Misidentification of a Hepatitis C Virus (HCV) recombinant form leading to treatment failure with new direct acting antivirals

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Inhibition du cycle lytique du Virus Epstein-Barr par ARN interférence

The lytic cycle of EBV plays an important role in pathologies associated with this virus. Involved in manufacturing of the viral capsid, protease (PR) is essential for infectious virions production. It represents thereby a prime target for a therapeutic strategy to inhibit viral replication. In this work, the therapeutic efficiency of siRNA targeting EBV-PR was tested on 293 epithelial cells transfected with EBV B95-8 genome. The decrease of PR mRNA was measured by quantitative RT-PCR, the amount of expressed protein by Western blot, and the number of produced infectious viral particles by super-infection of Raji cells. The efficiency of the best siRNA anti-PR was compared to that of anti-DNA polymerase anti-CMV drug and then assessed in combination with siRNA targeting other lytic cycle proteins of EBV. The anti-PR siRNA tested here allow getting a 70% decrease of PR mRNA, 35% of protein and 95% of infectious viral particles number. Compared to anti-DNA polymerase, only the siRNA anti-PR enables a significant reduction of infectious viral particles number and its association with ganciclovir increases even more its effectiveness (p <0.05). Similarly, the association with siRNA targeting other lytic cycle proteins allows raising the inhibition of infectious viral particles production. RNAi targeting EBV-PR seems an interesting therapeutic way, possibly in combination with conventional therapeutics and / or with other siRNA anti-EBV, to limit viral replication in EBV associated diseases.Le cycle lytique de l'EBV joue un rôle important dans les pathologies associées à ce virus. Participant à la fabrication de la capside virale, la protéase (PR) est essentielle à la production de virions infectieux. Elle représente ainsi une cible de choix pour une stratégie thérapeutique visant à inhiber la réplication virale. Dans ce travail, l'efficacité thérapeutique de siRNA ciblant EBV-PR a été évaluée sur des cellules épithéliales 293 transfectées avec le génome d'EBV B95-8. La diminution de l'ARNm PR a été mesurée par RT-PCR quantitative, la quantité de protéine exprimée, par Western blot, et le nombre de particules virales infectieuses produites, par sur-infection de cellules Raji. L'efficacité du meilleur siRNA anti-PR a été comparée à celle de drogues anti-ADN polymérase anti-CMV puis évaluée en combinaison avec des siRNA ciblant d'autres protéines du cycle lytique d'EBV. Les siRNA anti-PR testés ici permettent d'obtenir une diminution de 70% de l'ARNm PR, de 35% de la protéine et de 95% du nombre de particules virales infectieuses. Comparés aux anti-ADN polymérase, seul le siRNA anti-PR permet d'obtenir une diminution significative de nombre de particules virales infectieuses et son association au ganciclovir permet encore d'augmenter cette efficacité (p<0,05).De même, l'association avec des siRNA ciblant d'autres protéines du cycle lytique permet d'améliorer l'inhibition de la production de particules virales infectieuses. L'ARNi ciblant EBV-PR semble une piste thérapeutique intéressante, éventuellement en association aux thérapeutiques conventionnelles et/ou avec d'autres siRNA anti-EBV, pour limiter la réplication virale dans les pathologies associées à EBV

