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Gallid herpesvirus 3 SB-1 strain as a recombinant viral vector for poultry vaccination
Live herpesvirus-vectored vaccines are widely used in veterinary medicine to protect against many infectious diseases. In poultry, three strains of herpesvirus vaccines are used against Marek’s disease (MD). However, of these, only the herpesvirus of turkeys (HVT) has been successfully developed and used as a recombinant vaccine vector to induce protection against other avian viral diseases such as infectious bursal disease (IBD), Newcastle disease (ND) or avian influenza (AI). Although effective when administered individually, recombinant HVT vectors have limitations when combined in multivalent vaccines. Thus there is a need for developing additional viral vectors that could be combined with HVT in inducing protection against multiple avian diseases in multivalent vaccines. Gallid herpesvirus 3 (GaHV3) strain SB-1 is widely used by the poultry industry as bivalent vaccine in combination with HVT to exploit synergistic effects against MD. Here, we report the development and application of SB-1 as a vaccine vector to express the VP2 capsid antigen of IBD virus. A VP2 expression cassette was introduced into the SB-1 genome at three intergenic locations (UL3/UL4, UL10/UL11 and UL21/UL22) using recombineering methods on the full-length pSB-1 infectious clone of the virus. We show that the recombinant SB-1 vectors expressing VP2 induced neutralising antibody responses at levels comparable to that of commercial HVT-based VAXXITEKHVT+IBD vaccine. Birds vaccinated with the experimental recombinant SB-1 vaccine were protected against clinical disease after challenge with the very virulent UK661 IBDV isolate, demonstrating its value as an efficient viral vector for developing multivalent vaccines against avian diseases
Gestión clínica de la consulta: previsibilidad y contenido clínico (estudio SyN-PC)
ObjetivoDescribir la actividad asistencial en función de la naturaleza de la consulta (previsibilidad) y las necesidades de los pacientes (contenido clínico). Analizar la relación con las características de la consulta, del paciente y del centroDiseñoEstudio observacional descriptivo multicéntricoEmplazamientoAtención primaria. Área 17 de la Conselleria de Sanidad de la Comunidad Valenciana. Población de 197.316 habitantes. Trece centros de saludParticipantesRecogida de información en tiempo real por un observador externo. Muestreo aleatorio estratificado de 2.051 pacientes que ocasionaron 3.008 motivos de consulta médicaMediciones principalesConsulta previsible (Pr): se puede prever su contenido (revisiones, recogida de resultados). Consulta imprevisible (Ip): no podemos prever su contenido (problemas agudos) y surgen inesperadamente. Engloba la consulta urgente. Consulta administrativa (Ad): tareas burocráticas (recetas, partes de confirmación, certificados). Consulta asistencial (As): prevenir, diagnosticar y tratar la enfermedad, o realizar seguimiento de ésta. Variables del paciente, el centro y la consultaResultadosEl 60% (n=1.809; IC del 95%, 58,69–61,59%) de los motivos fueron previsibles y el 40% (n=1.199; IC del 95%, 36,6–43,12%), imprevisibles. El 50% (n=1.509; IC del 95%, 47,26–53,06%) fueron consultas asistenciales y el 50% (n=1.499; IC del 95%, 46,34–53,39%), administrativas. El 40% (n=1.189; IC del 95%, 37,78–41,28%) fueron previsibles-administrativas y tan sólo un 21% (n=620; IC del 95%, 19,16– 22,06%) resultaron de carácter previsible-asistencial. El 30% (n=889; IC del 95%, 27,92–31,18%) fueron de carácter imprevisible–asistencial y el 10% (n=310; IC del 95%, 9,22– 11,4%), imprevisibles-administrativas. En los pacientes con un único motivo, el 48% (n=577; IC del 95%, 44,25–52,05%) fueron consultas previsibles-administrativas. Los centros docentes o informatizados tienen menos carga de consultas previsibles-administrativas. Éstas aumentan con la edad del paciente y con la presión asistencialConclusionesCasi un 40% de los motivos de consulta son previsibles-administrativos, lo que implica una gestión clínica inadecuada. Sería necesaria una intervención que permitiera liberar tiempo médico consumido en asuntos burocráticos para dedicarlo a la tarea asistencial propiamente dichaObjectivesTo describe care activity as a function of the