Mecanismos involucrados en la duración de la respuesta inmune humoral al virus de la fiebre aftosa

Tesis para obtener el grado de Doctor en área de Ciencias Biológicas, de la Universidad de Buenos Aires, en 1996.La fiebre aftosa constituye un serio problema sanitario que afecta a las especies biunguladas que genera severas consecuencias económicas a nivel mundial. Las vacunas formuladas con virus inactivado como antígeno (Ag) inducen respuestas de anticuerpos seroneutralizantes (AcN) de corta duración y es necesaria la revacunación periódica. La infección experimental en ratón adulto genera una continua e intensa respuesta de AcN tal como sucede en el huésped natural. Esta prolongada síntesis de Acs anti-VFA hace del modelo murino un excelente sistema para el estudio de los mecanismos involucrados en una prolongada respuesta humoral. Aunque este fenómeno es conocido desde hace tiempo, las bases inmunológicas responsables de la prolongada inmunidad inducida luego de la infección se encuentran aún sin dilucidar. Con la intención de comprender la causa de la respuesta inmune humoral al VFA, la primera parte de este trabajo de tesis estuvo dirigida a aclarar si el mantenimiento de los niveles de Acs puede ser explicado por un fenómeno de infección persistente del individuo, o mediante una persistencia antigénica mediada por células presentadoras de antígeno (CPA). La segunda parte del trabajo de tesis fue dirigida a estudiar los mecanismos de acción de dos efectivos inmunomoduladores (Avridine -AVR- y la pared de Mycobacterium -PCM) en la inducción de una prolongada respuesta humoral. Es importante enfatizar que los ensayos de transferencia utilizados en este trabajo permitieron acotar el sistema a los esplenocitos transferidos, debido a que estas células resultaron suficientes para inducir una prolongada respuesta humoral en los animales receptores normales (Tabla 1). La hipótesis de la existencia de una infección persistente fue descartada mediante la utilización de varios métodos, en especial la falta de detección del genoma utilizando un ensayo de PCR cuya sensibilidad es de 10-3 DIRL 50%.(Tabla 3 A y B). Además, el hecho de que haya sido posible obtener resultados similares a través de la inmunización de los animales dadores con antígenos inertes corroboró que la replicación viral definitivamente no es una condición indispensable para que se induzca una prolongada respuesta humoral (figura 6B). La transferencia de esplenocitos irradiados provenientes de animales infectados a animales receptores presensibilizados y negativizados (inmunizados con bajas dosis de virus inactivado) permitió la detección funcional de CPA específicas para el virus aftoso. La inhibición de la presentación antigénica (PA) in vitro, los ensayos de inhibición de la PA in vivo y el establecimiento de una correlación entre la capacidad de presentar el Ag y el título de Acs del animal dador corroboraron que, en el modelo utilizado, la presencia de CPA es el mecanismo que media la prolongada respuesta humoral anti-VFA que se observa en animales que fueron infectados. Dos datos experimentales merecen ser destacados: (i) Las células B son suficientes para la producción del fenómeno (figura 16B). (ii) Las CPA fueron capaces de permanecer en el animal dador por lo menos 365 días después de la infección (figura 15 B) Conociendo que la presencia de CPA es el mecanismo que media la prolongada respuesta humoral anti-VFA en los animales infectados, se analizó: la capacidad de inducir CPA en los animales inmunizados con diferentes formulaciones vacunales. Los ensayos realizados demostraron que tanto las CPA que provenían de animales infectados así como las obtenidas de ratones que fueron inmunizados con las diferentes formulaciones fueron capaces de inducir Acs detectables por ELISA. Sin embargo, solamente los esplenocitos de animales infectados o inmunizados con la vacuna inmunomodulada con AVR indujeron Acs de tipo neutralizante en los ratones receptores presensibilizados (figura 20 B). La utilización del ensayo de doble transferencia (figura 22) demostró que la presencia de Ag circulante en el animal dador no es necesaria para el mantenimiento de las CPA (figura 24). Estos resultados son coincidentes con la continua presencia de CPA en los animales infectados (hasta los 365 días post-infección) en los cuales no es posible encontrar antígeno viral ni partículas infecciosas. Se utilizó un sistema de PA donde el antígeno a ser considerado es mucho más simple en términos de cantidad de determinantes antigénicos para intentar explicar la diferencia observada entre las respuestas inducidas por las distintas vacunas utilizadas. Los esplenocitos extraídos de los animales inmunizados con dosis crecientes correspondiente a la secuencia 135-160 de VP1 del VFA O1C (P1) indujeron respuestas correlativamente incrementadas de Acs detectables primero, por ELISA y, posteriormente, por SN. Estos resultados apuntalan la hipótesis que sostiene que las diferencias entre la inducción de anticuerpos neutralizantes y aquellos detectados solamente por ELISA puede ser meramente debida a la masa antigénica presentada. Posteriormente, se analizó el efecto de los dos inmunomoduladores en un posible procesamiento diferencial de las distintas porciones del P1 Los resultados demostraron que, en efecto, estas diferencias existen, ya que los patrones de reactividad demostrados por los sueros de los animales infectados e inmunizados con AVR resultaron similares y cualitativamente diferentes a aquellos presentados por los sueros de los animales inmunizados con PCM o el vehículo oleoso per se (figura 25). Esto sustentaría que adicionalmente a un fenómeno de tipo cuantitativo, también existe un factor cualitativo como explicación a las diferencias encontradas en la respuesta humoral inducida en los animales receptores de células provenientes de dadores inmunizados con diferentes inmunomoduladores. La estrecha correlación entre la presencia y actividad de las CPA específicas para VFA, y los titulos de Acs observados en los animales que fueron estimulados antigénicamente de la forma más diversa con (infectados experimentalmente o inmunizados con virus inactivo bajo muy diferentes condiciones), poderosamente sugiere que el mecanismo involucrado en el mantenimiento de la respuesta inmune es la presencia de CPA reestimulando en forma permanente la producción de Acs anti-VFA. Estos resultados son de importancia para el diseño y desarrollo de nuevas vacunas en las cuales se debería principalmente focalizar la atención en metodologías que estimulen la inducción y un eficaz mantenimiento de CPA especificas para VFA en los individuos vacunados.Instituto de VirologíaFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentin

Incubadoras de empresas en INTA: capacidades y resultados (2008-2022)

En el INTA, como en la gran mayoría de las instituciones públicas de investigación y desarrollo (I+D), los proyectos biotecnológicos suelen obtener resultados a escala de laboratorio. Por lo general se enmarcan como tesis doctorales o de maestría articulando con becas de posgrado y dentro de un proyecto de I+D puntual, tanto de la Cartera del INTA como de los instrumentos de la Agencia. La mayoría de los proyectos biotecnológicos alcanzan el nivel de prueba de investigación de un potencial producto que no llega a desarrollarse y un número muy limitado avanza hacia una escala piloto de producción industrial.Instituto de VirologíaFil: Méndez Isla, Malena. Universidad Nacional de La Plata; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). INCUINTA. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Plant-based vaccine for livestock : key points to unleash platform translation in developing countries

Ten years ago the first plant-based vaccine was licensed (DowAgrosciences). It was only 20 years after the first report of a recombinant protein obtained through plant transformation technology. Back then, this vaccine was perceived as the first of an unlimited list of innovative products of a flourishing platform. Unexpectedly, since then, no other veterinary product based on plant molecular pharming (PMP) has reached the market. This review will reflect a transdisciplinary view of the status and challenges that the molecular farming platform faces to become a strategic solution for the agroindustrial sector of developing countries. Recent findings Plant-based veterinary vaccines (PBVV) have the potential to give answers to several challenges that animal health presents today. The urgent need to improve livestock productivity, especially in low and middle-income countries (LMIC), and the current concern about the emergence of antimicrobial resistance associated with animal production, demands new products such as inexpensive vaccines and therapeutics. Based on the translational research scheme, certain barriers that could have limited the development into products of many results obtained in the last 15 years were identified. Summary Unquestionably, the development of innovation in LMIC is a key element in the feasibility of the platform. The emergence of PPP between multiple stakeholders as a strategy to overcome the existing disconnection between academia and industry, could enable the conversion of leading vaccine candidates from the stage of proof of concept into prototypes for industry, and thereby foster ‘productization’ in the field of veterinary vaccines.Inst. de PatobiologíaFil: Perez Aguirreburualde, Maria Sol. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Petruccelli, Silvana. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos; ArgentinaFil: Bravo Almonacid, Fernando Felix. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andrés. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Development of an IgY-Based treatment to control bovine Coronavirus diarrhea in dairy calves

