Restoring Conjunctival Tolerance by Topical Nuclear Factor–κB Inhibitors Reduces Preservative-Facilitated Allergic Conjunctivitis in Mice

Purpose.: To evaluate the role of nuclear factor–κB (NF-κB) activation in eye drop preservative toxicity and the effect of topical NF-κB inhibitors on preservative-facilitated allergic conjunctivitis. Methods.: Balb/c mice were instilled ovalbumin (OVA) combined with benzalkonium chloride (BAK) and/or NF-κB inhibitors in both eyes. After immunization, T-cell responses and antigen-induced ocular inflammation were evaluated. Nuclear factor–κB activation and associated inflammatory changes also were assessed in murine eyes and in an epithelial cell line after BAK exposure. Results.: Benzalkonium chloride promoted allergic inflammation and leukocyte infiltration of the conjunctiva. Topical NF-κB inhibitors blocked the disruptive effect of BAK on conjunctival immunological tolerance and ameliorated subsequent ocular allergic reactions. In line with these findings, BAK induced NF-κB activation and the secretion of IL-6 and granulocyte-monocyte colony-stimulating factor in an epithelial cell line and in the conjunctiva of instilled mice. In addition, BAK favored major histocompatibility complex (MHC) II expression in cultured epithelial cells in an NF-κB–dependent fashion after interaction with T cells. Conclusions.: Benzalkonium chloride triggers conjunctival epithelial NF-κB activation, which seems to mediate some of its immune side effects, such as proinflammatory cytokine release and increased MHC II expression. Breakdown of conjunctival tolerance by BAK favors allergic inflammation, and this effect can be prevented in mice by topical NF-κB inhibitors. These results suggest a new pharmacological target for preservative toxicity and highlight the importance of conjunctival tolerance in ocular surface homeostasis.Fil: Guzman, Mauricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Sabbione, Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Gabelloni, María Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Vanzulli, Silvia. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Trevani, Analía Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Giordano, Mirta Nilda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Galletti, Jeremías Gastón. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Desiccating stress-induced disruption of ocular surface immune tolerance drives dry eye disease

Dry eye is an allegedly autoimmune disorder for which the initiatingmechanisms and the targeted antigens in the ocular surface are not known,yet there is extensive evidence that a localized T helper type 1 (Th1)/Th17effector T cell response is responsible for its pathogenesis. In this work, weexplore the reconciling hypothesis that desiccating stress, which is usuallyconsidered an exacerbating factor, could actually be sufficient to skew theocular surface?s mucosal response to any antigen and therefore drive thedisease. Using a mouse model of dry eye, we found that desiccating stresscauses a nuclear factor kappa B (NF-jB)- and time-dependent disruption ofthe ocular surface?s immune tolerance to exogenous ovalbumin. Thispathogenic event is mediated by increased Th1 and Th17 T cells andreduced regulatory T cells in the draining lymph nodes. Conversely, topicalNF-jB inhibitors reduced corneal epithelial damage and interleukin (IL)-1band IL-6 levels in the ocular surface of mice under desiccating stress. Theobserved effect was mediated by an augmented regulatory T cell response, afinding that highlights the role of mucosal tolerance disruption in dry eyepathogenesis. Remarkably, the NF-jB pathway is also involved in mucosaltolerance disruption in other ocular surface disorders. Together, theseresults suggest that targeting of mucosal NF-jB activation could havetherapeutic potential in dry eye.Fil: Guzman, Mauricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Keitelman, Irene Angélica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Sabbione, Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Trevani, Analía Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Giordano, Mirta Nilda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Galletti, Jeremías Gastón. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Discurso juridico en el expediente que sobre costumbres en ceremonias ecliasticas siguen el reverendo ... Obispo y ... Dean y Cabildo de la Santa Iglesia Cathedral de Canarias informe que pone a los reales pies de su Magestad

Fecha tomada del final del textoSign.: A-Z2, Aa-Ll2Inic. grab.Texto con apostillas marginalesPort. con orla tip

Factors that condition the biological activity of IgG antibodies : Action of proteolytic enzymes and electric charge impact