nature of the consultation (predictability) and the needs of the patients (clinical content). To analyse the relationship of these with the characteristics of the consultation, of the patient and of the centreDesignMulti-centre, descriptive, observational study.SettingPrimary care. Area 17 of the Health Department of the Community of Valencia, with 197 316 inhabitants and 12 health centresParticipantsInformation gathering in real time by outside observer. Stratified randomised sampling of 2051 patients who gave rise to 3008 reasons for medical consultationMain measurementsPredictable consultations (Pr): their content can be foreseen (check-ups, picking up results). Unpredictable consultations (Unp): we cannot predict their content (acute problems may arise unexpectedly). These include urgent consultations. Administrative consultations (Ad): bureaucratic tasks (prescriptions, repeat sick-notes, sick certificates). Care consultations (Car): prevention, diagnosis and treatment of the illness, or monitoring of it. Variables here are the patient, the doctor and the consultationResults60% (1809) (95% CI, 58.69%–61.59%) of the reasons were Pr and 40% (1199) (95% CI, 36.6%–43.12%) were Unp. 50% (1509) (95% CI, 47.26%–53.06%) were Car, and 50% Ad (1499) (95% CI, 46.34%–53.39%). 40% (1189) (95% CI, 37.78%–41.28%) were Pr-Ad and only 21% (620) (95% CI, 19.16%–22.06%) were Pr-Car. 30% (889) (95% CI, 27.92%–31.18%) were Unp–Car, and 10% (310) (95% CI, 9.22%– 11.4%) Unp-Ad. 48% of patients with a single reason for attendance were Pr-Ad (577) (95% CI, 44.25%–52.05). Teaching centres and computerised ones had less Pr-Ad load. Pr-Ad consultations increased with patient´s age and with case-load.ConclusionsAlmost 40% of the reasons for consultation are Pr-Ad, which implies inadequate clinical management. An intervention is needed to free up medical time consumed by bureaucratic questions, so that this time can be devoted fully to health-care task
Respuesta inmunitaria en la diarrea vírica bovina
El Virus de la diarrea vírica bovina (vDVB) es un virus ARN clasificado dentro de la familia Flaviviridae junto con otros pestivirus como el virus de la peste porcina clásica y el virus de la enfermedad de la frontera de la oveja. El vDVB se ha dividido tradicionalmente en base a sus diferencias genéticas en 2 genotipos o especies distintas, conocidas como genotipo 1 y 2 habiéndose podido tipificar genéticamente distintos aislados de ambos genotipos. Independientemente del genotipo al que pertenezcan, el virus se clasifica en función del efecto que produce sobre ciertos cultivos de células epiteliales bovinas en 2 biotipos: biotipos citopáticos (CP) y biotipos no citopáticos (NCP). Sin embargo, la importancia de las lesiones en el transcurso de procesos causados por cepas NCP no se correlaciona con su virulencia in vitro. Un aspecto poco estudiado en la DVB, fundamental para el desarrollo y mejora de vacunas, es el referente a la respuesta inmunitaria que se desarrolla tanto a nivel sistémico como local en el tejido linfoide de la mucosa intestinal. Trabajos recientes han puesto de manifiesto la existencia de una translocación de la respuesta inmunitaria Th1/Th2, lo que dará lugar a una respuesta inmune aberrante, en la que la respuesta Th1 protectora estaría inhibida por la Th2. Este hecho favorecería unainadecuada proliferación y transformación de los linfocitos B hacia células plasmática, comprometiendo la activación de una respuesta inmunitaria específica frente al vDVB y la producción de anticuerpos neutralizantes. Esta alteración de la respuesta Th1 protectora, junto a la intensa depleción debida a una masiva apoptosis de linfocitos ,que sufre tanto el tejido linfoide asociado a la mucosa intestinal (tonsilas y placas de Peyer) como distintos órganos linfoides, serían las responsables del estado de inmunosupresión que caracteriza a estos animales y predispone a la aparición de procesos bacterianos secundarios
Pathogenic mechanisms implicated in the intravascular coagulation in the lungs of BVDV-infected calves challenged with BHV-1
Resistance to respiratory disease in cattle requires host defense mechanisms that protect against pathogens which
have evolved sophisticated strategies to evade them, including an altered function of pulmonary macrophages (MΦs)
