Superovulación de vacas donantes de embriones utilizando una o dos aplicaciones de hormona folículo estimulante

Tesis (Doctor en Ciencias Agropecuarias)--UNC- Facultad de Ciencias Agropecuarias, 2015El objetivo de esta tesis fue evaluar la respuesta superovulatoria en donantes de embriones tratadas con aplicaciones reducidas de FSH diluida en una formulación de liberación lenta a base de ácido hialurónico (AH). En el experimento 1, se evaluó la vía de administración de la FSH diluida en AH en una sola aplicación. No hubo diferencias en el número de embriones transferibles entre las vacas del grupo Control (8 aplicaciones de FSH diluida en solución fisiológica cada 12 h y por 4 días; 10,3 ± 3,4) y las tratadas con FSH diluida en HA y administrada por via intramuscular (i.m.; 5,0 ± 1,7); pero el número de embriones fue menor (1,3 ± 1,1; P0,05) entre los dos protocolos en el numero de embriones transferibles obtenidos (7,1 ± 1,3 y 5,3 ± 0,8; respectivamente). El experimento 4 tuvo como objetivo evaluar la respuesta superovulatoria de donantes Angus, Brangus y Bonsmara tratadas con distintas dosis de FSH diluida en AH (20 mg/mL) y administrada en una única inyección por vía i.m. o de FSH diluida en solución fisiológica y administrada en 8 inyecciones cada 12 h y por 4 días. Los resultados obtenidos sugieren que las dosis adecuadas para dichas razas son 300, 260 y 200 mg respectivamente. A pesar de que estos resultados demostraron que una sola aplicación de FSH diluida en 20 mg/mL de AH resulta en una satisfactoria respuesta superovulatoria, la solución de AH es demasiado viscosa y difícil de mezclar con la FSH. Para evitar esto se realizó el experimento 5 para evaluar concentraciones más bajas de AH (10 y 5 mg/mL) pero en dos aplicaciones cada 48 h. No hubo diferencias en el número de embriones transferibles en las vacas tratadas con el tratamiento Control (6,7 ± 1,3) y las tratadas con dos aplicaciones cada 48 h de FSH en AH (8,9 ± 1,4 y 9,3 ± 1,9 para 10 y 5 mg/mL, respectivamente). Por último, el experimento 6 tuvo como objetivo evaluar la eficacia de la dilución de FSH en 5 mg/ml AH y administrado en dos aplicaciones i.m. cada 48 hs, luego de haber sido refrigerada o congelada por dos semanas. No se VI encontraron diferencias entre los distintos métodos de conservación de la dilución (P>0,05). En conclusión la superestimulación con una o dos aplicaciones de FSH diluida en AH resulta en una producción de embriones transferibles similar a la de un tratamiento tradicional de dos inyecciones i.m. 2 veces al día durante 4 días.The aim of this thesis was to evaluate the superovulatory response in donors treated with reduced applications of FSH diluted in a slow release formulation based on hyaluronic acid (HA). Experiment 1, was designed to evaluate the route of administration (i.m. or s.c.) of FSH diluted in AH in a single injection. There were no differences in the number of transferables embryos between cows in the Control group (8 twice-daily administrations of FSH diluted in saline for 4 days; 10.3 ± 3.4) and those treated with FSH diluted in HA and administered intramuscularly (i.m.; 5.0 ± 1.7); however, the number of transferable embryos was lower in those that were treated subcutaneously (1.3 ± 1.1; P0.05) in the number of transferable embryos was found between the two treatments (7.1 ± 1.3 and 5.3 ± 0.8, respectively. Experiment 4 was designed to compare superovulatory responses in Angus, Brangus and Bonsmara donor cows following the use of different dosages of FSH diluted in HA given as a single i.m. administration or by multiple i.m. injections. Results suggest that the appropriate dosages for each breed are 300, 260 and 200 mg, respectively. Although these results demonstrated that a single administration of FSH diluted in 20 mg/mL HA results in a satisfactory superovulatory response, the AH solution was too viscous and difficult to mix with the FSH. Therefore, Experiment 5 was designed to evaluate superovulatory response in beef cows treated with two i.m. injections (48 h apart) of FSH diluted in reduced AH concentrations (10 mg/mL or 5mg/mL). No differences (P=0.32) were found in the number of transferable embryos in cows in the Control group (6.7 ± 1.3) and those treated with FSH diluted in an AH solution and given in two i.m. injections (8.9 ± 1.4 and 9.3 ± 1.9 for 10 mg/mL and 5 mg/mL, respectively). Finally, Experiment 6 was designed to investigate the efficacy of FSH-AH solution after storage in the freezer or in the refrigerator for two weeks. There were no significant differences among groups (P>0.05). In conclusion, superstimulation by one or two injections of FSH diluted in AH results in similar number of embryos than the traditional treatment in which FSH is administered in twice-daily i.m. injections for 4 days