En la presente Tesis, se estudió la capacidad de factores propios a los entornos inflamatorios e inherentes a los complejos inmunes (CI), de condicionar distintas respuestas biológicas inducidas a consecuencia de la interacción del fragmento Fc de los anticuerpos IgG con sus receptores celulares específicos (RFcg). Respecto a los primeros se evaluó el efecto de dos enzimas proteolíticas de distinta especificidad, pronasa y quimotripsina. Los resultados obtenidos indicaron que estas proteasas incrementan marcadamente la avidez y la funcionalidad del RFcgII expresado por neutrófilos, condicionando la magnitud de las respuestas biológicas que involucran la participación de este receptor. Este efecto, sin embargo, parece ser dependiente de las características del CI empleado como estímulo, puesto que las proteasas aumentaron notablemente las respuestas inducidas por eritrocitos sensibilizados con anticuerpos IgG y por CI solubles, pero no modificaron aquellas inducidas por CI precipitantes. La acción potenciadora de las proteasas parece ser selectiva del RFcgII, pues este efecto no fue observado en otros receptores operativos en neutrófilos. Considerando la existencia de altos niveles de proteasas en reas inflamatorias, es posible que este mecanismo sea relevante in vivo en la regulación de la actividad del RFcgII del neutrófilo humano. En cuanto a los factores inherentes a los CI, se analizó el impacto de la carga eléctrica de los antígenos y anticuerpos que los conforman, sobre su capacidad de inducir respuestas proinflamatorias y trombóticas mediadas por células fagocíticas y plaquetas, respectivamente. La cationización de la fracción IgG de los CI, procedimiento que incrementó sus pI desde 5,8-8,2 hasta 8,0-9,5, aumentó, al menos en un orden de magnitud, su capacidad de inducir funciones dependientes de los RFcg expresados por células fagocíticas tales como la citotoxicidad, la emisión de quimioluminiscencia y la liberación extracelular de elastasa. El efecto potenciador de la cationización fue a£n m s notable empleando plaquetas. Los CI que incluían anticuerpos IgG cationizados fueron capaces de inducir fuertes respuestas de activación de plaquetas lavadas, filtradas o plaquetas suspendidas en plasma, mientras que aquellos formados con componentes nativos fueron incapaces de inducir la activación plaquetaria bajo condiciones experimentales similares. La cationización del componente antigénico de los CI, también incrementó marcadamente su potencia biológica. En conjunto, estos hallazgos indican que la carga eléctrica de los CI constituye una propiedad critica que condiciona su capacidad de inducir la activación celular y sugieren que los anticuerpos y antígenos catiónicos podrían ser relevantes en eventos inflamatorios asociados a enfermedades que cursan con altos niveles de CI circulantes. Durante el transcurso de estos estudios se realizaron observaciones adicionales relacionadas con el desarrollo de procesos inflamatorios agudos. El paradigma corriente asume que las capacidad quimiot ctica de la IgG reside en su habilidad para formar CI e inducir la activación del sistema complemento y la subsecuente producción de péptidos quimiot cticos como el C5a. En la presente Tesis, se observó que los CI son capaces, per se, de estimular la quimiotaxis de neutrófilos a través de su interacción con el RFcgII. Esta actividad quimiot ctica intrínseca de los CI podría ser responsable, al menos en parte, delreclutamiento de neutrófilos observado en sitios inflamatorios de huéspedes deficientes de complemento.In the current Thesis it was studied the ability of different factors to condition biological functions induced by the interaction of the Fc fragment of IgG antibodies with their cellular specific receptors (FcgR). Both factors belonging to inflammatory focus and IC-intrinsecal factors were evaluated. Among the formers, the effect of two proteolytic enzymes with distinct specificity, pronase and chymotrypsin, was analyzed. The results obtained showed that proteases markedly increase the avidity and functionallity of FcgRII, conditioning the magnitude of the biological responses that involve this receptor. However, this effect appears to be dependent on the characteristics of the IC employed as stimulus judging by the capacity of proteases to increase functions induced by erythrocytes coated with IgG antibodies and soluble IC but not those induced by precipitating IC. The enhancing action of proteases seems to be restricted to FcgRII-dependent functions since proteases did not up-regulate the activity of other receptors expressed by neutrophils. Taking into account the high levels of proteases in inflammatory areas, these findings suggest that a mechanism involving the action of proteolytic enzymes could be relevant for the in vivo regulation of human neutrophil FcgRII activity. Among IC-intrinsecal factors, the impact of electric charge of their antibodies and antigens on their ability to induce proinflammatory and thrombotic responses mediated by phagocytes and platelets was analyzed. Cationization of the IgG fraction of IC, procedure that increased its pI from 5.8-8.2 to 8.0-9.5, enhanced at least by tenfold their ability to induce RFcg-dependent functions by phagocytic cells such as cytotoxicity, chemiluminescence emission and the elastase extracellular release. Noteworthy, it was observed that IC prepared with cationized antibodies were able to trigger platelet activation either in washed platelets, gel-filtered platelets or plasma suspended platelets. By contrast, IC formed with native components did not induce platelet activation under similar experimental conditions. Additional experiments showed that antigen cationization also markedly increses IC biological activity. These findings suggest that the electric charge of IC constitutes a critical property that conditions their ability to induce cellular activation and support a role of cationic antibodies and antigens in the development of inflammatory events associated to certain IC-induced diseases. During the course of these studies, additional observations related to the development of acute inflammatory processes were made. The current paradigm for the mechanism by which IgG induce neutrophil chemotaxis assert that this ability lies on its capacity to form IC and induce complement activation with the subsequent generation of chemotactic peptides such as C5a. In the current Thesis, it was observed that IC are able, per se, to induce neutrophil chemotaxis through their interaction with FcgRII. This intrinsic chemotactic activity of IC may account, at least in part, for the neutrophil recruitment that is observed at inflammatory sites in complement-deficient hosts.Fil:Trevani, Analía S.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Factores capaces de condicionar la actividad biológica de los anticuerpos IgG : Acción de las enzimas proteolíticas e impacto de la carga eléctrica

En la presente Tesis, se estudió la capacidad de factores propios a los entornos inflamatorios e inherentes a los complejos inmunes (CI), de condicionar distintas respuestas biológicas inducidas a consecuencia de la interacción del fragmento Fc de los anticuerpos IgG con sus receptores celulares específicos (RFcg). Respecto a los primeros se evaluó el efecto de dos enzimas proteolíticas de distinta especificidad, pronasa y quimotripsina. Los resultados obtenidos indicaron que estas proteasas incrementan marcadamente la avidez y la funcionalidad del RFcgII expresado por neutrófilos, condicionando la magnitud de las respuestas biológicas que involucran la participación de este receptor. Este efecto, sin embargo, parece ser dependiente de las características del CI empleado como estímulo, puesto que las proteasas aumentaron notablemente las respuestas inducidas por eritrocitos sensibilizados con anticuerpos IgG y por CI solubles, pero no modificaron aquellas inducidas por CI precipitantes. La acción potenciadora de las proteasas parece ser selectiva del RFcgII, pues este efecto no fue observado en otros receptores operativos en neutrófilos. Considerando la existencia de altos niveles de proteasas en reas inflamatorias, es posible que este mecanismo sea relevante in vivo en la regulación de la actividad del RFcgII del neutrófilo humano. En cuanto a los factores inherentes a los CI, se analizó el impacto de la carga eléctrica de los antígenos y anticuerpos que los conforman, sobre su capacidad de inducir respuestas proinflamatorias y trombóticas mediadas por células fagocíticas y plaquetas, respectivamente. La cationización de la fracción IgG de los CI, procedimiento que incrementó sus pI desde 5,8-8,2 hasta 8,0-9,5, aumentó, al menos en un orden de magnitud, su capacidad de inducir funciones dependientes de los RFcg expresados por células fagocíticas tales como la citotoxicidad, la emisión de quimioluminiscencia y la liberación extracelular de elastasa. El efecto potenciador de la cationización fue a£n m s notable empleando plaquetas. Los CI que incluían anticuerpos IgG cationizados fueron capaces de inducir fuertes respuestas de activación de plaquetas lavadas, filtradas o plaquetas suspendidas en plasma, mientras que aquellos formados con componentes nativos fueron incapaces de inducir la activación plaquetaria bajo condiciones experimentales similares. La cationización del componente antigénico de los CI, también incrementó marcadamente su potencia biológica. En conjunto, estos hallazgos indican que la carga eléctrica de los CI constituye una propiedad critica que condiciona su capacidad de inducir la activación celular y sugieren que los anticuerpos y antígenos catiónicos podrían ser relevantes en eventos inflamatorios asociados a enfermedades que cursan con altos niveles de CI circulantes. Durante el transcurso de estos estudios se realizaron observaciones adicionales relacionadas con el desarrollo de procesos inflamatorios agudos. El paradigma corriente asume que las capacidad quimiot ctica de la IgG reside en su habilidad para formar CI e inducir la activación del sistema complemento y la subsecuente producción de péptidos quimiot cticos como el C5a. En la presente Tesis, se observó que los CI son capaces, per se, de estimular la quimiotaxis de neutrófilos a través de su interacción con el RFcgII. Esta actividad quimiot ctica intrínseca de los CI podría ser responsable, al menos en parte, delreclutamiento de neutrófilos observado en sitios inflamatorios de huéspedes deficientes de complemento