or the induction of inflammatory responses that cause lung injury and sepsis. The aim of this study was to clarify the
mechanisms responsible for vascular changes occurring in the lungs of calves infected with bovine viral diarrhea virus
(BVDV) and challenged later with bovine herpesvirus type 1 (BHV-1), evaluating the role of MΦs in the development of
pathological lesions in this organ. For this purpose, pulmonary lesions were compared between co-infected calves and
healthy animals inoculated only with BHV-1 through immunohistochemical (MAC387, TNFα, IL-1α, iNOS, COX-2 and
Factor-VIII) and ultrastructural studies. Both groups of calves presented important vascular alterations produced by
fibrin microthrombi and platelet aggregations within the blood vessels. These findings were earlier and more severe in
the co-infected group, indicating that the concomitance of BVDV and BHV-1 in the lungs disrupts the pulmonary
homeostasis by facilitating the establishment of an inflammatory and procoagulant environment modulated by
inflammatory mediators released by pulmonary MΦs. In this regard, the co-infected calves, in spite of presenting a
greater number of IMΦs than single-infected group, show a significant decrease in iNOS expression coinciding with the
presence of more coagulation lesions. Moreover, animals pre-inoculated with BVDV displayed an alteration in the
response of pro-inflammatory cytokines (TNFα and IL-1), which play a key role in activating the immune response, as
well as in the local cell-mediated respons
Effect of infection with BHV-1 on peripheral blood leukocytes and lymphocyte subpopulations in calves with subclinical BVD
Bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus-1 (BHV-1) are important cattle pathogens that
induce a broad immunosuppression on cell-mediated immune response on its own participating in the
bovine respiratory disease complex (BRDC). The aim of our study was to evaluate the quantitative
changes in immunocompetent cells in healthy calves and calves with subclinical bovine viral diarrhea
(BVD), both inoculated with BHV-1. Total leukocyte counts exhibited changes mainly in neutrophils
and lymphocytes that can contribute to the BVDV immunosuppression, thus accounting for some of
the intergroup differences. Monocytes did not display numerical changes in either group. Regarding
lymphocyte subpopulations, even though CD4+ T lymphocytes and B cells were depleted around 4 dpi
in both infected groups, the main difference observed between both groups was in CD8+ T cells which
displayed an earlier depletion in BVDV inoculated calves that can promote a greater BHV-1 dissemination, thus aggravating the course of the disease
Cell-mediated immune response during experimental acute infection with bovine viral diarrhea virus (BVDV): evaluation of blood parameters
Acute infections with bovine viral diarrhoea virus (BVDV), a major pathogen of
cattle, are often asymptomatic or produce only mild clinical symptoms. However,
they may play an important role in the bovine respiratory disease complex by
exerting a marked immunosuppressive effect, as a result of the death of the
immunocompetent cell populations involved in controlling innate and adaptive
immune responses, together with a marked reduction of both cytokine expression
and co-stimulatory molecule synthesis. Although experimental research and field
studies have shown that acute BVDV infection enhances susceptibility to secondary
infection, the precise mechanism involved in BVDV-induced immunosuppression
remains unclear. The present study is aimed at measuring a range of
blood parameters in a single group of fourteen calves infected with non-cytopathic
BVDV-1. Focus has been put on those related to the cell-mediated immune
response just as leucocyte populations and lymphocyte subpopulations, serum
concentrations of cytokines (IL-1b, TNF-a, IFN-c, IL-12, IL-4 and IL-10) and
acute phase proteins [haptoglobin, serum amyloid A (SAA), fibrinogen and albumin],
as well as BVDV-specific antibodies and viremia. After non-cytopathic
BVDV-1 infection, clinical signs intensity was never more than moderate coinciding
with the presence of viremia and leucocyte and lymphocyte depletion. An
early increase in TNF-a, IFN-c and IL-12 levels in contrast to IL-1b was observed
in line with a raise in haptoglobin and SAA levels on the latest days of the study.
