19 research outputs found

    Epizootiological investigations in horses with Borna disease (BD) in Bavaria and description of the monoclonal antibody 38/15H7

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    In der vorliegenden Arbeit wurden n=451 Fälle von an BD erkrankten Pferden im Zeitraum von 1990-2008 in Bayern nach epizootiologischen und diagnostischen Gesichtspunkten ausgewertet. Für n=421 der Fälle wurde die Diagnose BD post mortem über eine histologische und/oder immunhistologische Untersuchung, und/oder über einen Virusnachweis gestellt. Von den n=30 nicht post mortem untersuchten Fällen zeigten n=15 Fälle eine Spontanheilung. Bei den restlichen 15 Fällen wurde die Diagnose BD ausschließlich über die Ergebnisse der intra vitam Diagnostik gestellt. In diesen Krankheitsfällen lag die typische Symptomatik, ein seropositives Titerpaar und/oder eine Untersuchung des Liquor cerebrospinalis vor. Aufgrund der gesicherten post mortem Untersuchung ergab sich die Möglichkeit, zusätzlich Ergebnisse der intra vitam Diagnostik zu beurteilen. Danach konnte die Bedeutung der intra vitam Diagnostik aufgezeigt und der indirekte Immunfluoreszenztest (IIFT) als eine zuverlässige Methode zum Nachweis von BDV-Antikörpern dargestellt werden. Die Sensitivität der Untersuchungsmethode für Serum wurde mit 89.8% angegeben. Des Weiteren wurde dargestellt, dass zur Diagnosefindung ein einmaliger Antikörpernachweis nicht ausreichend ist, und nur ein Titeranstieg um mindestens 3 Stufen innerhalb von 10-14 Tagen, oder eine Serokonversion als Hinweis auf eine akute Infektion angesehen werden kann. In der deutlich überwiegenden Anzahl der Fälle war die Untersuchung der CSF eine diagnostisch unerlässliche Hilfe. Eine Sensitivität der Untersuchungsmethode im IIFT wurde für die CSF mit 85% ermittelt. Zusätzlich wurden in dieser Arbeit die unterschiedlichen Verlaufsformen der BD aufgezeigt. Dabei ergab sich in 93.1% der BD-Fälle ein akuter bis subakuter Verlauf, 3.5% der Fälle verliefen perakut und 3.4% zeigten eine Spontanheilung. Die epidemiologische Untersuchung umfasste eine Auswertung der BD-Fälle nach Rasse, Alter und Geschlecht sowie eine Darstellung der Endemiegebiete. Im Weiteren wurde eine Auswertung der säkularen Dynamik und saisonalen Rhythmik vorgenommen. Die Untersuchungen zeigen auf, dass die BD bei vielen Rassen vorkommt, mit einer Disposition für die Rassen Warmblut, Pony und Haflinger. Die Ergebnisse der Altersverteilung zeigen das häufigere Auftreten der BD in den Gruppen der jungen Pferde bis 9 Jahre und stehen wahrscheinlich im Zusammenhang mit einer normalen Altersstruktur. Außerdem ergab sich bei der Geschlechtsverteilung ein etwas häufigeres Vorkommen der BD mit 54.9% bei der Stute. Die Auswertung der Erkrankungsfälle im beobachteten Zeitraum hinsichtlich der säkularen Dynamik weisen darauf hin, dass es in unregelmäßigen Abständen von 3 bis 5 Jahren zur Ausprägung einer Erkrankungsspitze kommt. Die Angaben über die saisonale Rhythmik der BD in der Literatur, mit einer Häufung der BD-Fälle im Frühjahr und Frühsommer in den Monaten April, Mai und Juni und einem Rückgang der Erkrankung zum Jahresende über die Monate August, September, Oktober und November, wurden in dieser Arbeit unterstrichen. Die Verbreitung der BD bestätigte in der vorliegenden Auswertung den ausgesprochen territorialen Charakter der Krankheit. Außerdem konnte eine deutliche Ausdehnung mit Verschiebung des Hauptendemiegebietes dargestellt werden. Ein Vergleich der Zeiträume 1990-1999 und 2000-2008 zeigt einen deutlichen Rückgang der BD im mittelfränkischen Raum, mit einer Ausdehnung der Endemiegebiete nach Süd- und Ostbayern.In this retrospective study n=451 cases of BD in horses in Bavaria which occurred between 1990 - 2008 were considered for an epizootiologic and diagnostic analysis. 421 cases were diagnosed post mortem as having BD through histological examination and/or immunhistologic tests and/or virus detection. Of the thirty cases not confirmed by post mortem examination, fifteen showed spontaneous recovery. In the remaining fifteen cases, the diagnosis BD was solely based on results from the intra vitam diagnostics. These cases displayed the typical clinical signs, a seropositive titer pair and/or a positive test of the cerebrospinal fluid (CSF). Based on the confirmation by the post mortem examinations, it was possible to evaluate the results from the intra vitam diagnostic methods. Hereby, the significance of the intra vitam diagnostics becomes evident, especially the indirect immunofluorescence test (IIFT) has proven to be a reliable method for the detection of Borna disease virus (BVD) antibodies. The sensitivity of this method for serum is reported to be 89.9%. Furthermore, it is described, that a single detection of antibodies is not sufficient for a diagnosis, only a rise in the titer of the least three steps, within a period of 10 to 14 days, or a seroconversion can be considered indicative of an acute infection. In the majority of the cases, examinating the CSF was a most valuable diagnostic tool. The sensitivity of the diagnostic method in the IIFT was determined to be 85% for CSF. Additionally, the different progressions of BD are shown in this work. It was found, that 93.1% of the BD cases showed acute to subacute development, 3.5% of the cases progressed peracutely and 3.4% healed spontaneously. The epidemiological study consists of an analysis of the BD cases by breed, age, and sex as well as a description of the endemic region. Then an analysis of the secular dynamics and the seasonal rhythm is presented. It is found, that BD affects many breeds, with a disposition for warmbloods, ponies and Haflingers. The results from the age distribution reveal a higher incidence of BD in the group of young horses up to an age of nine years and are most likely related to a normal age structure of the population. The distribution according to sex points to a slightly higher incidence in mares with 54.9%. Evaluation of the secular dynamics of BD during the monitored time span, indicate that there is a rise in cases every 3 - 5 years. This study shows a seasonal increase of BD cases during spring and early summer (April, May, June) and a decrease during August, September, October and November as stated in literature. The study also confirms that BD is a territorial disease. Furthermore, an enlargement as well as a shift of the main endemic area was shown. When comparing the 1990 – 1999 time span to that of 2000 – 2008 a remission of BD cases in the district of Mittelfranken becomes visible, whereas the endemic region expanded to southern and eastern Bavaria

