Establishment and Partial Characterization of an Epirubicin-Resistant Gastric Cancer Cell Line with Upregulated ABCB1

Multidrug resistance (MDR) is a major impediment to successful chemotherapy of gastric cancer. Our aim was to establish an epirubicin-resistant cell subline (AGS/EPI) and to elucidate the mechanisms involved in acquired EPI resistance. the AGS/EPI cell subline developed by exposing parental AGS cells to stepwise increasing concentrations of EPI demonstrated 2.52-fold resistance relative to the AGS cell line, and mRNA expression of the ATP-dependent drug-efflux pump P-glycoprotein (Pgp), more recently known as ABCB1 protein, was similarly upregulated. An AGS/EPI cell subline could thus be effectively established, and MDR mechanism of these cells was shown to be related to the overexpression of mRNA of the ABCB1 gene.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Universidade Federal de São Paulo, Dept Med, Div Gastroenterol, São Paulo, BrazilUniv Nove de Julho, Coll Pharm, Dept Hlth, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Dept Med, Div Gastroenterol, São Paulo, BrazilWeb of Scienc

CYP2E1 RsaI and 96-bp insertion genetic polymorphisms associated with risk for colorectal cancer

We investigated a possible association between alcoholism, cigarette smoking, obesity and CYP2E1 RsaI and 96-bp insertion genetic polymorphisms with risk for colorectal cancer (CRC). Patients with CRC (70 women and 61 men) were matched for gender and age to 206 healthy controls. the mean age of the two groups was 62 years. Meat intake, cigarette smoking and alcohol drinking were assessed using a specific frequency questionnaire. the body mass index was also calculated. DNA was extracted from peripheral blood; RsaI polymorphism genotypes were evaluated by PCR-RFLP and 96-bp insertion genetic polymorphisms were evaluated by specific primers. the distributions of CYP2E1 RsaI c1/c1, c1/c2 and c2/c2 genotypes were 90.2, 9.2 and 0.6%, respectively, in controls and 83.9, 13.7 and 2.4% in CRC cases. Allele c2 was associated with increased risk for CRC [odds ratio (OR) = 1.88, 95% confidence interval (95%CI) = 1.02-3.45]. the CYP2E1 RsaI c2/c2 genotype was associated with an increased risk for rectal cancer (OR = 3.23, 95% CI = 1.26-9.03). the 96-bp insertion was slightly more frequent in the CRC group (9.3 vs 11.4%, P = 0.19), especially in females (6.4 vs 11.5%, P = 0.34). Smoking, alcohol drinking or high intake of red meat and CYP2E1 polymorphisms were not associated with increased risk for CRC. the 96-bp insertion was marginally more frequent (P = 0.07) in undernourished CRC subjects. We concluded that the risk for CRC is higher among individuals with allele c2. the CYP2E1 RsaI c2/c2 genotype was associated with an increased risk for rectal cancer.Universidade Federal de São Paulo, Setor Oncol, Disciplina Gastroenterol, São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Setor Oncol, Disciplina Gastroenterol, São Paulo, BrazilWeb of Scienc

RNA Interference: a Promising Therapy for Gastric Cancer

Gastric cancer (GC) remains a virtually incurable disease when metastatic and requires early screening tools for detection of early tumor stages. Therefore, finding effective strategies for prevention or recurrence of GC has become a major overall initiative. RNA-interference (RNAi) is an innovative technique that can significantly regulate the expression of oncogenes involved in gastric carcinogenesis, thus constituting a promising epigenetic approach to GC therapy. This review presents recent advances concerning the promising biomolecular mechanism of RNAi for GC treatment.Universidade Federal de São Paulo, Dept Med, Div Gastroenterol, São Paulo, BrazilUniv Nove Julho, Dept Hlth, Coll Pharm, São Paulo, BrazilEstadual Univ Santa Cruz, Dept Biol Sci, Santa Cruz, BA, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Dept Med, Div Gastroenterol, São Paulo, BrazilWeb of Scienc

Study of genetic polymorphism of Nacetyltransferase (NAT2) and susceptibility to colorectal cancer in the brazilian population in the region of Sao Paulo

