Measles eradication and the role of the laboratory

A disponibilidade de vacinas seguras e eficazes, a existência de apenas um tipo antigênico, a estabilidade antigênica, a restrição da doença à população humana e a facilidade de identificação clínica da maioria dos casos de sarampo, permitiram considerar o sarampo como a doença ideal para ser erradicada. Apesar dos esforços neste sentido, com início nos anos oitenta (80), o sarampo continua sendo um grave problema de saúde pública. De acordo com as estimativas da Organização Mundial da Saúde, ocorreram, no ano de 1997, mais de trinta (30) milhões de casos e cerca de um (1) milhão de óbitos por sarampo. Contudo, os dados indicam que a erradicação do sarampo é possível e tem-se uma meta estabelecida para o período de 2005 a 2010. O laboratório tem assumido um papel fundamental nas estratégias de controle e eliminação. O presente trabalho tem por objetivo discutir as diversas oportunidades de atuação do laboratório, assim como as técnicas que mais se adequam a cada finalidade.The availability of safe and effective vaccines against measles virus, its monotypic antigenic stability, the restriction of the disease to human population and the easiness to clinically diagnosis measles cases led to consider measles an ideal candidate for eradication. Despite the efforts, started in the 80’s, for global erradication, measles still remain a great public health problem. According to WHO estimates, more than 30 million measles cases and 1 million deaths occurred in the world in 1997. Nevertheless, data from many countries indicate that measles eradication is possible and a goal for 2005-2010 was established. The laboratory has an essential role in the control and elimination strategies. The aim of the present review is to discuss the several opportunities for the laboratory to actuate and the appropriate methods for each purpose

Non-Detection of Human Herpesvirus 8 (HHV-8) DNA in HHV-8-Seropositive Blood Donors from Three Brazilian Regions

Human herpesvirus 8 (HHV-8), also known as Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV), is the etiologic agent of all forms of Kaposi's sarcoma, primary effusion lymphoma and the plasmablastic cell variant of multicentric Castleman disease. In endemic areas of sub-Saharan Africa, blood transfusions have been associated with a substantial risk of HHV-8 transmission. By contrast, several studies among healthy blood donors from North America have failed to detect HHV-8 DNA in samples of seropositive individuals. In this study, using a real-time PCR assay, we investigated the presence of HHV-8 DNA in whole-blood samples of 803 HHV-8 blood donors from three Brazilian states (São Paulo, Amazon, Bahia) who tested positive for HHV-8 antibodies, in a previous multicenter study. HHV-8 DNA was not detected in any sample. Our findings do not support the introduction of routine HHV-8 screening among healthy blood donors in Brazil. (WC = 140)

Avidity of IgG anti-measles antibodies and their importance in the serological evaluation of vaccines

Com o objetivo de otimizar a avaliação de eficácia de vacinas contra o sarampo, discriminando-se imunização primária de secundária com uma única amostra pós-vacinal, o teste de avidez de anticorpos lgG anti-sarampo foi padronizado e avaliado no presente estudo. Aplicando-se a técnica de ELISA e a uréia 7M durante 10 minutos como agente dissociante da ligação antígeno-anticorpo, determinou-se o cut-off do baixo índice de avidez (BIA) para definição de primo-vacinação como 29 por cento e o tempo adequado de coleta da amostra pós-vacinal como 1O semanas. Observou-se BIA em todas as 164 amostras de soro colhidas até 1O semanas após primo- vacinação aos 9 meses com as vacinas Biken-CAM 70 e Edmonston-Zagreb. Após primo-vacinação aos 9 meses com a vacina Schwarz, BIA foi detectado em 233 das 242 (96,3 por cento) amostras colhidas em papel de filtro. No grupo de 41 crianças vacinadas que apresentavam história prévia de vacinação e/ou anticorpos na amostra pré-vacinal (reinfecção), 39/41 (95,1 por cento) das amostras apresentaram altos índices de avidez. Falhas vacinais primária e secundária foram detectadas, respectivamente, em 1/5 e 4/5 amostras de crianças que tinham história de vacinação, mas ausência de anticorpos na amostra pré-vacinal. Nenhuma das 90 amostras de crianças vacinadas no passado com 2 doses da vacina Biken-CAM70 (aos 6 e 11 meses) e nenhum dos 42 soros de cordão umbilical, apresentou BIA. Conclui-se que a determinação da avidez de anticorpos lgG contra o vírus do sarampo, pela técnica utilizada no presente estudo é altamente eficaz na discriminação entre primo-vacinação e reinfecção ou infecção passada, podendo ser utilizada na avaliação de eficácia de vacinas contra o sarampo empregando-se apenas uma amostra pós-vacinal.In an attempt to improve methods for evaluation of measles vaccine efficacy, by discriminating primary from secondary immunization with only one post- vaccination sample, a measles lgG antibody avidity assay was standardized and evaluated. Using ELISA and treatment with 7M urea for 1O minutes to dissociate antigen- antibody bounds, the cut-off of low avidity indices (LAI) after primary measles vaccination was defined as 29 per cent and 1O weeks as the term for collection of post- vaccination samples. Low avidity indices were observed in all 164 samples collected up to 1 O weeks after primary vaccination at 9 months with Biken-CAM70 and Edmonston-Zagreb vaccines. After vaccination with Schwarz vaccine, LAI were detected in 233 of 242 (96.3 per cent) filter paper blood samples. In the group of 41 vaccinated children who had a history of previous vaccination and/or measles antibody in pre-vaccination samples (reinfection), all but two (95,1 per cent) presented high avidity indices. Primary and secondary measles vaccine failures were detected, respectively, in 1/4 and 4/5 children who had a history of previous vaccination but no measles antibody was detected in pre-vaccination samples. None of 90 children vaccinated in the past with 2 doses of measles vaccine (at 6 and 11 months) and none of 42 cord sera had LAI. We conclude that the measles antibody avidity antibody assay presented in this study is highly efficient in discriminating primary vaccination from reinfection or past infection and can be applied in the evaluation of measles vaccine efficacy, using only one post-vaccination sample

