Prevalencia y detección por PCR anidada de Anaplasma marginale en bovinos y garrapatas en la zona central del Litoral ecuatoriano

The bacterium causing anaplasmosis in cattle is known as Anaplasma marginale. It is mainly transmitted biologically by ticks, flies, and fomites; it can also be transmitted through infected blood as a result of improper use of surgical tools. Up to this moment, Ecuador lacks updated studies on efficient procedures for specific A. marginale diagnosis and eradication through the control of these insects, therefore it is necessary to develop and implement proposals related to the use of this molecular tool for potential vectors of transmission of this disease in cattle. For this work, DNA was extracted efficiently by the method of Salting Out. A total of 255 samples were analyzed by Nested PCR, distributed as follows |108| Rhipicephalus (Boophilus) microplus, |85| bovine, from these, the 13.46% and 85.48% were positive for rickettsia, the samples of Amblyomma spp |62| all were negative. The total Kappa index of infested cattle against Rhipicephalus (Boophilus) microplus|, was not significant (0.28). Subsequently,the presence or absence of disease which was determined by χ2 (p = 0.66) does not depend on the location from where the cattle comesLa bacteria que provoca la anaplasmosis en bovinos se conoce como Anaplasma marginale, es potencialmente transmitida de forma biológica por garrapatas, moscas y fómites o mediante sangre infectada como consecuencia del uso incorrecto de herramientas quirúrgicas. Hasta la fecha, Ecuador carece de estudios actualizados sobre procedimientos eficientes para el diagnóstico específico y, erradicación de A. marginale a través del control de estos insectos, por lo que resulta de gran importancia desarrollar e implementar trabajos relacionados con el uso de esta herramienta molecular, para la detección de la bacteria en vectores de transmisión que provocan la enfermedad en bovinos. En este trabajo, se extrajo ADN eficazmente con el método de Salting Out. Un total de 255 muestras fueron analizadas por PCR anidada, distribuidas del siguiente modo|108| Riphicephalus (Boophilus) microplus, |85| bovinos, de estos el 13.46% y 85.48% dieron positivas para la rickettsia, las muestras de Amblyomma spp. |62| todas fueron negativas. El índice de concordancia Kappa |total de bovinos infestados frente a Riphicephalus (Boophilus) microplus|, no fue significativo (0.28). Subsiguientemente, se determinó por χ2 (p=0.66) que la presencia o ausencia de la enfermedad es independiente del lugar de donde proviene el bovino

Distribución, localización e inhibidores de las polifenol oxidasas en frutos y vegetales usados como alimento

Polyphenol oxidases (PPOs) are ubiquitous enzymes that catalyze the oxygen-dependent reaction that transforms o- diphenols to o-quinones. These quinones are reactive and capable of covalently modifying a wide variety of nucleophilic species into cells leading to the formation of brown polymers, known as enzymatic browning. The phenomenon of browning during growth, collection, storage and processing of fruits and vegetables, is a major problem in the food industry and is recognized as one of the leading causes of commercial value and quality loss, since it produces important changes in the appearance and organoleptic properties of edible fruits and vegetables, and it is often associated to the release of odors and negative effects on nutritional value. Although PPOs have been described in various plant tissues such as roots, sedes, leaves and fruits, the control of this phenomenon requires biochemical knowledge of the type of phenolic substrates present in each plant, the level of reducing compounds, the level of O2 accessibility, of the nature of the various oxidizable compounds and, finally, o-quinones polymerization and degradation. This paper present a review of the biochemical effect, distribution, location and potential inhitors of PPOs in fruits used for food.Las polifenol oxidasas (PPOs), son enzimas ubicuas que catalizan la reacción dependiente de oxígeno que transforma o-difenoles en o-quinonas. Estas quinonas son reactivas y capaces de modificar covalentemente un amplio abanico de especies nucleófilas del interior de las células que conduce a la formación de polímeros marrones, conocido como pardeamiento enzimático. El fenómeno de pardeamiento durante el crecimiento, recogida, almacenamiento y procesado de frutos y vegetales, es un problema de primera magnitud en la industria agroalimentaria y se reconoce como una de las principales causas de pérdidas de calidad y valor comercial. Produce cambios importantes tanto en la apariencia como en las propiedades organolépticas de frutos y vegetales comestibles, y además suele ir asociado al desprendimiento de olores y efectos negativos sobre el valor nutricional. Aunque las PPOs se han descrito en diversos tejidos de plantas como raíces, semillas, hojas y frutos, el control de este fenómeno requiere un conocimiento bioquímico del tipo de sustratos fenólicos presentes en cada planta, el nivel de compuestos reductores, el nivel de accesibilidad del O2, de la naturaleza de los diferentes compuestos oxidables y de la polimerización y degradación de las o-quinonas. En este trabajo se presenta una revisión del efecto bioquímico, distribución, localización y posibles inhibidores de las PPOs en frutos y vegetales usados como alimento