Backgrounds: Epidemiological and biological studies suggest that polymorphisms in activating enzymes may play a role in the susceptibility of cancer in particular with specific environmental exposures such as meat intake and cigarette smoking. Genetically determined differences in N-acetylation capacity by NAT2 (N acetyl transferase 2) has been important in the metabolism of HCA (heterocyclic amines) from cooked meats. The polymorphism of this gene result in fast (WT), intermediate (WT/Mx) or slow acetylators (Mx/Mx) phenotypes. Aim: We conducted a case-control study to investigate the possible effect of meat intake, cigarette smoking, genetic polymorphisms of NAT2 and colorectal cancer risk. Patients and Methods: Colorectal cancer patients were matched by sex and age with healthy controls individuals. Meat intake and cigarette smoking data were assessed by a questionnaire of food and cigarette frequency. We considered smokers, patients being active or previous smokers. DNA was extracted from peripheral blood and the genotypes of the polymorphism were assessed by PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP). Five NAT2 alleles were studied (WT, M1, M2, M3 and M4) using specific digestion enzymes Kpnl for M1, Taql for M2, BamHl for M3 and Mspl/Alul for M4. Results: 147 colorectal cancer patients, being 60% in the colon, 76 females and 212 controls were studied. The mean age of both groups was 62 years old. NAT2 slow acetylators (Mx/Mx) were observed in more than half of the individuals studied (59.8% in the case group and 51.9% in the control group). No significant differences were observed between the groups and the polymorphism of NAT2. The odds ratio for colorectal cancer in the slow acetylators was 1.38 (95 percent, interval confidence 0.90-2.12). Although the number of females was small (n=76 in the case group), we found a suggestion of a decreased risk of cancer in the intermediate acetylators individuals W/Mx (OR: 0.55; 0.29 – 1.02). This difference was not confirmed in males (OR: 0.56, 95 percent interval confidence 0.16-2.00). Between the NAT2 fast acetylators W/W or W/Mx, the intake of meat, more than 3 times a week, increased the risk of colorectal cancer (OR: 2.05; 95%IC: 1.01-4.16). No association between the meat intake and colorectal cancer risk was observed in NAT2 slow acetylators (OR: 1.38; 95%IC: 0.76-2.78). Conclusion: NAT2 slow acetylators genotypes were more common in cancer and controls. We did not find an association between colorectal cancer risk and polymorphism of NAT2. An increased risk of colorectal cancer had been detected in fast acetylators with an increased meat intake. Probably the high levels of HCA in meats in rapid acetylators increase the risk of colorectal cancer due to the constant exposure of the carcinogenic residues generated by the metabolites of this compound.Introdução: Estudos epidemiológicos e biológicos sugerem que polimorfismos em enzimas de ativação podem desempenhar um papel importante na suscetibilidade ao câncer, em especial com exposições ambientais específicas, tais como a ingestão de carne e o fumo. Diferenças determinadas geneticamente na capacidade de Nacetilação da NAT2 (N-Acetiltransferase 2) tem sido importantes no metabolismo das aminas heterocíclicas (HCA) presentes na carne preparadas em altas temperaturas. Os polimorfismos deste gene resultam nos fenótipos de rápida (WT), intermediária (WT/Mx) ou lenta (Mx/Mx) acetilação. Objetivo: Foi realizado um estudo casocontrole para investigar o possível efeito do consumo de carne, tabagismo, etilismo e os polimorfismos genéticos da NAT2 e risco de câncer colorretal. Casuística e Método: Pacientes com câncer colorretal foram pareados por sexo e idade com indivíduos sem câncer, que constituíram o grupo controle. Ingestão de carne, tabagismo e etilismo foram avaliados por um questionário de freqüência alimentar e de hábitos de vida. O DNA foi extraído do sangue periférico e os genótipos dos polimorfismos foram avaliados por PCR-RFLP - polimorfismo do fragmento de restrição. Cinco alelos da NAT2 foram estudados (WT, M1, M2, M3 e M4), usando enzimas de restrição específicas: Kpnl para M1, Taql para o M2, BamHI para o M3 e para M4 MspI / Alul. Resultados: Foram estudados 147 pacientes com câncer colorretal, sendo 60% no cólon, 76 do sexo feminino e 212 controles. A média de idade de ambos os grupos foi de 62 anos. Os indivíduos com fenótipo de acetilação lenta da NAT2 (Mx/Mx) foram observados em mais da metade dos indivíduos estudados (59,8% no grupo caso e 51,9% no grupo controle). Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos e os polimorfismos da NAT2. O odds ratio para câncer colorretal nos acetiladores lento foi 1,38 (95% IC: 0,90-2,12). Embora o número de indivíduos do sexo feminino tenha sido pequeno (n = 76, no grupo caso), encontramos uma tendência a diminuição do risco de câncer nos indivíduos com acetiladores intermediários W/Mx (OR: 0,55; 95% IC: 0,29-1,02). Esta diferença não foi confirmada no sexo masculino (OR: 0,56; 95% IC: 0,16-2,00). Entre os acetiladores rápidos W/W ou W/Mx, a ingestão de carne, mais de 3 vezes por semana, aumentou o risco de câncer colorretal (OR:2,05; 95%IC:1.01-4.16). Não houve associação entre o consumo de carne e o risco de câncer colorretal em NAT2 acetiladores lento (OR: 1,38 95% IC: 0.76-2.78). Conclusão: Os genótipos de lenta acetilação da NAT2 foram mais comuns nos grupos com câncer e controle. Não se encontrou associação entre o risco de câncer colorretal e o polimorfismo de NAT2. Um risco aumentado de câncer colorretal foi detectado em acetiladores rápidos com consumo de carne aumentado. Provavelmente, os elevados níveis de HCA das carnes em acetiladores rápido aumentam o risco de câncer colorretal, devido à exposição constante aos resíduos cancerígenos gerados pelos metabólitos deste composto.TEDEBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Estudo de alterações epigenéticas como biomarcadores no diagnóstico não invasivo do câncer colorretal