Bovine Coronavirus (BCoV) is a major pathogen associated with neonatal calf diarrhea. Standard practice dictates that to prevent BCoV diarrhea, dams should be immunized in the last stage of pregnancy to increase BCoV-specific antibody (Ab) titers in serum and colostrum. For the prevention to be effective, calves need to suck maternal colostrum within the first six to twelve hours of life before gut closure to ensure a good level of passive immunity. The high rate of maternal Ab transfer failure resulting from this process posed the need to develop alternative local passive immunity strategies to strengthen the prevention and treatment of BCoV diarrhea. Immunoglobulin Y technology represents a promising tool to address this gap. In this study, 200 laying hens were immunized with BCoV to obtain spray-dried egg powder enriched in specific IgY Abs to BCoV on a large production scale. To ensure batch-to-batch product consistency, a potency assay was statistically validated. With a sample size of 241, the BCoV-specific IgY ELISA showed a sensitivity and specificity of 97.7% and 98.2%, respectively. ELISA IgY Abs to BCoV correlated with virus-neutralizing Ab titers (Pearson correlation, R2 = 0.92, p < 0.001). Most importantly, a pilot efficacy study in newborn calves showed a significant delay and shorter duration of BCoV-associated diarrhea and shedding in IgY-treated colostrum-deprived calves. Calves were treated with milk supplemented with egg powder (final IgY Ab titer to BCoV ELISA = 512; VN = 32) for 14 days as a passive treatment before a challenge with BCoV and were compared to calves fed milk with no supplementation. This is the first study with proof of efficacy of a product based on egg powder manufactured at a scale that successfully prevents BCoV-associated neonatal calf diarrhea.Instituto de VirologíaFil: Bok, Marina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). INCUINTA. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnologicas; ArgentinaFil: Bok, Marina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bok, Marina. Bioinnovo S.A.; ArgentinaFil: Vega, Celina Guadalupe. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). INCUINTA. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnologicas; ArgentinaFil: Vega, Celina Guadalupe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Vega, Celina Guadalupe. Bioinnovo S.A.; ArgentinaFil: Castells, Matias. Universidad de la República. Centro Universitario de Salto. CENUR Litoral Norte. Laboratorio de Virología Molecular; UruguayFil: Castells, Matias. National Institute of Agricultural Research (INIA). Animal Health Research; UruguayFil: Colina, Rodney. Universidad de la República. Centro Universitario de Salto. CENUR Litoral Norte. Laboratorio de Virología Molecular; UruguayFil: Colina, Rodney. National Institute of Agricultural Research (INIA). Animal Health Research; UruguayFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). INCUINTA. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas (IVIT),; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Bioinnovo S.A.; ArgentinaFil: Parreño, Gladys Viviana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). INCUINTA. Instituto de Virologia e Innovaciones Tecnologicas (IVIT); ArgentinaFil: Parreño, Gladys Viviana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Parreño, Gladys Viviana. Bioinnovo S.A.; Argentin

Brucella spp. Lumazine synthase as a novel immunomodulator to produce egg yolk antibodies

Lumazine synthase from Brucella spp. (BLS) is a highly immunogenic decameric protein. It has been previously described as a carrier of peptides or proteins to increase their immunogenicity in different animal species, but its activity has never been evaluated in chickens. In this work, the use of BLS to improve the antibody response against bovine rotavirus (BRV) VP8d protein in laying hens was assessed. VP8d is the inner domain of the VP8 spike protein which preserves the sialic acid binding activity and the neutralizing epitopes present in the viral protein. Hens were immunized three times with 2 μg of VP8d alone or fused to BLS. Hens inoculated with BLSVP8d developed higher antibody titers (evaluated by ELISA and viral neutralization test) than hens immunized either with VP8d alone or the mixture of VP8d and BLS. Furthermore, IgY antibodies against BLSVP8d were able to fully protect mice against challenge with virulent BRV in a dose-depent-manner. Overall, these results demonstrate that BLS is a potent immonumodulator that enhances the antibody response in hens, thus increasing the concentration of specific IgY in the egg yolk, one of the main issues to be adressed in order to improve the use of the IgY technology.Instituto de VirologíaFil: Bellido, Demian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Chacana, Pablo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Mozgovoj, Marina Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Gonzalez, Diego. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Fundación Instituto Leloir; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Dus Santos, Maria Jose. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentin

A novel MHC-II targeted BVDV subunit vaccine induces a neutralizing immunological response in guinea pigs and cattle