Inducción y enraizamiento de brotes epicórmicos de Cordia alliodora (Ruiz Et Pavon), Oken

Cordia alliodora (laurel) wood attractive appearance, its physical and mechanical characteristics, its abundant natural regeneration, as well as the contribution to carbon sequestration and soil protection, have made it an ideal species for reforestation. However, there is insufficient good quality planting material to meet these needs and to respond to the average annual demand. Hence, vegetative propagation has become an essential tool in breeding and it is being widely used for the conservation of genotypes in clonal banks. To this end, a methodology for laurel tree epicormic shoot induction and rooting, using plant growth regulators was established. Cytokinin concentrations used for induction of shoots from adult trees were 0, 3000, 6000, 9000 mg L-1 of BAP alone and combined with 1000, 2000, 3000 mg L-1 of IAA a Complete Randomized Design (DCA) with seven treatments and three repetitions, considering each tree as a repetition, was applied. The concentrations of auxin for rooting of shoots were 0, 1000, and 1500 mg kg-1 of NAA and IBA. A factorial arrangement DCA 3 x 3 (NAA x hormone IBA) with five repetitions and five units per repetition was used. After 105 days, the induction of epicormic shoots and epicormic buds response was evaluated 2.67 buds   16.42 cm long with 6000 mg kg-1 of BAP + 2000 mg kg-1 of IAA were obtained. At 45 days rooting percentage was 54%, the number of roots was 1.78, 2.49 length 2.59 and force with 1500 mg kg-1 of NAA + 1500 mg kg-1 of IBA. This research demonstrated that using cytokinins and auxins is effective in laurel epicormic shoots induction and rooting.La atractiva apariencia de la madera de Cordia alliodora (laurel), sus características físico-mecánicas, su abundante regeneración natural, captura de carbono y protección al suelo, la hacen ideal para la reforestación. No obstante, la falta de material de siembra de buena calidad para suplir la demanda media anual, convierten la propagación vegetativa en una herramienta esencial para el mejoramiento genético, y la conservación de genotipos en bancos clonales. En este sentido, se propuso establecer una metodología para la inducción y enraizamiento de brotes epicórmicos de árboles de laurel utilizando reguladores de crecimiento vegetal. Las concentraciones de citoquininas empleadas para la inducción de brotes a partir de árboles adultos fueron de: 0, 3000, 6000, 9000 mg L-1 de BAP sola y combinadas con 1000, 2000, 3000 mg L-1 de AIA, y se determinaron utilizando un Diseño Completo Aleatorizado (DCA). Las concentraciones de auxinas para el enraizamiento de los brotes fueron de 0, 1000, y 1500 mg kg-1 de ANA y AIB, mediante un DCA con arreglo factorial 3 x 3 (hormona ANA x hormona AIB). Se evaluó la inducción de brotes epicórmicos y se obtuvieron 2.67 brotes de 16.42 cm de longitud, con 6000 mg kg-1 de BAP + 2000 mg kg-1 de AIA. El porcentaje de enraizamiento fue 54%, número de raíces 1.78, longitud 2.59 con 1500 mg kg-1 de ANA + 1500 mg kg-1 de AIB. El uso de citoquininas y auxinas fue efectivo para provocar la diferenciación celular tanto en la inducción y rizogénesis de brotes epicórmicos de laurel

Respuesta de poblaciones microbianas que lideran el crecimiento en raíces y resistencia sistémica inducida

