A High-performance Thin Layer Chromatography Densitometric Method for the assay of Mebendazole Tablets

A simple, precise and accurate high-performance thin layer chromatographic (HPTLC) method was developed for the assay of mebendazole tablets. The separation was carried out by using HPTLC Silica gel 60 F254, (20 × 10 cm) with 250 μm thickness using ethyl acetate - ammonia 25% solution (25:0.5) as a mobile phase. HPTLC separation of the drug was followed by densitometry measurement at 310 nm. Mebendazole was satisfactorily resolved with retention factor (Rf) values of 0.51 ± 0.02. The method complied with International Conference on Harmonization acceptancecriteria for linearity (250 - 600 ng), precision, accuracy and specificity. Key words: HPTLC, method validation, assay, mebendazol

Improvement of analytical methods for aminoglycoside antibiotics

Aminoglycosiden zijn krachtige breedspectrum antibiotica die reeds zestig jaar worden ingezet voor de behandeling van levensbedreigende infecties. Hun succes is te danken aan de lage bacteriële resistentie, goedkope prijs en de combinatie met ß-lactam antibiotica. Het gebruik van deze klasse antiobiotica werd echter ook reeds geassocieerd met nefro- en ototoxiciteit, naast andere nevenwerkingen. Het optreden van nevenwerkingen na toediening van het geneesmiddel werd in verband gebracht met de aanwezigheid van onzuiverheden in het bulkgeneesmiddel. Om de kwaliteit en veiligheid te waarborgen moeten deze onzuiverheden worden gecontroleerd door het ontwikkelen van goede analytische methoden. De onzuiverheden kunnen door verschillende analytische technieken worden gescheiden van de hoofdcomponenten alsook worden gedetecteerd. In dit werk werd de nadruk gelegd op het gebruik van vloeistofchromatografie (VC) gekoppeld aan een gepulseerde elektrochemische detectie (PED) voor de analyse van gentamicine, tobramycine, kanamycine en netilmicine. De analyse van gentamicine werd besproken in hoofdstukken 2 tot en met 4. De officiële methode voor het bepalen van de samenstelling en onzuiverheden van gentamicine die wordt beschreven in de Europese Farmacopee (Ph. Eur.) is VC-PED. In deze methode wordt het gebruik van een polymeer stationaire fase beschreven. Deze stationaire fase geeft echter aanleiding tot geringe efficiëntie voor de scheiding van de hoofdcomponenten van gentamicine. Bovendien bevat de mobiele fase veel niet-vluchtige zouten zoals natriumsulfaat en natriumoctaansulfonaat. Volgend op een vergelijkend onderzoek werd de meest performante VC-PED methode, die gebruik maakt van een omgekeerde fase C-18 kolom (C-18, 250 x 4.6 mm ID, 110 Å, 5 µm) op 35 °C, geëvalueerd en gevalideerd. De mobiele fase bevatte vluchtige ionenpaarreagentia, met name trifluoroazijnzuur (TFA) en pentafluoropropionzuur (PFPA). Naast de gewenste selectiviteit voor de hoofdcomponenten en onzuiverheden van gentamicine, werd de methode ook herhaalbaar, lineair en robust bevonden. Deze methode werd toegepast voor de analyse van een gentamicine formulatie. De kwaliteit van de bekomen resultaten was verbeterd in vergelijking met de officiële methode. De analyse van tobramycine werd beschreven in hoofdstukken 5 tot en met 6. Twee methodes werden ontwikkeld waarbij de ene gebruik maakt van niet-vluchtige ionenpaar-reagentia