Bovine viral diarrhoea virus (BVDV) is a major cause of economic loss in the cattle industry, worldwide. Infection results in reduced productive performance, growth retardation, reduced milk production and increased susceptibility to other diseases leading to early culling of animals. There are two primary methods used to control the spread of BVDV: the elimination of persistently infected (PI) animals and vaccination. Currently, modified live or inactivated vaccines are used in BVDV vaccination programmes, but there are safety risks or insufficient protection, respectively, with these vaccines. Here, we report the development and efficacy of the first targeted subunit vaccine against BVDV. The core of the vaccine is the fusion of the BVDV structural protein, E2, to a single-chain antibody, APCH, together termed, APCH-E2. The APCH antibody targets the E2 antigen to the major histocompatibility type II molecule (MHC-II) present on antigen-presenting cells. Industrial production of the vaccine is carried out using the baculovirus expression vector system (BEVS) using single-use manufacturing technologies. This new subunit vaccine induces strong BVDV-specific neutralizing antibodies in guinea pigs and cattle. Importantly, in cattle with low levels of natural BVDV-specific neutralizing antibodies, the vaccine induced strong neutralizing antibody levels to above the protective threshold, as determined by a competition ELISA. The APCH-E2 vaccine induced a rapid and sustained neutralizing antibody response compared with a conventional vaccine in cattle.Instituto de VirologiaFil: Bellido, Demian. Vetanco SA; ArgentinaFil: Bellido, Demian. Bioinnovo SA; ArgentinaFil: Baztarrica, Josefina. Vetanco SA; ArgentinaFil: Baztarrica, Josefina. Bioinnovo SA; ArgentinaFil: Rocha, Lucía Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Incuinta e Instituto de Virología; ArgentinaFil: Rocha, Lucía Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pecora, Andrea. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Incuinta e Instituto de Virología; ArgentinaFil: Pecora, Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Acosta, Mario. Vetanco SA; ArgentinaFil: Escribano, José M. Algenex; EspañaFil: Parreño, Viviana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Incuinta e Instituto de Virología; ArgentinaFil: Parreño, Viviana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Parreño, Viviana. Bioinnovo S.A.; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Incuinta e Instituto de Virología; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina.Fil: Wigdorovitz, Andres. Bioinnovo S.A.; Argentin

Foot-and-Mouth Disease: Optimization, Reproducibility, and Scalability of High-Yield Production of Virus-Like Particles for a Next-Generation Vaccine

Inactivated Foot-and-Mouth Disease (FMD) vaccine has proven to be effective in the control of the disease. However, its production has some disadvantages, including the costly biosafety facilities required for the production of huge amounts of growing live virus, the need of an exhaustive purification process to eliminate non-structural proteins of the virus in the final formulations in order to differentiate infected from vaccinated animals and variable local regulatory restrictions to produce and commercialize the vaccine. Thus, a novel vaccine against FMD that overcome these restrictions is desirable. Although many developments have been made in this regard, most of them failed in terms of efficacy or when considering their transferability to the industry. We have previously reported the use of transient gene expression in mammalian cells to produce FMD virus-like particles (VLPs) as a novel vaccine for FMD and demonstrated the immunogenicity of the recombinant structures in animal models. Here, we report the optimization of the production system by assaying different DNA:polyethylenimine concentrations, cell densities, and direct and indirect protocols of transfection. Also, we evaluated the reproducibility and scalability of the technology to produce high yields of recombinant VLPs in a cost-effective and scalable system compatible with industrial tech-transfer of an effective and safe vaccine.Estación Experimental Agropecuaria BarilocheFil: Mignaqui, Ana Clara. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias Bariloche; ArgentinaFil: Ferella, Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Cass, Brian. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadáFil Mukankurayija, Larissa. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadáFil: L’Abbé, Denis. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadáFil: Bisson, Louis. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadaFil: Sánchez, Cintia. Biogénesis-Bagó; ArgentinaFil: Scian, Romina. Biogénesis-Bagó; ArgentinaFil: Cardillo, Sabrina Beatriz. Biogénesis-Bagó; ArgentinaFil: Durocher, Yves. Human Health Therapeutics Research Center, National Research Council Canada; CanadáFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; Argentin

Development of nanobodies against Mal de Río Cuarto virus major viroplasm protein P9‑1 for diagnostic sandwich ELISA and immunodetection

