마이코 페놀산에 의한 췌도세포주 사멸의 기전

목적: Mycophenolic acid (MPA)는 췌장이식을 포함한 다양한 종류의 장기이식에 사용되는 면역억제제로 inosine monophosphate dehydrogenase (IMPDH)의 선택적이고 비경쟁적인 억제제이나 췌도세포주에서는 세포 사멸을 유도한다고 알려져 있다. 본 연구에서는 인슐린을 분비하는 췌도 세포주인 HIT-T15 세포를 사용하여, MPA가 세포 사멸을 일으키는 기전을 규명하고자 하였다. 방법: 세포주는 American Type Culture Collection에서 구입하였으며 10% fetal bovine serum이 포함된 RPMI-1640을 사용하여 배양하였다. 세포 활성은 methylthiazoletetrazolium (MTT) assay, 세포 사멸은 annexin V와 PI 염색법, mitogen-activated protein kinase (MAPK) 활성화와 caspase-3 분절은 Western blot 분석으로 측정하였다. 결과: MPA 1μM과 10μM을 처리하였을 때 MTT, caspase-3 분절 그리고 annexin V 염색이 24시간에 농도 의존적으로 증가하였으며, 이는 외부에서 함께 투여한 guanosine 500μM에 의하여 부분적으로 회복되었으나 adenosine 500μM 투여에서는 변화가 없었다. 또한 MPA는 extracellular-regulated protein kinase (ERK), p38 MAPK 그리고 c-jun N-terminal protein kinase (JNK)의 활성화를 8시간과 24시간에서 증가시켰고 guanosine 투여는 이를 부분적으로 회복시켰다. ERK의 억제제인 PD98059, p38 MAPK 억제제인 SB203580 그리고 JNK 억제제인 SP600125는 MPA와 함께 처리하였을 때 각 시간에 증가된 MAPK 활성을 감소시켰지만 MTT와 caspase-3 분절을 살펴본 결과 PD98059는 영향이 없었으며 SB203580은 세포사멸을 증가시켰고, SP600125만이 MPA가 일으킨 세포 사멸을 일부 환원시켰다. Pan-caspase 억제제인 Z-VAD-FMK 또한 세포 사멸을 환원시켰다. 결론: MPA는 MAPK 활성을 IMPDH 의존적으로 증가시키지만, ERKl와 p38 MAPK와는 상관없이, JNK 활성화를 통한 caspase-3 증가의 경로로 췌도 세포 사멸을 유도함을 알 수 있었다.ope

Mycophenolic Acid Inhibits Oleic Acid–Induced Vascular Smooth Muscle Cell Activation by Inhibiting Cellular Reactive Oxygen Species

BACKGROUND: Vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation and matrix protein accumulation play important roles in the development and progression of chronic allograft vasculopathy. Mycophenolic acid (MPA) inhibits various types of mesenchymal cell proliferation and cellular reactive oxygen species (ROS) are involved in the anti-proliferative effect of MPA. In this study, we investigated the effects of MPA on oleic acid (OA)-induced VSMC proliferation and the role of ROS in this process. METHODS: Primary VSMCs from Sprague-Dawley rats were stimulated with 100 microM OA, with or without MPA (0.1- 10 microM) or 5 mM N-acetylcysteine (NAC) for one hour prior to the addition of OA. Cell proliferation was measured by methylthiazoletetrazolium (MTT) assays, proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression, and fibronectin secretion by Western blot analysis, and dichlorofluorescein (DCF)-sensitive cellular ROS by fluorescence-activated cell scanning (FACS). RESULTS: OA (100 microM) increased cell proliferation, as measured by MTT (by 1.6-fold), PCNA expression, fibronectin secretion, and cellular ROS (by 1.6-fold). Treatment with MPA dose-dependently inhibited OA-induced VSMC proliferation, fibronectin secretion, and cellular ROS. Treatment with 5 mM NAC also inhibited OA-induced rat VSMC activation. CONCLUSIONS: These results suggest that MPA inhibits OA-induced VSMC proliferation and matrix protein synthesis partially by inhibiting cellular ROS.ope