    Investigations on the mode of action of gephyronic acid, an inhibitor of eukaryotic protein translation from myxobacteria.

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    The identification of inhibitors of eukaryotic protein biosynthesis, which are targeting single translation factors, is highly demanded. Here we report on a small molecule inhibitor, gephyronic acid, isolated from the myxobacterium Archangium gephyra that inhibits growth of transformed mammalian cell lines in the nM range. In direct comparison, primary human fibroblasts were shown to be less sensitive to toxic effects of gephyronic acid than cancer-derived cells. Gephyronic acid is targeting the protein translation system. Experiments with IRES dual luciferase reporter assays identified it as an inhibitor of the translation initiation. DARTs approaches, co-localization studies and pull-down assays indicate that the binding partner could be the eukaryotic initiation factor 2 subunit alpha (eIF2α). Gephyronic acid seems to have a different mode of action than the structurally related polyketides tedanolide, myriaporone, and pederin and is a valuable tool for investigating the eukaryotic translation system. Because cancer derived cells were found to be especially sensitive, gephyronic acid could potentially find use as a drug candidate

    Western blot for eIF2α following a DARTS approach.

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    <p>KB-3-1 cell lysates treated with varying concentration of GA were subjected to DARTS analysis with pronase. Lysates treated with cycloheximide served as negative control. GA binding protected the initiation factor eIF2α in a dose dependent manner. GAPDH was used as a loading control.</p

    Inhibition of translation in two <i>in vitro</i> systems.

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    <p>(a) GA (â– ) inhibited the translation in a rabbit reticulocyte lysate more efficiently than cycloheximide (â—Ź). The error bars show standard deviations. (b) GA also inhibited a wheat germ lysate translation system. Here, the relative standard deviations were < 5%. The error bars do not exceed the square symbols. All experiments were run in triplicates.</p

    Bicistronic reporter systems in KB-3-1 cells allowing to compare cap-dependent translation directly to cap-independent in the same environment.

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    <p>GA inhibited the translation of the polio IRES sequence (a) but not that of the CrPV IRES (b). DMDA-pateamine A which targets eIF4A also inhibited the polio IRES and not the CrPV IRES mediated translation. Cycloheximide, which targets the elongation phase, inhibited translation from both IRES sequences. All experiments were run in triplicates. The error bars show standard deviations.</p

    DARTS approach with GA.

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    <p>KB-3-1 cell lysates incubated with different concentrations of GA were subjected to pronase digestion. After SDS-PAGE protein bands were stained with Coomassie Brilliant Blue. A lysate treated with cycloheximide served as negative control. GA partially protected a protein at 36 kDa (see arrow) from digestion that is not protected by cycloheximide.</p
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