Regulation of Msx genes by a Bmp gradient is essential for neural crest specification

There is evidence in Xenopus and zebrafish embryos that the neural crest/neural folds are specified at the border of the neural plate by a precise threshold concentration of a Bmp gradient. In order to understand the molecular mechanism by which a gradient of Bmp is able to specify the neural crest, we analyzed how the expression of Bmp targets, the Msx genes, is regulated and the role that Msx genes has in neural crest specification. As Msx genes are directly downstream of Bmp, we analyzed Msx gene expression after experimental modification in the level of Bmp activity by grafting a bead soaked with noggin into Xenopus embryos, by expressing in the ectoderm a dominant-negative Bmp4 or Bmp receptor in Xenopus and zebrafish embryos, and also through Bmp pathway component mutants in the zebrafish. All the results show that a reduction in the level of Bmp activity leads to an increase in the expression of Msx genes in the neural plate border. Interestingly, by reaching different levels of Bmp activity in animal cap ectoderm, we show that a specific concentration of Bmp induces msx1 expression to a level similar to that required to induce neural crest. Our results indicate that an intermediate level of Bmp activity specifies the expression of Msx genes in the neural fold region. In addition, we have analyzed the role that msx1 plays on neural crest specification. As msx1 has a role in dorsoventral pattering, we have carried out conditional gain- and loss-of function experiments using different msx1 constructs fused to a glucocorticoid receptor element to avoid an early effect of this factor. We show that msx1 expression is able to induce all other early neural crest markers tested (snail, slug, foxd3) at the time of neural crest specification. Furthermore, the expression of a dominant negative of Msx genes leads to the inhibition of all the neural crest markers analyzed. It has been previously shown that snail is one of the earliest genes acting in the neural crest genetic cascade. In order to study the hierarchical relationship between msx1 and snail/slug we performed several rescue experiments using dominant negatives for these genes. The rescuing activity by snail and slug on neural crest development of the msx1 dominant negative, together with the inability of msx1 to rescue the dominant negatives of slug and snail strongly argue that msx1 is upstream of snail and slug in the genetic cascade that specifies the neural crest in the ectoderm. We propose a model where a gradient of Bmp activity specifies the expression of Msx genes in the neural folds, and that this expression is essential for the early specification of the neural crest.Fil: Tríbulo, Celeste. Universidad de Chile; Chile. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Aybar, Manuel Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad de Chile; ChileFil: Nguyen, Vu H.. University of Pennsylvania; Estados UnidosFil: Mullins, Mary C.. University of Pennsylvania; Estados UnidosFil: Mayor, Roberto. Universidad de Chile; Chile. Colegio Universitario de Londres; Reino Unid

Gli2 is required for the induction and migration of Xenopus laevis neural crest

The neural crest (NC) is a multipotent migratory embryonic population that is formed during late gastrulation and gives rise to a wide array of derivatives, including cells from the peripheral nervous system (PNS), the craniofacial bones and cartilages, peripheral glial cells, and melanocyte cells, among others. In this work we analyzed the role of the Hedgehog signaling pathway effector gli2 in Xenopus NC. We provide evidence that the gli2 gene is expressed in the prospective, premigratory and migratory NC. The use of a specific morpholino against gli2 and the pharmacological specific inhibitor GANT61 in different experimental approaches allowed us to determine that gli2 is required for the induction and specification of NC cells as a transcriptional activator. Moreover, gli2 also acts by reducing apoptosis in the NC without affecting its cell proliferation status. We also demonstrated that gli2 is required cell-autonomously for NC migration, and for the formation of NC derivatives such as the craniofacial cartilages, melanocytes and the cranial ganglia. Altogether, our results showed that gli2 is a key transcriptional activator to accomplish the proper specification and development of Xenopus NC cells.Fil: Cerrizuela, Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Vega López, Guillermo Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Biología; ArgentinaFil: Palacio, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; ArgentinaFil: Tríbulo, Celeste. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Biología; ArgentinaFil: Aybar, Manuel Javier. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Biología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas. Universidad Nacional de Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentin

ASOCIACIÓN ENTRE LA MASTITIS SUBCLÍNICA CON LA PÉRDIDA TEMPRANA DE GESTACIÓN EN UN HATO DE VACAS LECHERAS

El objetivo del presente estudio fue evaluar la asociación entre los diferentes grados de mastitis subclínica con la pérdida temprana de gestación durante los primeros 90 días posteriores al servicio en vacas lecheras Holstein. La investigación se realizó en una explotación lechera ubicada en Ecuador, provincia de Pichincha, cantón Mejía. Para el estudio se analizaron los datos de 619 vacas durante el período de octubre de 2015 hasta octubre de 2016. Se utilizaron tres grupos experimentales clasificados por la severidad de mastitis subclínica diagnosticada por California Mastitis Test (CMT). El Grupo control (CMT 0) vacas que no presentaron mastitis subclínica hasta los 90 días posteriores a la inseminación artificial (IA). El grupo CMT T-1, vacas diagnosticadas con mastitis subclínica grado trazas y grado 1 hasta los 90 días posteriores a la IA y el grupo CMT 2-3, vacas que presentaron mastitis subclínica grado 2 y 3 hasta los 90 días posteriores a la IA. El diagnóstico de gestación se realizó por ultrasonografía transrectal entre los 28 y 35 días posteriores a la IA y se realizó un seguimiento ecográfico a los 60 y 90 días de gestación. Se encontró una pérdida de gestación entre los 30 a 60 días del 12% y entre los 60 a 90 días del 5%. Con este resultado se evidenció una asociación entre mastitis subclínica grado 2 y 3 con la pérdida temprana de gestación (OR 2,6; p <0,01). Se postula que un proceso infeccioso en la ubre posterior a la IA desencadenaría la liberación de mediadores inflamatorios como la prostaglandina F2a que ocasionaría lisis del cuerpo lúteo y pérdida de la gestación. En conclusión, las vacas que tienen mastitis subclínica de grado 2 y 3 tienen mayor riesgo de pérdida de gestación durante los primeros 90 días posteriores al servicio.//The objective of this research was to evaluate the relationship between different levels of subclinical mastitis with the early gestation lost during the first 90 post-insemination days in Holstein dairy cattle. The research was made on a dairy farm located in Mejía, Pichincha Province, Ecuador. This research analyzed data from a sample of 619 cows during one year since October 2015 until 2016. Three experimental groups graded by the severity of subclinical mastitis and diagnosed by California Mastitis Test (CMT) were used. The control group (CMT 0), formed by cows that did not present any subclinical mastitis until 90 post-insemination days. The CMT T-1 group, formed by cows diagnosed with subclinical mastitis grade 1 up to 90 post-insemination days and the CMT 2-3 group, cows that presented subclinical mastitis grade 2 and 3 up to 90 post-insemination days. The pregnancy diagnosis was made by transrectal ultrasonography between 28 and 35 post-insemination days and a follow up ultrasound was performed at 60 and 90 days of gestation. A pregnancy loss of 12% was found between 30 to 60 and 5% between 60 to 90 days. With this result a relationship between subclinical mastitis grade 2 and 3 with early pregnancy loss was evidenced (OR 2.6, p <0.01). It is postulated that an infectious process in the udder after the insemination can induce the release of inflammatory mediators such as prostaglandin F2a that would cause lysis of the corpus luteum and loss of gestation. In conclusion, dairy cattle presenting subclinical mastitis grade 2 and 3 have a higher risk of pregnancy loss during the first 90 postinsemination days