Reação imunoenzimática (ELISA) para detecção de anticorpos para o vírus do sarampo: comparação com reações de inibição da hema-glutinação, imunofluorescência indireta e neutralização de placas

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for measles antibodies was compared with Plaque Neutralization (PRN), Haemagglutination inhibition (HI) and Fluorescent antibody (IFA) tests in 181 sera from vaccinated children and umbilical cord. Of 179 positive samples by the sensitive PRN, only two, with titers of 8, were negative by ELISA (copositivity of 98.9%). IFA and HI presented, respectively, copo-sitivities of 93.3% and 82.7%. The ELISA presented a high sensitivity as well as a good reproducibility and represents an alternative for the time consuming PRN for detection of low measles antibodies.A reação imunoenzimática (ELISA) para determinação de anticorpos para o vírus do sarampo foi comparada com a reação de neutralização de placas (RNP), inibição da hemaglutinação (RIH) e imunofluorescência indireta (RIF). Das 179 amostras positivas pela RNP, somente 2, com títulos iguais a 8, se apresentaram negativas por ELISA (copositividade de 98.9%). A RIF e RIH apresentaram, respectivamente, copositividade de 93.3 e 82.7%. ELISA apresentou sensibilidade equivalente à complexa RNP, boa reprodutibilidade e representa uma alternativa para a detecção de baixos títulos de anticorpos contra o sarampo

Reação imunoenzimática (ELISA) para detecção de anticorpos contra o vírus da Rubéola: um método simples de produção de antígeno. Nota prévia

Um método simples de produção de antígeno de vírus da rubéola, por extração com desoxicolato de sódio para aplicação no ensaio imunoenzimático, IMT-ELISA, é apresentado. Este ensaio comparado com ELISA comercial (Enzygnost-Rubella, Behring), no estudo de 108 soros e 118 amostras de papel de filtro apresentou 96,9% (219/226) de concordância e um coeficiente de correlação de 0,90 entre as absorbâncias. Sete amostras apresentaram resultados discordantes, negativos pelo ensaio comercial e positivos pelo IMT-ELISA. Destas, 4 foram testadas por RIH, observando-se positividade em 3.A simple method of rubella antigen production by treatment with sodium desoxycholate for use in enzyme immunoassay (IMT-ELISA) is presented. When this assay was compared with a commercial test (Enzygnost-Rubella, Behring), in the study of 108 sera and 118 filter paper blood samples, 96.9% (219/226) overall agreement and correlation coefficient of 0.90 between absorbances were observed. Seven samples showed discordant results, negative by the commercial kit and positive by our test. Four of those 7 samples were available, being 3 positive by HI

Comparação da reação de imunofluorescência indireta para o vírus do sarampo com as reações de inibição da hemaglutinação e neutralização por redução de placas

