined based on a literature review and consultation with a specialist in the field. The study questionnaire was sent to researchers and professionals who are producing PRP identified by different strategies, such as previous participation in events and publications in the area. Results: 64 responses were obtained, with 36 complete responses (56.3%) and 28 partial responses (43.7%). The rate of respondents could not be calculated, considering the means for dispatching the questionnaire. For PRP, there was a predominance of use of protocols with double centrifugation and platelet activation by different methods. Most respondents reported using PRP in the areas of orthopedics, physiatry and sports medicine. For fibrin-rich plasma (PRF), there was a predominance of responses using a single centrifugation protocol, without the use of platelet activation methods. Most respondents indicate the use of PRF in areas of dentistry. Variability of procedures and usage profile were observed for all platelet concentrates. Analyses were carried out comparatively according to the three main types of platelet concentrates. Conclusions: Findings corroborate the need to develop regulatory norms aiming at reducing variability and at promoting safety along the production and use of platelet concentrates.Introdução: O plasma rico em plaquetas (PRP) é uma tecnologia com potencial aplicação em diversas áreas da medicina e odontologia. A alta variabilidade no processo de produção   desta tecnologia e de tecnologias relacionadas desafiam a regulamentação de sua produção, do controle de qualidade e do uso. Objetivo: Avaliar práticas de produção, armazenamento e utilização do PRP e produtos relacionados no Brasil, permitindo a identificação de variabilidade operacional ao longo destes processos. Método: Estudo transversal com coleta de dados realizadas por meio de um questionário eletrônico, autoaplicado e com preservação de anonimato. As perguntas foram definidas a partir de revisão de literatura e por consulta a especialista da área. O questionário foi encaminhado a pesquisadores e a profissionais de várias áreas atualmente envolvidas na produção do PRP. Esses profissionais foram identificados por diferentes estratégias, tais como participação prévia em eventos relacionados e publicações na área. Resultados: Foram obtidas 64 respostas, sendo 36 respostas completas (56,3%) e 28 respostas parciais (43,7%). A taxa de respondentes não pôde ser calculada, considerando-se as formas de divulgação do questionário. Para a produção de PRP, as respostas indicaram predomínio de protocolos com centrifugação dupla e utilização de métodos variados para ativação plaquetária. A maioria dos respondentes referiu utilizar o PRP nas áreas de ortopedia, fisiatria e medicina esportiva. Para a produção do plasma rico em fibrina (PRF), houve predomínio de respostas indicando utilização de protocolo de centrifugação única, sem utilização de métodos de ativação plaquetária. A maioria dos respondentes indicou utilizar o PRF em áreas da odontologia. No geral, observou-se grande variabilidade nos procedimentos de obtenção e do perfil de utilização entre os principais tipos de concentrados de plaquetas. Conclusões: Os achados corroboram a necessidade do desenvolvimento de medidas regulatórias com foco nos pontos críticos identificados, visando promover a segurança durante a produção e utilização dos concentrados de plaqueta

HCV Genotypes, Characterization of Mutations Conferring Drug Resistance to Protease Inhibitors, and Risk Factors among Blood Donors in São Paulo, Brazil

Background: Hepatitis C virus (HCV) infection is a global health problem estimated to affect almost 200 million people worldwide. the aim of this study is to analyze the subtypes and existence of variants resistant to protease inhibitors and their association with potential HCV risk factors among blood donors in Brazil.Methods: Repeat anti-HCV reactive blood donors are systematically asked to return for retest, notification, and counseling in which they are interviewed for risk factors for transfusion-transmitted diseases. We analyzed 202 donors who returned for counseling from 2007 to 2010 and presented enzyme immunoassay-and immunoblot-reactive results. the HCV genotypes and resistance mutation analyses were determined by the direct sequencing of the NS5b and NS3 regions, respectively. the HCV viral load was determined using an in-house real-time PCR assay targeting the 5'-NCR.Results: HCV subtypes 1b, 1a, and 3a were found in 45.5%, 32.0%, and 18.0% of the donors, respectively. the mean viral load of genotype 1 was significantly higher than that of the genotype 3 isolates. Subtype 1a was more frequent among young donors and 3a was more frequent among older donors. Protease inhibitor-resistant variants were detected in 12.8% of the sequenced samples belonging to genotype 1, and a higher frequency was observed among subtype 1a (20%) in comparison to 1b (8%). There was no difference in the prevalence of HCV risk factors among the genotypes or drug-resistant variants.Conclusions: We found a predominance of subtype 1b, with an increase in the frequency of subtype 1a, in young subjects. Mutations conferring resistance to NS3 inhibitors were frequent in treatment-naive blood donors, particularly those infected with subtype 1a. These variants were detected in the major viral population of HCV quasispecies, have replicative capacities comparable to nonresistant strains, and could be important for predicting the response to antiviral triple therapy.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Fundacao Pro-Sangue/Hemocentro de São PauloFundacao Prosangue Hemoctr São Paulo, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Infect Dis Div DIPA, São Paulo, BrazilUniv São Paulo, Fac Med, Discipline Med Sci, São Paulo, BrazilHCFMUSP, Dept Pathol, LIM Lab Medice Lab 03, São Paulo, BrazilUniv Sao Joao del Rei, Divinopolis, MG, BrazilUniv São Paulo, Fac Med, Dept Infect Dis, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Infect Dis Div DIPA, São Paulo, BrazilWeb of Scienc

Sangue periférico como fonte de células para terapia celular Peripheral blood as a source of stem cells

O sangue periférico tem sido utilizado como fonte de células progenitoras hematopoéticas para o transplante de medula óssea, única aplicação clínica bem estabelecida até o momento para as células-tronco. Mais recentemente, além das células progenitoras hematopoéticas, estudos têm identificado também no sangue periférico a presença de células-tronco mesenquimais. Estas células apresentam as mesmas características e marcadores de superfície que as células-tronco mesenquimais da medula óssea e são capazes de diferenciação em células do tecido conjuntivo como osteócitos, condrócitos, adipócitos e miócitos. Embora sua origem e destino ainda sejam desconhecidos, a presença destas células no sangue periférico de indivíduos adultos representa um importante instrumento na área de medicina regenerativa e terapia celular. O conhecimento de marcadores imunofenotípicos que possam caracterizar as CTM de forma mais prática e objetiva e de possíveis estratégias capazes de aumentar o número destas células na circulação são fundamentais para o avanço de pesquisas clínicas baseadas na sua utilização.<br>Peripheral blood has been routinely used as a source of hematopoietic progenitor cells for allogeneic and autologous bone marrow transplantation. Recent studies have demonstrated that a low number of mesenchymal stem cells are also present in the peripheral blood. They share the same surface markers as bone marrow-derived mesenchymal stem cells and are capable of differentiating into mesenchymal lineage cells including osteocytes, adipocytes and chondrocytes. Although their origin and destination are unclear, their presence in the peripheral blood of adults seems to represent an important and powerful tool for regenerative medicine and cell therapy

Collection of peripheral blood progenitor cell after administration of cyclophosphamide and granulocyte-colony stimulating factor (GCSF): an analysis of 307 patients

Mobilização inadequada de células progenitoras hematopoéticas (CPH) tem sido observada em 10 - 30% dos pacientes submetidos a transplante de medula óssea (TMO) autogênico para tratamento de doenças onco-hematológicas. Os fatores relacionados com má resposta à mobilização ainda não estão totalmente estabelecidos. Apresentamos uma análise retrospectiva de pacientes submetidos à TMO autogênico com o objetivo de identificar variáveis associadas com resposta ruim ao regime de mobilização utilizado. Casuística e Métodos: Fizeram parte desta análise 307 pacientes com diferentes diagnósticos, tratados com TMO autogênico em uma única Instituição, no período de Abril de 2001 a Abril de 2007. Todos os pacientes incluídos no estudo foram submetidos a um único regime de mobilização baseado na administração de ciclofosfamida (dose total de 60-120 mg/kg de peso IV) e fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) (dose diária de 6 - 17 ug/(kg de peso)/dia SC). O sucesso na resposta ao regime de mobilização foi definido quando um número maior ou igual a 2,0x10 (6) células CD34 + /(kg de peso) foi coletado do sangue periférico com até três procedimentos de leucaférese. Resultados: Dos pacientes analisados, 260 apresentaram sucesso na mobilização (84,7%). Nestes pacientes, um número mediano de 3,67 (2,0 - 46,0) células CD34+ /(kg de peso) foi coletado por paciente com um número mediano de 1 (1-3) procedimento de leucaférese. O insucesso na mobilização foi observado em 47 pacientes (15,3%): 24 (7,8%) que foram submetidos à coleta de CPH de sangue periférico, porém não coletaram número maior ou igual 2,0x10 (6) células CD34+/(kg de peso) com pelo menos três procedimentos de leucaférese; e, 23 (7,5%) foram submetidos à coleta de CPH por punção da medula óssea, por não terem atingido número mínimo de 10 células CD34+/mm3 no sangue periférico para realização de leucaférese. De acordo com análise univariada, os fatores associados com o insucesso foram: diagnóstico (P ou = a 2,0x10(6) CD34+ cells/(kg weight) could be collected from the peripheral blood with a maximum of three leukapheresis procedures. Clinical and laboratory parameters at the time of mobilization were analyzed for correlations with the number of CD34+ cells collected. Results: Two hundred and sixty patients (84.7%) presented success in mobilization. In this group, a median of 3.67 (2.0-46.0) CD34+ cells/(kg weight) was collected per patient in a median of 1(1-3) leukapheresis procedure. Poor response to mobilization was observed in 47 patients (15.3%): 24 (7.8%) were submitted to PBSC collection but didn\'t collected at least 2.0 x 106 CD34+ cells/(kg weight) with three leukapheresis procedures and 23 (7.5%) didn\'t reach an absolute number count of 10 CD34+ cells/mm3 in the peripheral blood to start collection by leukapheresis. In univariate analysis poorer PBSC mobilization was associated with diagnosis (Pp < 0.0001), time interval from the diagnosis to mobilization (P < 0.0001), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0001), previous treatment with alkylating agents (P = 0.0003) and mitoxantrone (P = 0.0006), platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0006) and interval between mobilization and peak of CD34+ cells in peripheral blood (P < 0.0001). No significant correlation was found with age, gender, disease status, marrow involvement at mobilization, prior radiation therapy and exposition to platin analogues. In the stepwise regression model, diagnosis (P = 0.0232), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0167), previous treatment with mitoxantrone (P = 0.0285) and platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0423) were found to be independent negative predictive factors for CD34+ cells mobilization. Conclusion: Cumulative load of chemotherapy, exposition to Mitoxantrone, platelet count just prior to mobilization and diagnosis were independent factors related to poor progenitor cells mobilization. These results could help in the previously recognition of patients at risk for poor or no response to mobilization and allow to plan an alternative or more aggressive regimen for this group of patients

Virus SEN: epidemiologia e sua relação com doenças hepáticas SEN virus: epidemiology and its relation to liver disease

Um vírus recentemente identificado e denominado como vírus SEN (SENV) tem sido considerado como um possível agente causador das hepatites não A-E. Trata-se de um DNA vírus de cadeia única, não-envelopado, pertencente à superfamília Circoviridae, com prevalência bastante variável em indivíduos saudáveis. Embora sua principal via de transmissão parece ser a parenteral, outras formas de transmissão não podem ser excluídas. Apesar da prevalência da infecção pelo SENV ser mais freqüente em pacientes com doenças hepáticas do que na população geral, não existem evidências comprovando que a infecção isolada por este vírus cause hepatite aguda ou que a co-infecção com os vírus das hepatites A, B ou C piore o curso da doença hepática. Em indivíduos com doença hepática preexistente não foram observadas diferenças estatisticamente significantes nos níveis de alanina aminotransferase (ALT) e nos achados histológicos hepáticos quando comparados os pacientes com e sem a infecção associada pelo vírus SEN. Diferente das infecções crônicas causadas pelos vírus B e C, a infecção pelo SENV não tem sido considerada como um fator de risco para o desenvolvimento de carcinoma hepatocelular. Finalmente, apesar da maior prevalência da infecção pelo vírus SEN em pacientes transfundidos, não existe evidência clara da relação causal entre este agente infeccioso e a hepatite pós-transfusional não A-E. Novos estudos são necessários para se definir a patogênese e a importãncia clínica da infecção pelo vírus SEN.SENV, a new, recently-identified human virus, has been considered a possible causative agent of non-A to E hepatitis. It is a single stranded, non-enveloped DNA virus classified within the Circoviridae family. Prevalence in different populations shows great variability with differences between countries and ethnic groups. Although parenteral route is an efficient way for virus transmission, other routes of transmission cannot be excluded. The effect of SENV on acute and chronic liver diseases has been studied. In spite of the fact that the prevalence of SENV is higher among patients with hepatic disorders, there is no evidence that SENV infection is able to cause acute hepatitis or to change the clinical course of hepatitis A, B or C. There is also no evidence that alanine aminotransferase (ALT) is higher or that the histological parameters are worse in patients with hepatic disorders co-infected with SENV as compared to patients without co-infections. Unlike chronic hepatitis B Virus or Hepatitis C Virus infection, SENV infection has not been considered a risk factor for developing hepatocellular carcinoma. Finally, although it is clear that the prevalence of SENV is higher in blood transfusion recipients, there is no clear evidence that this virus is the causative agent of post-transfusion hepatitis. Further studies are needed to define the clinical importance of SENV infection

Study of possible clinical and laboratory predictors of alloimmunization against red blood cell antigens in cancer patients

Background: The inflammatory background of patients influences the process of alloimmunization against red blood cell antigens. Proof of this statement to clinical practice is still lacking. Objective: The aim of this study was to verify whether factors related to disease severity and inflammatory status of cancer patients can predict alloimmunization. Methods: This was a case-control study in which alloimmunized oncologic patients treated between 2009 and 2012 were compared with a non-alloimmunized control group regarding the severity of the disease (metastasis/performance status/body mass index) and C-reactive protein levels. Results: The groups did not differ significantly in terms of C-reactive protein, Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG)/Karnofsky performance status, presence of metastasis and body mass index. Conclusion: It is not possible to predict alloimmunization in cancer patients based on severity of illness and inflammatory markers. Strategies of screening patients by phenotyping blood based on these criteria are not justified