As regards IL-4 levels, no evidence was found of any changes. However, a slight
increase in IL-10 was observed, matching up the TNF-a decline during the acute
phase response. These findings would help to increase our knowledge of the
immune mechanisms involved in acute infection with non-cytopathic BVDV-1
strains, suggesting the existence of a clear tendency towards a type 1 immune
response, thereby enhancing resistance against viral infections
El tejido linfoide asociado a mucosas como blanco del virus de la diarrea vírica bovina: estructura y función
Las tonsilas, al igual que otros tejidos linfoides asociados a mucosas como las placas de Peyer del intestino delgado, debido a su localización, se presentan como la puerta de entrada de numerosos agentes patógenos, y por sus características estructurales e inmunológicas, protegen los tractos respiratorios y digestivos de los antígenos que son constantemente inhalados e ingeridos. En los bovinos, distintos agentes patógenos replican en las tonsilas en las primeras fases de la infección, destacando virus como el de la diarrea vírica bovina (vDVB). En rumiantes jóvenes, las placas de Peyer ileales son responsables de la generación de la mayoría de células B, habiéndose especulando con su posible papel como órgano linfoide primario ya que, al igual que ocurre con el timo, también involuciona a edades jóvenes. El tejido linfoide asociado a mucosas se presenta como el principal lugar de replicación del vDVB, siendo además la localización en la que se producen las lesiones más importantes en el transcurso de esta enfermedad, dando lugar a una intensa depleción linfoide que se traduce, a nivel sistémico, en una marcada leucopenia. Por este motivo y con el fi n de profundizar en los mecanismos patogénicos del vDVB, es necesario estudiar y comprender en profundidad tanto la estructura como las funciones inmunológicas de estos tejidos linfoides
Funciones y clasificación de las células dendríticas
Las células dendríticas (CDs) son leucocitos que juegan un importante papel tanto en la inmunidad innata como en la adaptativa, siendo las células presentadoras de antígeno más potentes que existen y con la capacidad única de activar linfocitos T colaboradores que no han tenido contacto antigénico previo. No sólo son importantes en la regulación de respuestas inmunógenas efectivas, sino también en la inducción de fenómenos de tolerancia inmunológica, necesarios para evitar la aparición de procesos autoinmunes. Tras la captación y procesamiento de los antígenos, las CDs se dirigen principalmente a los órganos linfoides, donde se produce la presentación de antígenos a los linfocitos T, proceso en el cual no sólo es necesaria la interacción del CMH-II con el receptor de linfocitos T sino también la interacción de otras moléculas accesorias como las moléculas coestimuladoras y las moléculas de adhesión. Las CDs son células de una gran plasticidad funcional y que van a caracterizarse por su diferente localización en el organismo, su estado de madurez y su origen. En este último aspecto, cabe destacar las importantes diferencias funcionales entre las células dendríticas foliculares (CDF) de origen estromal y las clásicas CDs de origen hematopoyético, que van a derivar a su vez de progenitores mieloides o linfoides y que van a clasificarse de manera distinta según la especie estudiada
Mecanismos inductores y vías de la apoptosis en la diarrea vírica bovina
La apoptosis es una forma de muerte celular inducida por una gran variedad de estímulos, considerada como el resultado final de una cascada en la que intervienen una serie de enzimas denominadas caspasas, inducidas tanto por estímulos externos como internos. Entre éstas destacan las denominadas caspasas iniciadoras (2, 8, 9 y 10) y las caspasas ejecutoras o efectoras (3, 6 y 7). Existen dos vías principales reguladoras de la apoptosis: la vía extrínseca, inducida y mediada por receptores, la cual se inicia cuando un ligando apropiado se une a receptores de muerte localizados en la superficie celular, de modo que estas uniones ligando-receptor hacen que los dominios de muerte celular intracelulares y su unión a ciertas proteínas del citosol activen a las caspasas iniciadoras de esta vía (pe: caspasa 8), y la vía intrínseca o mitocondrial, gobernada por proteínas de la familia del Bcl-2 que agrupa un grupo de moléculas involucradas en la permeabilidad de la mitocondria, pudiéndose distinguir entre moléculas anti-apoptóticas y pro-apoptóticas. El desequilibrio en la expresión de estas moléculas incrementa la permeabilidad de la membrana mitocondrial, favoreciendo la liberación de proteínas al citosol y la activación de las caspasas iniciadora de esta vía (pe: caspasa 9). Una vez activadas las caspasas iniciadoras, éstas ejercerán su actividad proteolítica sobre las denominadas caspasas efectoras o ejecutoras (3, 6 y 7), las cuales, una vez activadas ejecutarán la muerte de forma irreversible. Junto a aspectos generales relacionados con los mecanismos y vías de la apoptosis, en este trabajo se abordan aspectos relacionados con dichos mecanismos en el transcurso de la diarrea vírica bovina, donde la apoptosis parece ser la responsable de la depleción linfoide y la leucopenia que caracterizan a esta enfermedad
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