Indirect Immunofluorescence (IFA), Plaque Reduction Neutralization (PRN) and Haemagglutination Inhibition (HI) tests for measles antibodies were carried out in 197 sera obtained from umbilical cord and vaccinated children. The IFA was also applied to blood samples collected with filter paper. IFA results demonstrated that the test is relatively simple to perform, with good reproducibility for different antigen lots. Good correlation was obtained between IFA, PRN and HI antibody titers. Better correlation was demonstrated with IFA and PRN than with HI and PRN tests. Sensitivity of IFA in detecting antibody was less effective than PRN, however more effective than HI using rhesus monkey red blood cells. PRN antibody titers over 100 were detected by IFA but not by HI (9.7% with negative results). IFA may be of considerable practical use and able to substitute HI in Seroepidemiological surveys and to evaluate vaccine efficacy. It also can be simplified by employing filter paper collected samples.As reações de imunofluorescência indireta (RIF), neutralização por redução de placas (RNP) e inibição da hemaglutinação (RIH) para detecção de anticorpos para o vírus do sarampo foram aplicadas a 197 soros provenientes de cordão umbilical e de crianças vacinadas contra o sarampo. Avaliou-se ainda a aplicação da RIF em amostras colhidas em papel de filtro. A RIF apresentou-se como uma prova de execução relativamente simples, de boa reprodutibilidade com diferentes partidas de antígeno. Observou-se boa correlação entre os títulos de anticorpos obtidos por RIF, RNP e RIH. Com a RNP, a RIF apresentou maior correlação que a RIH. A sensibilidade da RIF na detecção de anticorpos contra o sarampo foi menor que RNP, porém superior à da RIH com hemácias de macaco rhesus. Anticorpos com títulos superiores a 100 pela RNP foram sistematicamente detectados pela RIF, mas não por RIH (9,7% de resultados negativos). A RIF pode ser de grande utilidade, podendo substituir com vantagem a RIH em inquéritos soroepidemiológicos e na avaliação de eficácia de vacinas. Além disso, mostrou-se adequada para aplicação em larga escala, já que permite processar amostras de sangue colhidas em papel de filtro

Three year seroepidemiological study of varicella-zoster virus in São Paulo, Brazil

A serosurvey of varicella has been carried out in children attending the public school network of São Paulo city, Brazil, from 1992 to 1994. This study was performed in order to establish the age related prevalence of antibodies against varicella-zoster virus (VZV) and its age specific transmission dynamics pattern in these children. Among 2500 schools in the city of São Paulo public network, 304 were randomly selected; 7 children of a given age (ranging from 1 to 15 years) were randomly selected in each school, and blood samples were obtained by fingerprick into filter paper. Blood eluates were analyzed for the presence of antibodies to VZV by ELISA. Proportion of seropositivity were calculated for each age group. Samples consisted of 1768 individuals in 1992, 1758 in 1993, and 1817 in 1994, resulting in 5343 eluates. A high proportion of seropositive children from 1 to 3 years of age was observed, ascending until 10 years of age and reaching a plateau around 90% afterwards. VZV transmission in this community was similar along the three years of the study. In children attending public schools in the city of São Paulo, contact with VZV occurs in early childhood. If immunization against VZV is considered it should be introduced as soon as possible.Um estudo sorológico para varicela foi realizado em crianças matriculadas na rede pública de ensino da cidade de São Paulo, Brasil, entre 1992 e 1994. O objetivo deste estudo foi determinar a soroprevalência idade-dependente de anticorpos contra o vírus varicela-zoster (VVZ) e definir sua dinâmica de transmissão nestas crianças. Foram selecionadas, ao acaso, 304 escolas entre os 2500 equipamentos da Rede Pública de Educação e Bem Estar Social na cidade de São Paulo; foram sorteadas em cada escola 7 crianças de determinada idade (de 1 a 15 anos), e o sangue colhido em papel de filtro. Os eluatos foram avaliados para anticorpos contra o vírus varicela zoster através de técnica de ELISA. A proporção de soropositivos para cada faixa etária foi calculada. Foram obtidas 1768 amostras em 1992, 1758 em 1993 e 1817 em 1994, resultando em 5343 eluatos. Observou-se alta proporção de soropositivos no intervalo etário de 1 a 3 anos de idade, ascendendo até os 10 anos, mantendo-se ao redor de 90% a partir desta idade. O padrão de transmissão do VVZ nesta comunidade é semelhante ao longo dos 3 anos estudados. Nas crianças frequentadoras das escolas públicas da cidade de São Paulo, o contacto com o VVZ ocorre no início da infância. Considerando-se a possibilidade de introdução da imunização contra a varicela, ela deve ocorrer o mais cedo possível

Use of an Immunoglobulin G Avidity Test To Discriminate between Primary and Secondary Dengue Virus Infections

An enzyme-linked immunosorbent assay-based immunoglobulin G (IgG) antibody avidity test was evaluated by using sera from 57 patients with acute dengue infection. Overall, 55 of 57 patients were correctly classified (27 of 27 with primary dengue and 28 of 30 with secondary dengue). We conclude that the IgG avidity test can be useful for differentiating between acute, primary, and secondary dengue infections