Rhizobacteria are an alternative that has proven not to generate resistance in pathogens. Pseudomonas strains play an important role in biocontrol, because they provide a great variety of bioactive compounds to control plant pathogens. The information search focused on the study of Pseudomonas spp isolates which have the ability to diminish the viability of such pathogens as: fungi, bacteria, nematodes through the use of an antagonist mechanism inducing plant defense systems through systemic acquired resistance (SAR) and induced systemic resistance (ISR) activating the pre-alert state on the ground before and after being subjected to the pathogenic agent. The RSI for the dependent route to jasmonate (JA) and ethylene (ET) is activatedLas rizobacterias lideran una serie de mecanismo en el sistema radículas en plantas que favorecen en aspectos fisiológicos como: desarrollo radicular por la producción de auxinas y promueven el mecanismo de defensa a nivel sistémico. Las rizobacterias del género Pseudomonas spp reportan tener capacidad de producir ácido indolil-3-acetico (AIA), en presencia del precursor Triptófano, bajo condiciones in vitro. La rizobacterias Promotoras de Crecimiento en Plantas (PGPR), en contacto con las raíces de la planta, estas rizobacterias utilizan los exudados de aminoácidos proteinogénico Triptófano precursor para síntesis de AIA, esto incrementa la producción del fitoregulador que favorecen el desarrollo y proliferación de la biomasa radicular adventicias. Se rescata la importancia del empleo de PGPR, como efectores en el mecanismo en defensa sensu stricto para la Resistencia Sistémica Inducida (RSI), que activa el estado de prealerta en la planta antes y después de ser sometida al agente patogénico. La RSI se activa por la ruta dependiente al jasmonato (JA) y etileno (ET)

Implementación de la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) Para el Diagnóstico de la Brucelosis de Bovinos en el Ecuador

In the present work I implement the technique of PCR for the detection of Brucella abortus, in blood samples, comparison with the Rose of bengal test. The amplification of the DNA was made using three oligonucleotidos homologous corresponding ones to the sequence 16 ARNr de Brucella abortus, giving a 725 amplification of 900 and pb respectively. A total of 172 blood samples was collected of 4 cattle ranches with historical prevalence of brucelosis presence. Were 142 refusals with the test of serológia and 143 with PCR, 30 were positive with the Pink serológica test of Bengal and 29 left positive with PCR. All the animals that left positives with Rose Bengal, 4 presented clinical symptoms as they are; weak abortions, bull calves, low production of meat and milk. The other 26 animals were negative with PCR and these animals did not present/display the clinical symptoms. From the 142 animals that gave negative with Rose of Bengal, 25 were positive with PCR. The results show that the detection of the positive animals by means of the PCR was more you specify and sensible that the serológica test of Rose of Bengal, therefore is a very useful tool in the diagnosis of Brucella abortus.En el presente trabajo se implementó la técnica de PCR para la detección de Brucella abortus, en muestras de sangre, en comparación con la prueba Rosa de bengala. La amplificación del ADN se realizó utilizando tres oligonucleotidos homólogos correspondientes a la secuencia 16 ARNr de Brucella abortus, dando una amplificación de 900 y 725 pb respectivamente. Un total de 172 muestras de sangre fueron recolectadas de 4 hatos con prevalencia histórica de presencia de brucelosis. Resultaron 142 negativas con la prueba de serológia y 143 con PCR, 30 resultaron positivas con la prueba serológica Rosa de bengala y 29 salieron positivas con PCR. Todos los animales que salieron positivos con Rosa de bengala, 4 presentaban síntomas clínicos como son; abortos, terneros débiles, baja producción de carne y leche. Los otros 26 animales resultaron negativos con PCR y estos animales no presentaron los síntomas clínicos. De los 142 animales que dieron negativo con Rosa de bengala, 25 resultaron positivos con PCR. Los resultados muestran que la detección de los animales positivos mediante la PCR fue más especificas y sensibles que la prueba serológica de Rosa de bengala, por lo tanto es una herramienta muy útil en el diagnóstico de Brucella abortus

Estudio de la Diversidad Genética de 20 Accesiones de Cacao (Theobroma cacao L.) Mediante AP-PCR de la Colección del Centro del Cacao de Aroma Tenguel en la Finca Experimental La Buseta