en de andere van vluchtige additieven. De algemene selectiviteit voor tobramycine en onzuiverheden was beter wanneer gebruik werd gemaakt van de niet-vluchtige additieven. De twee methodes werden gevalideerd zodat de vluchtige methode later kan worden gekoppeld aan massaspectrometrie (MS) voor de identificatie van onbekende onzuiverheden en de andere methode kan worden gebruikt voor routine kwaliteitscontrole van tobramycine. De niet-vluchtige methode werd ontwikkeld met een Discovery C-18 omgekeerde fase kolom (250 x 4.6 mm ID, 5 µm) en een mobiele fase die natriumsulfaat, natriumoctaansulfonaat, tetrahydrofuraan en 0.2 M fosfaatbuffer pH 3.0 bevat. De vluchtige methode werd nog eens opgesplitst in twee afzonderlijke methodes. Voor de eerste methode werd gebruik gemaakt van een Alltima HP C18 Amide kolom (250 x 4.6 mm ID, 5 µm) en een mobiele fase die 0.2 % (v/v) PFPA bevat. De tweede methode werd ontwikkeld op een Zorbax SB C-18 RP kolom (250 x 4.6 mm ID, 5 µm) met een mobiele fase van TFA PFPA acetonitril (ACN) water. De waterige fase werd op pH 3.0 gebracht met verdunde natriumhydroxide vooraleer ACN werd toegevoegd. Zowel de niet-vluchtige als de vluchtige methode werd gevoelig, lineair en herhaalbaar bevonden. Het onderzoek betreffende kanamycine werd beschreven in hoofdstuk 7. Het gebruik van een niet-vluchtige mobiele fase genoot de voorkeur wegens de mogelijkheid van gradiënt elutie. Dit was een belangrijke factor omdat een isocratische methode vrij lang duurt. Bij deze methode werd gradiëntelutie gebruikt om de totale analysetijd te kunnen reduceren en waarbij de gevoeligheid voor de laat-eluerende pieken wordt verhoogd. Mobiele fase A bevatte natriumsulfaat (5.0 g/l), natriumoctaansulfonaat (0.5 g/l) en 0.2 M fosfaatbuffer pH 3.0 (50.0 ml/l). Mobiele fase B was identiek met uitzondering van een verhoogde natriumsulfaat concentratie (15 g/l). Door gebruik te maken van een Platinum EPS kolom (150 x 4.6 mm ID, 3 µm) gethermostatiseerd op 45 °C, konden 22 componenten worden gescheiden binnen de 45 minuten. De robuustheid van de methode werd nagegaan door middel van een experimenteel design. De methode werd gevoelig, lineair en herhaalbaar bevonden. Er werd een voorstel ingediend bij de Ph. Eur. om de huidige officiële methode voor kanamycine te vervangen door de nieuw ontwikkelde methode. Hoofdstuk 8 behandelt het onderzoek naar de analyse van netilmicine. Er werd gebruik gemaakt van een Zorbax SB C-18 kolom (250 x 4.6 mm ID, 5 µm) De mobiele fase bevatte natriumsulfaat, natriumoctaansulfonaat, tetrahydrofuraan en 0.2 M fosfaatbuffer pH 3.0. De elutie was isocratisch. De robuustheid van de methode werd gecontroleerd met een experimenteel design. Er werd aangetoond dat de methode gevoelig, herhaalbaar, lineair en robuust was. Ook deze nieuwe methode werd voorgesteld om de huidige officiële methode voor de analyse van netilmicine te vervangen. Er kan worden besloten dat verbeterde LC-PED methodes voor gentamicine, tobramycine, kanamycine en netilmicine werden ontwikkeld en gevalideerd. Deze methoden werden voorgesteld om te worden opgenomen in de Ph. Eu.nrpages: 177status: publishe

Improved reversed phase liquid chromatographic method with pulsed electrochemical detection for tobramycin in bulk and pharmaceutical formulation

Tobramycin is one of the aminoglycoside antibiotics that lack a UV absorbing chromophore. However, the application of pulsed electrochemical detection (PED) has been used successfully for the analysis of this and similar antibiotics. This work describes an improved liquid chromatographic (LC) method combined with PED, which is able to separate much more impurities than before. Using a Discovery C-18 RP column (250mmÃ4.6mm i.d., 5μm), isocratic elution was carried out with a mobile phase, containing sodium sulfate (35g/L), sodium octanesulphonic acid (1g/L), tetrahydrofuran (14mL/L) and 0.2M phosphate buffer pH 3.0 (50mL/L). Using these experimental conditions, the limit of quantification (LOQ, S/N=10) was 5ng. The linearity was examined in the range LOQ-60μg/mL and the coefficient of determination was 0.998. The method also proved to be repeatable and the recovery was close to 100%. The influence of the different chromatographic parameters on the separation was investigated by means of an experimental design. The proposed method is useful in quality control of tobramycin drug substances and drug products. Keywords: Liquid chromatography-Pulsed electrochemical detection, Tobramycin, Aminoglycoside antibiotic

LC with electrochemical and UV detection for analysis of a formulation containing gentamicin and parabens

This work describes two separate liquid chromatographic (LC) methods which were developed to control gentamicin sulphate and its preservatives methylparaben and propylparaben in an injectable formulation for veterinary purposes. Owing to the absence of a UV absorbing chromophore in the gentamicin molecule, LC combined with pulsed electrochemical detection (LC-PED) was found to be suitable for the determination of this drug in the formulation. The LC-PED methods from edition 7.0 (valid till 06/2012) and 7.5 (supplement valid from 07/2012) of the European Pharmacopoeia (Ph. Eur.) were compared. The currently recommended LC-PED method allowed good separation between the main gentamicin components and their impurities without interference from additives. Because of its better performance the actual method was used to investigate the degradation profile of the gentamicin sulphate injection. Results obtained from the forced stability study showed that the formulation was stable to oxidative and thermal stress. For the control of the preservatives, a LC-UV method was applied. Both methods were found to be specific, linear and precise. Hence, these two LC methods can be used for routine analysis of the gentamicin sulphate injection. © 2013 The Royal Society of Chemistry.status: publishe

The Quality of Selected Essential Medicines Sold in Accredited Drug Dispensing Outlets and Pharmacies in Tanzania.

The purpose of this study was to investigate the quality of a select group of medicines sold in accredited drug dispensing outlets (ADDOs) and pharmacies in different regions of Tanzania as part of an in-depth cross-sectional assessment of community access to medicines and community use of medicines.We collected 242 samples of amoxicillin trihydrate, artemether-lumefantrine (ALu), co-trimoxazole, ergometrine maleate, paracetamol, and quinine from selected ADDOs and pharmacies in Mbeya, Morogoro, Singida, and Tanga regions. The analysis included physical examination and testing with validated analytical techniques. Assays for eight of nine products were conducted using high-performance thin-layer chromatography (HPTLC). For ALu tablets, we used a two-tiered approach, where tier 1 was a semi-quantitative Global Pharma Health Fund-Minilab® method and tier 2 was high-performance liquid chromatography (HPLC) as described in The International Pharmacopoeia's monograph for artemether-lumefantrine.The physical examination of samples revealed no defects in the solid and oral liquid dosage forms, but unusual discoloration in an injectable solution, ergometrine maleate. For ALu, the results showed that of 38 samples, 31 (81.6%) passed tier 1 testing and 7 (18.4%) gave inconclusive drug content results. The inconclusive ALu samples were submitted for tier 2 testing and all met the quality standards. The pass rate using the HPTLC and TLC/HPLC assays was 93.8%; the failures were the ergometrine maleate samples purchased from both ADDOs and pharmacies. The disintegration testing of the solid dosage forms was conducted in accordance with US Pharmacopeia monographs. Only two samples of paracetamol, 1.2% of the solid dosage forms, failed to comply to standards. The study revealed a high overall rate of 92.6% of samples that met the quality standards. Although the overall failure rate was 7.4%, it is important to note that this was largely limited to one product and likely due to poor distribution and storage rather than poor manufacturing practices.Over 90% of the medicines sold in ADDOs and pharmacies met quality standards. Policy makers need to reconsider ergometrine maleate's place on the list of medicines that ADDOs are allowed to dispense, by either substituting a more temperature-stable therapeutically equivalent product or requiring those sites to have refrigerators, which is not a feasible option for rural Tanzania