ESTUDO DA DINÂMICA DE POLISSACARÍDEOS DA PAREDE CELULAR E DAS ENZIMAS HIDROLÍTICAS DE ESPÉCIES DE TRICHODERMA DURANTE O MICOPARASITISMO.

A parede celular do fungo é responsável pela proteção, forma e comunicação intracelular. Essas variedades funcionais, estão relacionadas à sua composição tendo como principais componentes glicanas e quitinas que podem ser variáveis de acordo com a espécie e gênero do fungo. O gênero Trichoderma está entre os mais estudados atualmente, devido a sua importância para a agricultura por ser efetivo contra patógenos de plantas. Neste estudo foram utilizados os isolados de Trichoderma, Trichoderma harzianum selvagem, Trichoderma harzianum mutante (Δepl1), Trichoderma asperellum e Trichoderma reesei e os fitopatógenos Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani e Fusarium oxysporum. O perfil de açúcares presentes na parede dos isolados de Trichoderma foi determinado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) revelando que estes apresentaram o mesmo perfil de mesmo perfil de glicose, oriunda de glucanas, e oligossacarídeos de quitobiose como pentacetil e diacetil bem como a N-acetilglicosamina presentes na estrutura de quitinas. Durante a interação com os fitopatógenos todos os isolados de Trichoderma apresentaram elevação de glucanas e quitinas. A atividade de glucanases e quitinases na interação de isolados de Trichoderma com os fitopatógenos mostrou que, durante a interação com os fitopatógenos, os isolados de Trichoderma apresentaram respostas diferentes dessas enzimas e que Trichoderma asperellum foi o que apresentou melhor atividade das enzimas avaliadas. Este trabalho mostrou a dinâmica existente de glucanas, quitinas e das enzimas degradadoras da parede celular de fitopatógenos, glucanases e quitinases, e que, essas alterações estão intimamente relacionadas com a composição da parede celular de fitopatógenos definindo-os bons candidatos como agentes no biocontrole

CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DO PRODUTO DE EXCREÇÃO/ SECREÇÃO DE LARVAS DE Cochliomyia hominivorax (DIPTERA: CALLIPHORIDAE)

A espécie Cochliomyia hominivorax, conhecida popularmente como mosca da bicheira, é um parasita obrigatório de animais de sangue quente e sua distribuição geográfica estende-se por toda a América do Sul, excetuando-se o Chile. O parasitismo por esta mosca provoca perdas econômicas significativas e tem grande importância no Brasil. São poucos os estudos com foco nos produtos de excreção e secreção desta espécie e este trabalho teve como objetivo estudar as enzimas presentes  no produto de secreção e excreção (E/S) dos três estádios larvais de C. hominivorax. O perfil de proteínas foi obtido por eletroforese em gel de poliacrilamida e a atividade proteolítica foi analisada utilizando-se gelatina, azocaseína e Na-benzoil-arginina-nitroanilida (BAPNA) como substrato. Nos produtos de E/S dos três estádios, as proteínas foram detectadas com um peso molecular aparente que variou entre 116 e 20 kDa. No ensaio de azocaseína, em diferentes faixas de pH, a maior atividade proteolítica ocorreu em pH 7,5 para todos os estádios larvais. Os ensaios foram realizados usando- se estes mesmos substratos e as amostras foram tratadas com os inibidores Benzamidina, Pepstatin A, 4-(2-aminoetil)benzenosulfonil fluoreto hidrocloreto (AEBSF), N-?-tosil-L-lisina clorometil cetona (TLCK), N-?-tosil-L-fenilalanina clorometil cetona (TPCK), Ácido etilenodiamino tetra acético (EDTA), Leupeptina e Trans-epoxysuccinyl L-leucylamido-4-guanidino butano (E-64). As proteinases presentes nos produtos E/S de L1 são em sua maioria serina proteases do tipo tripsina e quimotripsina, enquanto que para os produtos E/S de L2 e L3 foi evidenciada a presença de serina proteases e aspartil proteases. Palavras-chave: enzima; miíase; mosca; parasitas

Biochemistry characterization of excretion / secretion product of cochliomyia hominivorax larvae (diptera : calliphoridae)

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Biochemical and metabolic profiles of Trichoderma strains isolated from common bean crops in the Brazilian Cerrado, and potential antagonism against Sclerotinia sclerotiorum

Some species of Trichoderma have successfully been used in the commercial biological control of fungal pathogens, e.g., Sclerotinia sclerotiorum, an economically important pathogen of common beans (Phaseolus vulgaris L.). The objectives of the present study were (1) to provide molecular characterization of Trichoderma strains isolated from the Brazilian Cerrado; (2) to assess the metabolic profile of each strain by means of Biolog FF Microplates; and (3) to evaluate the ability of each strain to antagonize S. sclerotiorum via the production of cell wall-degrading enzymes (CWDEs), volatile antibiotics, and dual-culture tests. Among 21 isolates, we identified 42.86 % as Trichoderma asperellum, 33.33 % as Trichoderma harzianum, 14.29 % as Trichoderma tomentosum, 4.76 % as Trichoderma koningiopsis, and 4.76 % as Trichoderma erinaceum. Trichoderma asperellum showed the highest CWDE activity. However, no species secreted a specific group of CWDEs. Trichoderma asperellum 364/01, T. asperellum 483/02, and T. asperellum 356/02 exhibited high and medium specific activities for key enzymes in the mycoparasitic process, but a low capacity for antagonism. We observed no significant correlation between CWDE and antagonism, or between metabolic profile and antagonism. The diversity of Trichoderma species, and in particular of T. harzianum, was clearly reflected in their metabolic profiles. Our findings indicate that the selection of Trichoderma candidates for biological control should be based primarily on the environmental fitness of competitive isolates and the target pathogen. (C) 2012 The British Mycological Society. Published by Elsevier Ltd. All rights reserved.FINEP (Research and Projects Financing)National Council for Scientific and Technological Development (CNPq) [FINEP/CT-AGRO/01.07.0551.00/Ref. 0845/07]CAPESFAPEGOFUNAPE [proc. 20081026700108]State of Sao Paulo Research Foundation (FAPESP) [proc. 2010/15683-8