Estudios electroquímicos de sistemas hidrotérmicos con electrodo de Pared-Tubo

Se construyó una celda con electrodo de pared-tubo (EPT) para el estudio electroquímico de sisternas hidrotérmicos hasta 215°C y 100 bar. La celda contiene un chorro incidente sobre una pared (electrodo) donde las condiciones hidrodinámicas en la región de estancamiento están bien definidas y son equivalentes a las del electrodo de disco rotatorio y el EPT tiene accesibilidad uniforme. Se estudiaron cuatro cuplas redox: Fe2+ / Fe3+, I2 / I-, quinona / hidroquinona y Fe(CN)6(3-) / F(CN)6(4-). Se obtuvo información de transporte en solución (coeficientes de difusión) y de cinética de transferencia de carga (coeficientes de transferencia de carga y constantes cinéticas). Se determinaron los parámetros de activación de dichos procesos. Finalmente se analizó la información obtenida teniendo en cuenta modelos de transporte en solución y de transferencia de carga

Noticias falsas sobre el coronavirus: las aclaraciones de dos investigadoras

En las últimas semanas, se dio conocer que algunos de los 169 proyectos para el desarrollo de vacunas contra el SARS-CoV-2 contabilizados por la OMS pasaron a la fase clínica III, que es aquella en la que se evalúa su seguridad y eficacia en un número grande de personas, para, en caso de que los ensayos resulten exitosos, ser aprobadas por los entes reguladores para ser aplicadas a la población general. Una de estas vacunas, la AZD1222, desarrollada por la Universidad de Oxford y la farmacéutica AstraZeneca, será producida en la Argentina (en conjunto con México) para América Latina, a través de la empresa biotecnológica mAbxience. Poco después de que se conocieron estos anuncios esperanzadores, comenzaron a circular en la Argentina, en medios de comunicación y redes sociales, mensajes basados en presupuestos falsos, tendientes a menoscabar las razonables expectativas que estas noticias pudieron despertar en la población. Las científicas del CONICET Analía Trevani y Mariana Maccioni refutan una serie de informaciones falsas, difundidas en medios de comunicación de la Argentina, que apuntan a desacreditar los avances alcanzados en el desarrollo de vacunas para COVID-19.Fil: Faigón, Miguel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Filosofía y Letras, Argentina.Fil: Trevani, Analía. Academia Nacional de Medicina. Instituto de Medicina Experimental; Argentina.Fil: Trevani, Analía. Sociedad Argentina de Inmunología; Argentina.Fil: Maccioni Mariana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.Fil: Maccioni Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Consejo en el Centro de Investigación en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.Fil: Maccioni Mariana. Sociedad Argentina de Inmunología; Argentina

Surface-Cross-Linked Micelles as Multifunctionalized Organic Nanoparticles for Controlled Release, Light Harvesting, and Catalysis

Surfactant micelles are dynamic entities with a rapid exchange of monomers. By “clicking” tripropargylammonium-containing surfactants with diazide cross-linkers, we obtained surface-cross-linked micelles (SCMs) that could be multifunctionalized for different applications. They triggered membrane fusion through tunable electrostatic interactions with lipid bilayers. Antenna chromophores could be installed on them to create artificial light-harvesting complexes with efficient energy migration among tens to hundreds of chromophores. When cleavable cross-linkers were used, the SCMs could break apart in response to redox or pH signals, ejecting entrapped contents quickly as a result of built-in electrostatic stress. They served as caged surfactants whose surface activity was turned on by environmental stimuli. They crossed cell membranes readily. Encapsulated fluorophores showed enhanced photophysical properties including improved quantum yields and greatly expanded Stokes shifts. Catalytic groups could be installed on the surface or in the interior, covalently attached or physically entrapped. As enzyme mimics, the SCMs enabled rational engineering of the microenvironment around the catalysts to afford activity and selectivity not possible with conventional catalysts