Mal de Río Cuarto virus (MRCV) is a member of the genus Fijivirus of the family Reoviridae that causes a devastating disease in maize and is persistently and propagatively transmitted by planthopper vectors. Virus replication and assembly occur within viroplasms formed by viral and host proteins. This work describes the isolation and characterization of llama-derived Nanobodies (Nbs) recognizing the major viral viroplasm component, P9-1. Specific Nbs were selected against recombinant P9-1, with affinities in the nanomolar range as measured by surface plasmon resonance. Three selected Nbs were fused to alkaline phosphatase and eGFP to develop a sandwich ELISA test which showed a high diagnostic sensitivity (99.12%, 95% CI 95.21–99.98) and specificity (100%, 95% CI 96.31–100) and a detection limit of 0.236 ng/ml. Interestingly, these Nanobodies recognized different P9-1 conformations and were successfully employed to detect P9-1 in pull-down assays of infected maize extracts. Finally, we demonstrated that fusions of the Nbs to eGFP and RFP allowed the immunodetection of virus present in phloem cells of leaf thin sections. The Nbs developed in this work will aid the study of MRCV epidemiology, assist maize breeding programs, and be valuable tools to boost fundamental research on viroplasm structure and maturation.Instituto de BiotecnologíaFil: Llauger, Gabriela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Llauger, Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Monti, Demian Esteban. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Monti, Demian Esteban. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Aduriz Guerrero, Matí­as. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Aduriz Guerrero, Matí­as. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Romão, Ema. Vrije Universiteit Brussel. Lab of Cellular and Molecular Immunology; BélgicaFil: Dumon, Analia Delina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; ArgentinaFil: Dumon, Analia Delina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Mattio, Maria Fernanda. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; ArgentinaFil: Mattio, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). INCUINTA. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Muyldermans, Serge. Vrije Universiteit Brussel. Lab of Cellular and Molecular Immunology; BélgicaFil: Muyldermans, Serge. Dalian University of Technology. School of Bioengineering. Liaoning Key Laboratory of Molecular Recognition and Imaging; ChinaFil: Vincke, Cécile. Vrije Universiteit Brussel. Lab of Cellular and Molecular Immunology; BélgicaFil: Vincke, Cécile. VIB Center for Inflammation Research. Myeloid Cell Immunology Lab; BélgicaFil: Parreño, Viviana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). INCUINTA. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas; ArgentinaFil: Parreño, Viviana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Del Vas, Mariana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Del Vas, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Comparison of transient and stable expression of foot-and-mouth disease virus capsid proteins in mammalian cells

Foot-and-mouth disease is a highly contagious disease that produces severe economic losses in the livestock industry. This disease is being controlled by the use of an inactivated vaccine. However, the use of recombinant empty capsids as a subunit vaccine has been reported to be a promising candidate because it avoids the use of virus in the vaccine production. A plasmid containing the capsid precursor P12A and protease 3C sequences of foot-and-mouth disease virus (FMDV) was constructed and used to compare transient and stable expression in mammalian cells. When BHK-21 cells were transfected with the recombinant vector, protease 3C cleaved the capsid precursor P12A into the structural proteins VP0, VP1 and VP3. A sucrose gradient demonstrated that the structural proteins assembled into different subviral particles. Attempts to generate a stable cell line only allowed isolating low-level-expressing clones, probably due to the effect of protease 3C on the cells. Moreover, the recombinant protein yield achieved in transient expression assays was much higher than the one achieved in stable expression assays. Results indicate that mammalian cells are a good strategy to produce recombinant FMDV subviral particles. However, the alternative approach of transient gene expression in scalable systems should be used instead of the standard method that involves the generation of a stable cell line.Instituto de VirologíaFil: Mignaqui, Ana Clara. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentina.Fil: Ruiz, Vanesa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentin

Advances in novel vaccines for foot and mouth disease: focus on recombinant empty capsids

Foot and mouth disease (FMD) is a highly contagious disease of cloven-hoofed animals, which causes severe economic losses in the livestock industry. Currently available vaccines are based on inactivated FMD virus (FMDV). Although inactivated virus vaccines have proved to be effective in FMD control, they have a number of disadvantages, including the need for high bio-containment production facilities and the lack of induction of immunological memory. Novel FMD vaccines based on the use of recombinant empty capsids have shown promising results. These recombinant empty capsids are attractive candidates because they avoid the use of virus in the production facilities but conserve its complete repertoire of conformational epitopes. However, many of these recombinant empty capsids require time-consuming procedures that are difficult to scale up. Achieving production of a novel and efficient FMD vaccine requires not only immunogenic antigens, but also industrially relevant processes. This review intends to summarize and compare the different strategies already published for the production of FMDV recombinant empty capsids, focusing on large-scale production.Instituto de VirologíaFil: Mignaqui, Ana Clara. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ruiz, Vanesa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Durocher, Yves. National Research Council Canada. Human Health Therapeutics Research Center; CanadáFil: Wigdorovitz, Andres. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin