The use of insulin gel in skin lesions of hyperglycemic mice

Orientador: Maria Helena de Melo LimaTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de EnfermagemResumo: O reparo tecidual é um processo biológico, complexo e dinâmico. Na presença do Diabetes Mellitus (DM), o processo de cicatrização sofre uma alteração devida principalmente a respostas imunológicas locais e sistêmicas prejudicadas. Neste contexto, o uso tópico de insulina é um tratamento promissor, pois pode i) modular a fase inflamatória, ii) estimular a proliferação de fibroblastos, e iii) favorecer outras fases do processo de cicatrização, acelerando o processo e melhorando a qualidade do tecido cicatricial. OBJETIVO: Analisar os mecanismos moleculares e celulares do reparo tecidual de camundongos hiperglicêmicos em tratamento tópico com gel de insulina. MATERIAIS E MÉTODOS: estudo realizado com animais hiperglicêmicos (n=48) com lesões cutâneas divididos em dois grupos: 1. grupo controle (CTRL), tratados com gel placebo sem insulina; e 2. grupo insulina (INS), tratados com gel de insulina. O DM foi induzido com estreptozotocina 5x50mg intraperitoneal e as lesões na região dorsal foram tratadas diariamente. Os tecidos da região lesada foram retirados no 4°, 7°, 10º e 14° dias pós-lesão para análises. O processo de cicatrização foi avaliado por: 1. morfometria das feridas; 2. histologia (hematoxilina & eosina); 3. presença de fibras de colágeno usando a coloração de PicroSirius; 4. expressão das citocinas anti-inflamatórias IL4 e IL-10, e das citocinas pró-inflamatórias IL-1ß , IL-6, TNFa e MCP-1 por Bioplex; 5. expressão do VEGF rec1, VEGF e Arginase I por Western Blot; 6. quantificação das proteínas da via de sinalização de insulina IR-ß, IRS-1, p44/42MAPK, AKT123 e GSK3 por Western Blot; e 7. pela imunomarcação dos anticorpos Arginase I e TNFa As análises estatísticas foram realizadas por meio do teste t-Student, considerando um nível de significância de p<0.05 (Intervalo de Confiança de 95%). Este estudo foi aprovado pela Comissão de ética no Uso de Animais da Universidade Estadual de Campinas (n. 4234-1). RESULTADOS: Os animais nos grupos CTRL e INS não apresentaram alterações nas médias iniciais e finais de peso, assim como o gel de insulina não alterou os níveis de glicose séricos dos animais hiperglicêmicos. A macroscopia das lesões dos grupos experimentais não revelou diferença entre os grupos, mas a análise microscópica mostrou que o gel de insulina estimulou o início mais precoce da fase inflamatória no grupo INS, com diminuição do edema no dia 4, formação do tecido de granulação mais organizado no dia 7, reepitelização orientada e organizada no dia 10, bem como presença de folículos capilares no dia 14. Houve também uma maior quantidade, organização e intensidade de fibras de colágeno no dia 14 no grupo INS. Em comparação, o grupo CTRL apresentou uma maior quantidade de edema no dia 4, tecido de granulação menos organizado no dia 7, carência de reorganização do tecido epitelial no dia 10 e ausência de folículos capilares com menor quantidade e organização das fibras de colágeno no tecido cicatricial do dia 14. Ocorreu modulação das citocinas anti-inflamatórias IL4 e IL10 em INS no dia 10, assim como maior expressão de Arginase I, VEGF rec1 e VEGF no dia 10 em INS comparados a CTRL, indicando fase proliferativa mais precoce com o uso do gel de insulina. Em INS a ativação da via de sinalização da insulina pelo gel de insulina ocorreu via IRß, IRS1 e GSK3 no dia 10 e AKt e IRS-1 no dia 14. A expressão significativa e a imunomarcação de TNFa na epiderme em INS no dia 10 sugerem uma associação a presença de folículos capilares neste mesmo grupo no dia 14, contudo mais pesquisas devem ser realizadas para confirmarem este achado. CONCLUSÃO: O gel de insulina para uso tópico modulou a fase inflamatória e a expressão de citocinas anti-inflamatórias em INS, o que favoreceu a deposição de fibras de colágeno e acelerou o processo de cicatrização de feridas no tecido epitelial em camundongos hiperglicêmicosAbstract: Tissue repair is a biological process, complex and dynamic. In the presence of Diabetes Mellitus (DM), the healing process is altered mainly due to impaired local and systemic immune responses. In this context, the topical use of insulin is a promising treatment, since it may i) modulate the inflammatory phase, ii) stimulate the proliferation of fibroblasts, and iii) favor