Inhibition du cycle lytique du Virus Epstein-Barr par ARN interférence

The lytic cycle of EBV plays an important role in pathologies associated with this virus. Involved in manufacturing of the viral capsid, protease (PR) is essential for infectious virions production. It represents thereby a prime target for a therapeutic strategy to inhibit viral replication. In this work, the therapeutic efficiency of siRNA targeting EBV-PR was tested on 293 epithelial cells transfected with EBV B95-8 genome. The decrease of PR mRNA was measured by quantitative RT-PCR, the amount of expressed protein by Western blot, and the number of produced infectious viral particles by super-infection of Raji cells. The efficiency of the best siRNA anti-PR was compared to that of anti-DNA polymerase anti-CMV drug and then assessed in combination with siRNA targeting other lytic cycle proteins of EBV. The anti-PR siRNA tested here allow getting a 70% decrease of PR mRNA, 35% of protein and 95% of infectious viral particles number. Compared to anti-DNA polymerase, only the siRNA anti-PR enables a significant reduction of infectious viral particles number and its association with ganciclovir increases even more its effectiveness (p <0.05). Similarly, the association with siRNA targeting other lytic cycle proteins allows raising the inhibition of infectious viral particles production. RNAi targeting EBV-PR seems an interesting therapeutic way, possibly in combination with conventional therapeutics and / or with other siRNA anti-EBV, to limit viral replication in EBV associated diseases.Le cycle lytique de l'EBV joue un rôle important dans les pathologies associées à ce virus. Participant à la fabrication de la capside virale, la protéase (PR) est essentielle à la production de virions infectieux. Elle représente ainsi une cible de choix pour une stratégie thérapeutique visant à inhiber la réplication virale. Dans ce travail, l'efficacité thérapeutique de siRNA ciblant EBV-PR a été évaluée sur des cellules épithéliales 293 transfectées avec le génome d'EBV B95-8. La diminution de l'ARNm PR a été mesurée par RT-PCR quantitative, la quantité de protéine exprimée, par Western blot, et le nombre de particules virales infectieuses produites, par sur-infection de cellules Raji. L'efficacité du meilleur siRNA anti-PR a été comparée à celle de drogues anti-ADN polymérase anti-CMV puis évaluée en combinaison avec des siRNA ciblant d'autres protéines du cycle lytique d'EBV. Les siRNA anti-PR testés ici permettent d'obtenir une diminution de 70% de l'ARNm PR, de 35% de la protéine et de 95% du nombre de particules virales infectieuses. Comparés aux anti-ADN polymérase, seul le siRNA anti-PR permet d'obtenir une diminution significative de nombre de particules virales infectieuses et son association au ganciclovir permet encore d'augmenter cette efficacité (p<0,05).De même, l'association avec des siRNA ciblant d'autres protéines du cycle lytique permet d'améliorer l'inhibition de la production de particules virales infectieuses. L'ARNi ciblant EBV-PR semble une piste thérapeutique intéressante, éventuellement en association aux thérapeutiques conventionnelles et/ou avec d'autres siRNA anti-EBV, pour limiter la réplication virale dans les pathologies associées à EBV

Dépistage de l infection par le virus de l hépatite C (adaptation et évaluation d un test sérologique combiné sur prélèvement de sang capillaire et prélèvement oral)

La population toxicomane constitue le principal réservoir du virus de l hépatite C dans les pays industrialisés. Dans cette population, la ponction veineuse constitue souvent un frein au dépistage. L utilisation de prélèvements alternatifs, comme le sang capillaire et le fluide oral, ou de tests rapides d orientation diagnostic réalisables également sur ces prélèvements pourrait faciliter le dépistage. Le test combiné, Monolisa® HCV Ag-Ab Ultra (BioRad) adapté au prélèvement de sang capillaire a donné une sensibilité de 98,2% et une spécificité de 100%. Le test combiné sur fluide gingival créviculaire donne des résultats excluant son utilisation pour le dépistage de l hépatite C. Les performances retrouvées pour l OraQuick® HCV bien qu inférieures à celles annoncées par le fabriquant restent satisfaisantes notamment sur le sang capillaire. L influence du statut VIH sur la sensibilité des deux tests a bien été retrouvée sur sang capillaire et sur fluide gingival créviculaire, cependant une augmentation de la sensibilité chez les patients virémiques n a pas été observée dans notre étude. Compte tenu des performances observées, l utilisation du test combiné BioRad ou de l OraQuick® HCV sur sang capillaire pourrait être envisagée en clinique. Le prélèvement de sang capillaire déposé sur buvard, sous réserve d une bonne conservation, permet également d évaluer la présence de l ARN viral mais nécessite une 2ème consultation contrairement à l OraQuick® HCV, dont le résultat est rendu en 20 minutes. Une 2ème étude devrait déterminer la stratégie la plus adaptée.GRENOBLE1-BU Médecine pharm. (385162101) / SudocSudocFranceF

Inhibition du cycle lytique du Virus Epstein-Barr par ARN interférence

Le cycle lytique de l'EBV joue un rôle important dans les pathologies associées à ce virus. Participant à la fabrication de la capside virale, la protéase (PR) est essentielle à la production de virions infectieux. Elle représente ainsi une cible de choix pour une stratégie thérapeutique visant à inhiber la réplication virale. Dans ce travail, l'efficacité thérapeutique de siRNA ciblant EBV-PR a été évaluée sur des cellules épithéliales 293 transfectées avec le génome d'EBV B95-8. La diminution de l'ARNm PR a été mesurée par RT-PCR quantitative, la quantité de protéine exprimée, par Western blot, et le nombre de particules virales infectieuses produites, par sur-infection de cellules Raji. L'efficacité du meilleur siRNA anti-PR a été comparée à celle de drogues anti-ADN polymérase anti-CMV puis évaluée en combinaison avec des siRNA ciblant d'autres protéines du cycle lytique d'EBV. Les siRNA anti-PR testés ici permettent d'obtenir une diminution de 70% de l'ARNm PR, de 35% de la protéine et de 95% du nombre de particules virales infectieuses. Comparés aux anti-ADN polymérase, seul le siRNA anti-PR permet d'obtenir une diminution significative de nombre de particules virales infectieuses et son association au ganciclovir permet encore d'augmenter cette efficacité (p<0,05).De même, l'association avec des siRNA ciblant d'autres protéines du cycle lytique permet d'améliorer l'inhibition de la production de particules virales infectieuses. L'ARNi ciblant EBV-PR semble une piste thérapeutique intéressante, éventuellement en association aux thérapeutiques conventionnelles et/ou avec d'autres siRNA anti-EBV, pour limiter la réplication virale dans les pathologies associées à EBV.The lytic cycle of EBV plays an important role in pathologies associated with this virus. Involved in manufacturing of the viral capsid, protease (PR) is essential for infectious virions production. It represents thereby a prime target for a therapeutic strategy to inhibit viral replication. In this work, the therapeutic efficiency of siRNA targeting EBV-PR was tested on 293 epithelial cells transfected with EBV B95-8 genome. The decrease of PR mRNA was measured by quantitative RT-PCR, the amount of expressed protein by Western blot, and the number of produced infectious viral particles by super-infection of Raji cells. The efficiency of the best siRNA anti-PR was compared to that of anti-DNA polymerase anti-CMV drug and then assessed in combination with siRNA targeting other lytic cycle proteins of EBV. The anti-PR siRNA tested here allow getting a 70% decrease of PR mRNA, 35% of protein and 95% of infectious viral particles number. Compared to anti-DNA polymerase, only the siRNA anti-PR enables a significant reduction of infectious viral particles number and its association with ganciclovir increases even more its effectiveness (p <0.05). Similarly, the association with siRNA targeting other lytic cycle proteins allows raising the inhibition of infectious viral particles production. RNAi targeting EBV-PR seems an interesting therapeutic way, possibly in combination with conventional therapeutics and / or with other siRNA anti-EBV, to limit viral replication in EBV associated diseases.GRENOBLE1-BU Sciences (384212103) / SudocSudocFranceF

Virus de l hépatite E (mise en place du diagnostic moléculaire au laboratoire de virologie du CHU de Grenoble)

Le virus de l hépatite E (VHE) est responsable d hépatites aiguës autochtones. Il est actuellement décrit chez des patients immunodéprimés avec passage à la chronicité. Nous avons adapté une technique de RT-PCR temps réel du VHE décrite par Jothikumar et al en 2006 amplifiant une région conservée de l ORF3. Ses performances analytiques montrent une quantification linéaire de 100 à 106 copies/ml, une spécificité de 100% et une variabilité intra et inter-essais faible confortent la robustesse et fiabilité de notre technique. Les études rétrospectives de prévalence du VHE ont associées cette méthode moléculaire et un test sérologique commercialisé (IgG +IgM). La première a été menée parmi 111 patients co-infectés par le VIH et le VHC inclus dans l étude multicentrique française ANRS-HCO2-RIBAVIC. Nous rapportons une faible séroprévalence à 2,7% sans marqueurs d infection récente. La toxicomanie, mode principal de contamination de cette population, ne nous apparait pas comme un facteur de risque supplémentaire d infection par le VHE. La seconde a été réalisée sur 169 sérums post-transplantation hépatique et 81 pré-transplantation de patients suivis au CHU de Grenoble. La séroprévalence du VHE en pré-transplantation est de 9,9% et en post-transplantation de 7,7%. La séroprévalence trouvée à 5,4% parmi le personnel hospitalier grenoblois n est pas significativement différente (p=0,1830). Aucune réactivation virale n a été détectée. Trois primo-infections sont retrouvées avec évolution chronique dans 2 cas. Ces résultats suggèrent que cette population ne semble pas plus à risque d infection par le VHE que la population générale locale et qu une évolution chronique reste possible.GRENOBLE1-BU Médecine pharm. (385162101) / SudocSudocFranceF

Recherche de facteurs pharmacologiques et virologiques de réponse à la ribavirine chez les patients tratiés pour une hépatite C chronique

GRENOBLE1-BU Médecine pharm. (385162101) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

Using high-throughput sequencing for investigating intra-host hepatitis C evolution over long retrospective periods

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