Flagellin delays spontaneous human neutrophil apoptosis

Neutrophils are short-lived cells that rapidly undergo apoptosis. However, their survival can be regulated by signals from the environment. Flagellin, the primary component of the bacterial flagella, is known to induce neutrophil activation. In this study we examined the ability of flagellin to modulate neutrophil apoptosis. Neutrophils cultured for 12 and 24 h in the presence of flagellin from Salmonella thyphimurim at concentrations found in pathological situations underwent a marked prevention of apoptosis. In contrast, Helicobacter pylori flagellin did not affect neutrophil survival, suggesting that Salmonella flagellin exerts the antiapoptotic effect by interacting with TLR5. The delaying in apoptosis mediated by Salmonella flagellin was coupled to higher expression levels of the antiapoptotic protein Mcl-1 and lower levels of activated caspase-3. Analysis of the signaling pathways indicated that Salmonella flagellin induced the activation of the p38 and ERK1/2 MAPK pathways as well as the PI3K/Akt pathway. Furthermore, it also stimulated IBα degradation and the phosphorylation of the p65 subunit, suggesting that Salmonella flagellin also triggers NF-B activation. Moreover, the pharmacological inhibition of ERK1/2 pathway and NF-B activation partially prevented the antiapoptotic effects exerted by flagellin. Finally, the apoptotic delaying effect exerted by flagellin was also evidenced when neutrophils were cultured with whole heat-killed S. thyphimurim. Both a wild-type and an aflagellate mutant S. thyphimurim strain promoted neutrophil survival; however, when cultured in low bacteria/neutrophil ratios, the flagellate bacteria showed a higher capacity to inhibit neutrophil apoptosis, although both strains showed a similar ability to induce neutrophil activation. Taken together, our results indicate that flagellin delays neutrophil apoptosis by a mechanism partially dependent on the activation of ERK1/2 MAPK and NF-B. The ability of flagellin to delay neutrophil apoptosis could contribute to perpetuate the inflammation during infections with flagellated bacteria. © 2010 USCAP, Inc All rights reserved.Fil:Salamone, G.V. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Gabelloni, M.L. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Vermeulen, M.E. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Trevani, A.S. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Extracellular DNA: A major proinflammatory component of Pseudomonas aeruginosa biofilms

We previously demonstrated that extracellular bacterial DNA activates neutrophils through a CpG- and TLR9-independent mechanism. Biofilms are microbial communities enclosed in a polymeric matrix that play a critical role in the pathogenesis of many infectious diseases. Because extracellular DNA is a key component of biofilms of different bacterial species, the aim of this study was to determine whether it plays a role in the ability of biofilms to induce human neutrophil activation. We found that degradation of matrix extracellular DNA with DNase I markedly reduced the capacity of Pseudomonas aeruginosa biofilms to induce the release of the neutrophil proinflammatory cytokines IL-8 and IL-1β (>75%); reduced the upregulation of neutrophil activation markers CD18, CD11b, and CD66b (p < 0.001); reduced the number of bacteria phagocytosed per neutrophil contacting the biofilm; and reduced the production of neutrophil extracellular traps. Consistent with these findings, we found that biofilms formed by the lasI rhlI P. aeruginosa mutant strain, exhibiting a very low content of matrix extracellular DNA, displayed a lower capacity to stimulate the release of proinflammatory cytokines by neutrophils, which was not decreased further by DNase I treatment. Together, our findings support that matrix extracellular DNA is a major proinflammatory component of P. aeruginosa biofilms. Copyright © 2010 by The American Association of Immunologists, Inc.Fil:Fuxman Bass, J.I. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Russo, D.M. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Gabelloni, M.L. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Giordano, M. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Zorreguieta, Á. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.Fil:Trevani, A.S. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina