利用MALDI-TOF质谱技术研究胰岛素水解和酶切过程

利用海牛卵制备的模拟微量混合内切酶体系 ,用基质辅助激光解吸电离 -飞行时间 (MALDI-TOF)质谱技术研究了胰岛素在不同酸碱度和还原条件下的水解和酶解过程。实验结果为研制具有高生物利用度的胰岛素纳米粒口服制剂及选择具有适当耐酸碱及还原特性的包装材料提供了科学依据

MALDI-TOF质谱、电泳和透射电子显微镜技术研究魟鱼肝铁蛋白H和L亚基特性

小批量制备质谱纯魟鱼肝铁蛋白(liver ferritin of Dasyatis akajei,DALF),以透射电子显微镜术(TEM)测定DALF、蛋白壳和铁核的分子尺寸。SDS-PAGE技术指出,DALF由H和L两种不同类型的亚基组成。采用肽质量指纹图谱(PMF)技术进一步佐证H和L亚基类型和同源性。氧化还原剂中性红、劳氏紫、甲基紫精和pH1.5酸度均无法削弱DALF的H-L和L-L亚基之间的相互作用强度、并解吸出L亚基离子,供MALDI-TOF质谱仪分析。通过增加激光强度和降低基质pH途径,可直接分析DALF的H和L亚基的分子量,指出DALF中H-L和L-L亚基之间的相互作用强度明显高于H-H亚基类型

质谱和动力学技术研究胰岛素-多糖纳米粒稳定性和释放胰岛素速率

以海藻酸钠(sodium alginate,SA)和壳聚糖(chitosan,CS)为纳米粒包被材料,构建胰岛素(insulin,INS)多糖纳米粒.采用基质辅助激光解吸电离飞行时间(Matrix-assisted laser desorption ionization/time of flight,MALDI-TOF)质谱技术研究若干化学因素影响INS-多糖纳米粒的稳定性.选用电子光谱技术研究INS-多糖纳米粒控释INS速率及动力学特性.实验结果表明,INS-SA纳米粒在Tris-HCl缓冲液(pH7.2)和醋酸介质中均呈不稳定状态,易释放INS;而INS-CS纳米粒在Tris-HCl缓冲液中呈较为稳定状态,其释放INS速率明显慢于INS-SA纳米粒,并遵循一级反应动力学过程.INS-SA和INS-CS纳米粒均能有控制INS释放速率能力,但两者释放速率明显不同,其速率可分为快速与慢速释放方式.CS比SA更适合于作为包被材料研制INS-多糖纳米粒口服制剂

Mass Characteristics and Stability of the Ferritin and the Polysaccharide Nanoparticles of Insulin with MALDI-TOF Mass Spectrometry

铁蛋白是一种最常见的水溶性蛋白质，它不仅具有储存和释放铁的生理功能，而且与人类及动物的各种疾病的形成和发展有着不可分割的联系。深入研究铁蛋白的结构与功能，其分析技术和科研成果将对诊断和治疗人类各种疾病起着极其重要的作用。拓展铁蛋白新功能，可服务于医学科学、环境与工程和材料科学等其它研究领域，研究意义重大。 本研究从魟鱼肝中分离出魟鱼肝铁蛋白（LiverferitinofDasyatisakajei，DALF），根据DALF耐热性特点，采用热变性技术、离子交换层析技术（DEAE-52）、分子筛层析技术（G-25、SephacrylS-300）和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术制备电泳纯铁蛋白和不同多聚体...Ferritin is the most common hydrophilic iron-storage protein. Ferritin not only plays very important functions in organisms, but also has very direct relations with many kinds of diseases. So studies on the functions and structure of ferritin can lead to diagnosis and treatment of human diseases and development of ferritin to be used in medicine, environment science, engineering and material scien...学位：理学硕士院系专业：生命科学学院生物学系_生物化学与分子生物学学号：20002603

适合于MALDI-TOF质谱分析蛋白质及亚基的SDS-PAGE技术

介绍适合于MALDI TOF质谱分析蛋白质及亚基的SDS PAGE技术,其主要特点是采用铜染色法在凝胶板上直接显色且采用有机溶剂萃取电泳纯的蛋白质和亚基,并用MALDI TOF质谱技术直接分析它们的分子量.本技术具有简便、快速和损失率小等优点,尤其适合于蛋白质组学、利用数据库分析蛋白质同源性和确定蛋白质种类等结构信息的研究,是一种较为理想的SDS PAGE和MALDI TOF质谱非在线联用分析技术