Objetivo: Analisar a metilação do DNA em 24 genes selecionando 5 candidatos a biomarcadores para uso diagnóstico não invasivo em câncer colorretal (CCR) comparando as alterações epigenéticas encontradas no tecido tumoral com as do tecido normal do cólon bem como o DNA livre circulante (FDNA) do sangue, avaliando o potencial destes marcadores na detecção do CCR. Métodos: O perfil de metilação dos 24 genes candidatos foi realizado utilizando o ensaio Methyl-ProfilerTM PCR Array System (SABiosciences); na segunda fase do estudo foi utilizado a técnica de HRM (High Resolution Melting) para os 5 genes selecionados. Resultados: Os 5 genes selecionados na primeira fase do estudo foram APC, DKK2, SFRP5, MLH1 e RUNX3. Entre os 68 indivíduos do grupo controle 42 eram mulheres e (DP) a média de idade foi de 59,9 anos (13,4). Entre os 46 indivíduos com CCR, 25 eram mulheres e a média de idade foi de 64,6 anos (13,6). No grupo caso 28 pacientes tinham tumor localizado no cólon (60,8%) e 18 pacientes com câncer retal (39,2%). De acordo com a classificação TNM, 2 pacientes (4,3%) eram estádio I, 20 pacientes (43,4%) eram estádio II, 18 pacientes (39,1%) eram estádio III, e 2 pacientes (4,3%) estágio IV. Os genes APC, DKK2 e SFRP5 mostraram perfil de metilação mais frequentes no grupo caso (p<0,001, p <0,001 e p<0,001). Os genes RUNX3 e MLH1, não apresentaram diferenças nos perfis de metilação entre os grupos (p=0,98 e p= 0,08, respectivamente). O perfil de metilação do FDNA do gene APC não mostrou diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p = 1,000), enquanto o FDNA do DKK2 foi mais frequente no grupo caso com p = 0,025. Conclusões: Nossos resultados permitiram concluir o potencial do DKK2, APC e SFRP5 como marcadores epigenéticos para o diagnóstico de CCR no tecido e do DKK2 no plasma. Um possível painel de marcadores epigenéticos pode ser uma ferramenta de rastreio para a detecção de doentes com CCR. Indivíduos com hipermetilação do DNA livre circulante do DKK2 no plasma poderiam ser candidatos a colonoscopia.Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016

N-Acetyltransferase 2 genetic polymorphisms and risk of colorectal cancer

AIM: To investigate the possible association between meat intake, cigarette smoking and N-acetyltransferase 2 (NAT2) genetic polymorphisms on colorectal cancer (CRC) risk