The present study consisted of determining the genetic diversity based on the scoreboards RAPD's (Random Amplification of Polymorphic DNA) of 20 accessions of cocoa (Theobroma cocoa L.) of the National variety, with characteristics of productivity, and levels of resistance, susceptibility and tolerance to the principal diseases caused by fungi as Ceratocistys fimbriata, Moniliophtora roreri and Crinipelis perniciosa. This germoplasma of thief is located in the Center of Cocoa of Aroma Tenguel, in the experimental estate "The Buseta" property of the Technical State University of Quevedo. The extraction of DNA realized it using the protocol of Doyle and Doyle (1990) with some modifications. 14 oligonucleótidos were used for the obtaining scoreboard RAPD's, of which 9 amplified reproducible products OPA-15, OPC-07, OPC-9, OPC-4, OPC-3, OPC-1, OPA-12 OPC- 13 y OPA-7. The products of amplification were migrated in gels of agarosa to 1.2 % to 90 volts for an hour. The molecular scoreboards were analyzed by means of a counterfoil of binary information to calculate the genetic distances. Nine used powderhorns generated 67 bands of which 59 (88 %) was polymorphic. The dendrograma showed two groups A and B, in the group A include two accessions, and in the group B the 18 remaining ones are which includes 2 subgroups B1 and B2 in the subgroup B1 includes the accession (L-22-H-40), and in the subgroup B2 there are included the accessions that possess characteristics of productivity. The level of diversity more high were obtained with the oligonucleótidos OPC 04 (0.80), OPC 07 (0.82). The powder-horn that brought (reported) the lowest level was OPC 01 (0.37). The accessions that presented the levels of variability more high places were the (L-22-H-40) (Or 75), (L-34-H-07) (0.86) and the (L-42-H-60) (0.72) whereas the lowest values them showed the accessions (L-26- H-64) (Or 48) and (L-23-H63) (Or 47). The value of the total diversity (HT) obtained for 20 accessions of T. cocoa by means of RAPD was of 0.636.El presente estudio consistió en determinar la diversidad genética basada en los marcadores RAPD´s (Random Amplification of Polymorphic DNA) de 20 accesiones de cacao (Theobroma cacao L.) de la variedad Nacional, con características de productividad, y niveles de resistencia, susceptibilidad y tolerancia a las principales enfermedades causadas por hongos como Ceratocistys fimbriata, Moniliophtora roreri y Crinipelis perniciosa. Este germoplasma de cacao se encuentra localizado en el Centro de Cacao de Aroma Tenguel, en la Finca Experimental �La Buseta� propiedad de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo. La extracción de ADN se la realizó utilizando el protocolo de Doyle & Doyle (1990) con algunas modificaciones. 14 oligonucleótidos fueron utilizados para la obtención de marcadores RAPD´s, de los cuales 9 amplificaron productos reproducibles OPA-15, OPC-07, OPC-9, OPC-4, OPC-3, OPC-1, OPA-12 OPC-13 y OPA-7. Los productos de amplificación fueron migrados en geles de agarosa al 1.2% a 90 voltios por una hora. Los marcadores moleculares fueron analizados por medio de una matriz de datos binarios para calcular las distancias genéticas. Los nueve cebadores utilizados generaron 67 bandas de las cuales 59 (88%) fueron polimórficas. El dendrograma mostró dos grupos A y B, en el grupo A se incluyo dos accesiones, y en el grupo B se encuentran los 18 restantes el cual incluye 2 subgrupos B1 y B2 en el subgrupo B1 se incluye la accesión (L-22-H-40), y en el subgrupo B2 están incluidas las accesiones que poseen características de productividad. El nivel de diversidad más alto se obtuvo con los oligonucleótidos OPC 04 (0.80), OPC 07 (0.82). El cebador OPC 01 (0.37) reportó el nivel más bajo. Las accesiones (L-22-H-40) (O.75), (L-34-H-07) (0.86) y el (L-42-H-60) (0.72) presentaron los niveles de variabilidad más altos, siendo los valores más bajos los mostrados por las accesiones (L-26-H-64) (O.48) y (L-23-H63) (O.47). El valor de la diversidad total (HT) obtenida para las 20 accesiones de T. cacao mediante RAPD fue de 0.636

Evaluación de la Dúplex PCR para el diagnóstico simultáneo de Mycobacterium spp. y Brucella spp. en bovinos

Tuberculosis and brucellosis remain important causes of morbidity and mortality in many countries, for the detection of both diseases requires efficient and sensitive tool for effectuate the diagnosis. This study was aimed to evaluate and compare the duplex PCR versus the nested PCR, for detection of Brucella spp. (BR) and Mycobacterium spp. (TB). A total of 100 samples of tissues from tracheo-bronchial lymph nodes, bovine lung and bacterial isolate as positive controls were used. Were evaluated ten combinations of primers which were designed to flank the segment of the 16S rRNA sequence (RB) and antigen gen MPB70 (TB), the best result for the Duplex PCR was obtained with the primers Bru-2F/Bru-2R for BR and Tub-1F/Tub-N-R for TB. The amplification of the products was 225 and 230-bp respectively. In order to compare the results of the proposed technique, all samples were initially analyzed and compared between PCR and nested PCR (Kappa, k = 0.85) and the concordance between Duplex PCR and nested PCR (k = 0.88) for the two bacteria was very good.La tuberculosis y la brucelosis siguen siendo causas importantes de morbilidad y mortalidad en muchos países, para la detección de ambas enfermedades se requieren de herramientas eficientes y sensibles para efectivizar el diagnóstico. Este trabajo fue dirigido a evaluar y comparar la técnica de Dúplex PCR frente a la PCR anidada, para la detección de Brucella spp. (BR) y Mycobacterium spp. (TB). Se utilizó un total de 100 muestras de tejidos a partir de nódulos linfáticos traqueo bronquiales, pulmón de bovinos y, aislados bacterianos de TB y BR como controles positivos. Diez combinaciones de iniciadores dirigidos a flanquear un segmento de la secuencia 16S ARNr (BR) y el gen antígeno MPB70 (TB) fueron evaluados, el mejor resultado para la Dúplex PCR se logró con los iniciadores Bru-2F/Bru-2R para BR y para TB, Tub-1F/Tub-N-R. Los productos de amplificación fueron de 225 y 230-pb respectivamente. A fin de potencializar los resultados de la técnica propuesta, todas las muestras fueron inicialmente analizadas y comparadas entre la PCR simple y la PCR anidada (Kappa, k = 0,85) y, la concordancia entre los resultados obtenidos con la PCR anidada y la Dúplex PCR (k = 0,88), para las dos bacterias fue muy buena

Propagación Vegetativa de Plátano y Banano con la Aplicación de Benzilaminopurina (6-BAP) y Ácido Indolacetico (AIA).

In the vegetative propagation of two varieties of Banana (Valery and Orito) and one of Palntein (Barraganete), it was put under different hormonal treatments, to evaluate the number of buds, concentration 30 mg L-1 of BAP reached the greater average, with 2.36 appear for all the varieties. In length and diameter of buds, the concentration that obtained the greater average was C0, not being differences between the concentrations of 6-BAP and AIA. The variety that showed the greater length and diameter of buds was the Orito banana tree with 55.65 and 2.97 cm, respectively. The greater percentage of high vigor of bud was 40 mg L-1 BAP + 12 mg L-1 AIA with 24.17%; the greater percentage of average vigor reached 30 mg L-1 BAP and without hormone with 72.22%. The survival of stocks the varieties Barraganete and Orito presented/displayed the 100% of alive stocks, surpassing to the banana tree Valery who obtained an average of 91.67%.En la propagación vegetativa de dos variedades de Banano (Valery y Orito) y una de Plátano (Barraganete), se sometió a diferentes tratamientos hormonales, para evaluar el número de brotes, la concentración 30 mg L-1 de BAP alcanzó el mayor promedio, con 2.36 brotes para todas las variedades. En longitud y diámetro de brotes, la concentración que logró el mayor promedio fue C0, no encontrándose diferencias entre las concentraciones de 6-BAP y AIA. La variedad que presentó la mayor longitud y diámetro de brotes fue el banano Orito con 55.65 y 2.97 cm, respectivamente. El mayor porcentaje de vigor alto de brote lo demostró el tratamiento con 40 mg L-1 BAP+ 12 mg L-1 AIA con 24.17%; el mayor porcentaje de vigor medio lo alcanzó el tratamiento con 30 mg L-1 BAP y sin hormona con 72.22%, la supervivencia de cepas, en las variedades Barraganete y Orito presentaron el 100% de cepas vivas, superando al banano Valery quien obtuvo un promedio de 91.67%