在镉盐胁迫下扇贝鳃组织应激蛋白的研究

采用透射电子显微镜观察了虾夷盘扇贝(Patinopecten yessoensis)鳃组织细胞的超微结构,发现镉盐能胁迫鳃组织中的腮丝、细胞核和线粒体产生病变.利用双向凝胶电泳(2D-PAGE)优化分离扇贝鳃组织的全蛋白,获得约800个蛋白质斑点,并筛选出37个由于镉盐胁迫而产生的差异蛋白质斑点.选用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALD I-TOF MS)技术和数据库检索鉴定差异蛋白,结果发现7个与镉毒性密切相关的蛋白质,即热休克蛋白70和β-淀粉酶等上调蛋白质及原肌球蛋白、肌动蛋白和钙活化核苷酸酶1等下调蛋白质.此外,还发现转录调节子Crp/Fnr家族为低表达蛋白质,而ABC转运子为高表达蛋白质.在这些差异蛋白中,部分蛋白质适合作为连续监测流动海水中镉污染程度及评价其危害性的蛋白指示物

EFFECTS OF SOIL DRY-WET CHANGES AND AQUASORB TREATMENT ON PLANT GROWTH AND WATER USE EFFICIENCY

在盆栽玉米、大豆和辣椒的生长阶段进行高水分 (土壤田间持水量FC 10 0 %～ 80 % )、中水分 (FC 70 %～5 5 % )、低水分 (FC 5 0 %～ 40 % )处理 ,后复水至充分供水 .分析 3种植物在干湿变化中的生长和水分利用效应 ,比较土壤施用保水剂的效果 .结果发现 ,水分处理期间 3种植物生长变化与水分供给紧密相关 ,单株干重均表现为 :m (高水分 ) >m(中水分 ) >m(低水分 ) .但水分利用效率 (WUE)效应不一 ,中水分处理下玉米和大豆WUE为 2 0 .2gkg-1和3 .70gkg-1,分别比高水分处理还高 5 9.1%和 2 9.7% .水分处理又复水后 15d ,玉米在中水分处理复水的单株干重增加 39.6 3g ,是一直充分供水处理的 175 .0 % ,WUE达到 13 .3gkg-1,呈现超补偿生长效应和水分利用效率效应 .辣椒在中水分处理后复水 ,其青椒产量较高水分处理增加 6 % ,呈现产量补偿效应 .土壤加入保水剂可明显提高作物在低土壤水分条件下WUE .图 4表 1参 1

Stress Proteins of Gill Tissue in Patinopecten yessoensis Exposed to Cadmium Salt

【中文摘要】采用透射电子显微镜观察了虾夷盘扇贝(Patinopecten yessoensis)鳃组织细胞的超微结构,发现镉盐能胁迫鳃组织中的腮丝、细胞核和线粒体产生病变.利用双向凝胶电泳(2D-PAGE)优化分离扇贝鳃组织的全蛋白,获得约800个蛋白质斑点,并筛选出37个由于镉盐胁迫而产生的差异蛋白质斑点.选用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALD I-TOF MS)技术和数据库检索鉴定差异蛋白,结果发现7个与镉毒性密切相关的蛋白质,即热休克蛋白70和β-淀粉酶等上调蛋白质及原肌球蛋白、肌动蛋白和钙活化核苷酸酶1等下调蛋白质.此外,还发现转录调节子Crp/Fnr家族为低表达蛋白质,而ABC转运子为高表达蛋白质.在这些差异蛋白中,部分蛋白质适合作为连续监测流动海水中镉污染程度及评价其危害性的蛋白指示物.【Abstract】The organelle ultrastructure in gill tissue was observed by transmission electron microscope(TEM) in Patinopecten yessoensis (PY), finding the pathological changes of gill filaments, nucleus and mitochondria in the tissue exposed to CdCl2(10 mg/L). The proteome of gill tissue in PY was perfectly separated by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis(2D-PAGE), obtaining approximately 800 protein spots, and selecting 37 differential spots intimidated with cadmium salt in the gel. In addition, these differential proteins were identified by both matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry(MALDI-TOF MS) and database searching. The results showed that 7 differential proteins tightly connected with the cadmium toxicity were considered to be up-regulated proteins such as heat shock protein 70 and beta-amylase, and down-regulated proteins such as tropomyosin, actin and calcium activated nucleotidase 1. Moreover, transcriptional regulator Crp/Fnr family showed low expression, while ABC transporter showed high expression. We suggest that these differential proteins in part have strong potentials to be utilized as protein biomarkers for monitoring the pollution level of cadmium continuously and evaluating its risk to organisms

80MeV/u~(12)C~(6+)离子辐照小鼠头部对脾脏细胞周期分布的影响

研究重离子辐照小鼠头部对脾脏细胞周期分布的影响,为重离子放射治疗癌症和太空防护提供基础数据。80MeV/u能量的12C6+对BALB/c小鼠头部给以0、0.5、1、2、4、10Gy的照射,用流式细胞仪测脾脏细胞周期分布。重离子辐照后36h,小鼠脾脏细胞S期细胞随着辐照剂量的增加显著减少(p<0.05);0.5Gy组、4Gy组和10Gy组出现G1/G0期阻滞明显阻滞(p<0.05),1Gy组和2Gy组无显著变化(p﹥0.05);0.5Gy组G2/M期细胞显著减少(p<0.01),其它剂量组明显阻滞(p<0.05)。重离子辐照小鼠头部对小鼠脾脏细胞周期分布有明显影响