Asociación entre la mastitis subclínica con la pérdida temprana de gestación en un hato de vacas lecheras

The objective of this research was to evaluate the relationship between different levels of subclinical mastitis with the early gestation lost during the first 90 post-insemination days in Holstein dairy cattle. The research was made on a dairy farm located in Mejía, Pichincha Province, Ecuador. This research analyzed data from a sample of 619 cows during one year since October 2015 until 2016. The control group (CMT 0), cows not presenting subclinical mastitis until 90 post-insemination days. The CMT T-1 group, cows diagnosed with subclinical mastitis grade 1 up to 90 post-insemination days and the CMT 2-3 group, cows that presented subclinical mastitis grade 2 and 3 up to 90 days post-insemination days. The pregnancy diagnosis was made by transrectal ultrasonography between 28 and 35 post-insemination days and a follow up ultrasound was performed at 60 and 90 days of gestation. A pregnancy loss of 12% was found between 30 to 60 and 5% between 60 to 90 days. With this result was evidenced a relationship between subclinical mastitis grade 2 and 3 with early pregnancy loss (OR 2.6, p <0.01). It is postulated that an infectious process in the udder after the insemination can induce the release of inflammatory mediators such as prostaglandin F2α that would cause lysis of the corpus luteum.O objetivo do presente estudo foi avaliar a relação entre os diferentes graus de mastite subclínica e a perda precoce da gestação durante os primeiros 90 dias após o serviço em vacas leiteiras da raça Holandesa. A pesquisa foi realizada em uma fazenda de gado leiteiro localizada no Equador, na província de Pichincha, no cantão Mejía. Para o estudo, foram avaliados dados de 619 vacas no período de outubro de 2015 a outubro de 2016. O Grupo Controle (CMT 0), foi composto por vacas que não apresentaram mastite subclínica até 90 dias após a inseminação artificial (IA). O grupo CMT T-1, vacas apresentando traços e grau 1 para o diagnóstico de mastite subclínica até 90 dias após a IA e o grupo CMT 2-3, vacas que apresentaram mastite subclínica graus 2 e 3 até 90 dias após a IA. O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia transretal entre 28 e 35 dias após a IA e o acompanhamento por ultrassonografia foi realizado aos 60 e 90 dias de gestação. Ocorreu 12% de perda gestacional entre 30 e 60 dias e 5% entre 60 e 90 dias. Com esse resultado, foi evidenciada a relação entre mastite subclínica grau 2 e 3 com perda precoce da gestação (OR 2,6; p <0,01). Postula-se que um processo infeccioso no úbere após a IA desencadeia a liberação de mediadores inflamatórios como a prostaglandina F2α, que pode causar a lise do corpo lúteo.El objetivo del presente estudio fue evaluar la asociación entre los diferentes grados de mastitis subclínica con la pérdida temprana de gestación durante los primeros 90 días posteriores al servicio en vacas lecheras Holstein. La investigación se realizó en una explotación lechera ubicada en Ecuador, en la provincia de Pichincha, cantón Mejía. Para el estudio se analizaron los datos de 619 vacas durante el periodo de octubre de 2015 hasta octubre de 2016. El Grupo control (CMT 0) vacas que no presentaron mastitis subclínica hasta los 90 días posteriores a la inseminación artificial (IA). El grupo CMT T-1, vacas diagnosticadas con mastitis subclínica grado trazas y grado 1 hasta los 90 días posteriores a la IA y el grupo CMT 2-3, vacas que presentaron mastitis subclínica grado 2 y 3 hasta los 90 días posteriores a la IA. El diagnóstico de gestación se realizó por ultrasonografía transrectal entre los 28 y 35 días posteriores a la IA y se realizó un seguimiento ecográfico a los 60 y 90 días de gestación. Se encontró una pérdida de gestación entre los 30 a 60 días del 12% y entre los 60 a 90 días del 5%. Con este resultado se evidenció una asociación entre mastitis subclínica grado 2 y 3 con la pérdida temprana de gestación (OR 2,6; p <0,01). Se postula que un proceso infeccioso en la ubre posterior a la IA desencadenaría la liberación de mediadores inflamatorios como la prostaglandina F2α que ocasionaría lisis del cuerpo lúteo