other stages of the healing process, accelerating the process and improving tissue quality scarring. OBJECTIVE: To analyze the molecular and cellular mechanisms of tissue repair of hyperglycemic mice in topical insulin gel treatment. MATERIALS AND METHODS: a study with hyperglycemic animals (n = 48) with cutaneous lesions divided into two groups: 1. control group (CTRL), treated with placebo gel without insulin; and 2. insulin group (INS) treated with insulin gel. DM was induced with intraperitoneal streptozotocin 5x50mg and lesions in the dorsal region were treated daily. The tissues of the injured region were removed at the 4th, 7th, 10th and 14th post-injury days for analysis. The healing process was evaluated by: 1. morphometry of the wounds; 2. histology (hematoxylin & eosin); 3. presence of collagen fibers using PicroSirius staining; 4. expression of the anti-inflammatory cytokines IL4 and IL-10, and the pro-inflammatory cytokines IL-1ß, IL-6, TNFa and MCP-1 by Bioplex; 5. expression of VEGF rec1, VEGF and Arginase I by Western Blot; 6. protein quantification of the insulin signaling pathway IR-?, IRS-1, p44 / 42MAPK, AKT123 and GSK3 by Western Blot; and 7. by the immunostaining of the antibodies Arginase I and TNFa Statistical analyzes were performed using Student's t-test, considering a significance level of p <0.05 (Confidence Interval of 95%). This study was approved by the Ethics Committee on the Use of Animals of the State University of Campinas (n. 4234-1). RESULTS: Animals in the CTRL and INS groups did not present alterations in the initial and final means of weight, as the insulin gel did not alter the glucose levels of the hyperglycemic animals. Macroscopy of the lesions of the experimental groups revealed no difference between groups, but microscopic analysis showed that insulin gel stimulated the earlier onset of the inflammatory phase in the INS group, with decreased edema on day 4, formation of the more granular tissue organized on day 7, re-epithelialization oriented and organized on day 10, as well as presence of hair follicles on day 14. There was also a greater amount, organization and intensity of collagen fibers at day 14 in the INS group. In comparison, the CTRL group presented a greater amount of edema at day 4, less organized granulation tissue at day 7, lack of epithelial tissue reorganization at day 10, and absence of capillary follicles with less amount and organization of the collagen fibers in the tissue cicatricial cytokine on day 14. Modulation of the IL4 and IL10 anti-inflammatory cytokines was performed in INS at day 10, as well as increased expression of Arginase I, rec1 VEGF and VEGF at day 10 in INS compared to CTRL, indicating earlier proliferative phase with the use of the insulin gel. In INS, activation of the insulin signaling pathway by insulin gel occurred via IRß, IRS1 and GSK3 on day 10 and AKt and IRS-1 on day 14. Significant expression and TNF? immunoreactivity in the epidermis in INS on day 10 suggest an association with the presence of hair follicles in the same group on day 14, however further research should be performed to confirm this finding. CONCLUSION: Insulin gel for topical use modulated the inflammatory phase and the expression of anti-inflammatory cytokines in INS, which favored the deposition of collagen fibers and accelerated the healing process of wounds in the epithelial tissue in hyperglycemic miceDoutoradoCuidado e Inovação Tecnológica em Saúde e EnfermagemDoutora em Ciências da Saúde38-P-4071/2019CAPE

Cultural adaptation and validation of the Nurse's Knowledge of High-Alert Medication instrument into brazilian culture

Orientador: Maria Helena de Melo LimaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de EnfermagemResumo: Medicamentos de Alta Vigilância apresentam estreito risco terapêutico e possuem um maior risco de causar dano significativo ao paciente em decorrência da falha de utilização, tornando-se os medicamentos de maior preocupação quando associados aos erros de medicação. Esta definição não indica que os erros associados a estes fármacos são mais frequentes, mas que as consequências para os pacientes de um erro associado a tais medicamentos são geralmente mais graves podendo provocar lesões permanentes ou fatais aos pacientes. O conhecimento insuficiente da enfermagem é considerado um dos fatores que contribuem para o erro na administração de medicamento. O instrumento Nurse¿s Knowledge of High-Alert Medication avalia o conhecimento de enfermeiros sobre os Medicamentos de Alta Vigilância, utilizando escala dicotômica, no qual o respondente informa verdadeiro ou falso para as afirmativas dos domínios: conhecimento dos enfermeiros sobre administração e regulamentação dos Medicamentos de Alta Vigilância. Deste modo, considerando a importância da mensuração do conhecimento dos enfermeiros sobre os Medicamentos de Alta Vigilância na oferta de serviços com qualidade e segurança ao paciente associado à inexistência no Brasil de um instrumento de medida válido com tal finalidade, o presente estudo teve por objetivo traduzir, adaptar e validar o instrumento Nurse¿s Knowledge of High-Alert Medication para a cultura brasileira e verificar a praticabilidade do instrumento traduzido e adaptado. Para desenvolver a adaptação do instrumento foi utilizado o referencial metodológico preconizado pela literatura, o qual envolve as etapas de tradução para o idioma alvo, síntese das traduções, retro-tradução, avaliação por um comitê de juízes e realização de pré-teste. Com relação às propriedades psicométricas, a confiabilidade da versão brasileira do questionário foi verificada por meio da consistência interna pelo coeficiente de confiabilidade de Kuder Richardson-20 (KR- 20) e a validade de constructo pela técnica de grupos conhecidos utilizando o teste não paramétrico de Mann-Whitney e o teste t de Student. O instrumento Nurse¿s Knowledge of High-Alert Medication traduzido e adaptado para a cultura brasileira foi considerado válido, apresentando validade de constructo discriminante (p< 0,001) e consistência interna aceitável (0,55 na parte A e 0,60 na parte B). Conclusão: A versão brasileira do instrumento Nurses¿ knowledge of high-alert medications encontrou resultados satisfatórios no processo tradução, adaptação e validação da escala, confirmando a sua adequação para estudos na áreaAbstract: High-Alert Medication have narrow therapeutic risks and an increased risk of causing significant harm to the patient due to the use of failure, becoming the most concern medications when associated with the medication errors. This definition does not indicate that the errors associated with these drugs are more frequent, but the consequences for patients of an error associated with such drugs are usually more severe and it can cause permanent injury or death to patients. The insufficient knowledge of nursing is considered one of the factors contributing to the error in drug administration. The instrument Nurses 'Knowledge of High-Alert Medication evaluates the knowledge of nurses about the high-alert medication using dichotomous scale, in which the answerer states true or false to the assertions of the domains: nurses' knowledge of administration and regulation of high-alert medication. Thus, considering the importance of nurses' knowledge measurement about the High-Alert Medication in the provision of quality and safety services to the patient, associated with the lack in Brazil of a valid measurement instrument for such purpose, the present study had the aim to translate, adapt and validate the Nurse's Knowledge of High-Alert Medication instrument for Brazilian culture and verify the feasibility of the translated and adapted instrument. Order to develop this research, it was used the recommended methodological references in the literature, which includes the steps of: instrument translation into the target language, synthesis of translations, back-translation, evaluation by a committee of judges and implementation of pre-test. Regarding the psychometric properties, reliability of the Brazilian version of the questionnaire was verified using internal consistency by Kuder Richardson-20 reliability coefficient (KR- 20) and construct validity discriminant by the technique of known groups using the non-parametric test Mann-Whitney. The instrument Nurses' Knowledge of High-Alert Medication translated and adapted to the Brazilian culture was considered valid, with discriminant validity (p <0.001) and acceptable internal consistency (0.55 in Part A and 0.60 in Part B). Conclusion: The Brazilian version of the instrument Nurses' knowledge of high-alert medications has found satisfactory results in the process translation, adaptation and validation of the scale, confirming its suitability for studies in the areaMestradoEnfermagem e TrabalhoMestra em Enfermage