Nuevas aportaciones en la caracterización, cultivo y tratamiento en Acanthamoeba SPP

Las amebas de vida libre (AVL) del género Acanthamoeba son patógenos o parásitos oportunistas siendo los agentes etiológicos de la encefalitis granulomatosa amebiana (EGA), queratitis amebiana (QA) y amebiasis cutánea. Las cepas de este género se clasifican en 20 genotipos diferentes (T1 - T20). En los últimos años, el número de casos de encefalitis amebiana granulomatosa y, sobre todo, de queratitis amebiana han aumentado, debido a la mejora de las herramientas diagnósticas y un mayor conocimiento del personal sanitario sobre este parásito. En la mayoría de estos casos el genotipo al que pertenece la cepa Acanthamoeba aislada es el T4. Ambas patologías tienen un tratamiento problemático debido a la falta de fármacos eficaces o por la forma de resistencia de la ameba (quistes) o por el retraso en el diagnostico ya que la sintomatología es común a otras patologías. Por estos motivos, en los últimos años se ha estudiado la eficacia de una gran variedad de distintos compuestos, tanto de origen químico como natural. Para realizar este tipo de ensayos (cribado de fármacos) es necesario el aislamiento de las amebas y posterior cultivo en medio axénico (cultivo formado por una única especie de microorganismo). Además, una identificación del genotipo al que pertenece el aislado es recomendable, ya que, los aislados diferentes al genotipo T4 muestran una mayor resistencia a los fármacos que los aislados del genotipo T4. En más del 80 % de muestras procedentes de pacientes se detectó Acanthamoeba spp., mientras que en las muestras de las aguas de limnoembalses estudiados sólo se aisló Acanthamoeba spp. en un 9,6 %. Estos aislados se cultivaron en los medios axénicos habituales (PYG suplementado con 2 % de bactocasitona y CERVA) para realizar la identificación del genotipo, estudio de la patogenicidad y ensayos in vitro de cribado de compuestos posiblemente amebicidas. De las 10 cepas aisladas, sólo una (ISCIII-UAH 66/14) no creció en los medios tradicionales. Así pues, se diseñaron empíricamente medios de cultivo indefinidos basados en ingredientes habituales en los supermercados para intentar establecer un cultivo de ISCIII-UAH 66/14. Estos medios se nombraron medio 1, medio 2 y así sucesivamente hasta el medio 80, todos ellos se probaron en todas las cepas presentes en el laboratorio de parasitología de la UAH, el crecimiento se comprobó por placas sensibles a oxígeno (OCR) y por microscopio óptico. Se observó crecimiento en todas las cepas, incluso la cepa ISCIII-UAH 66/14, en los medios 39 y 80. Una vez establecidos los cultivos axénicos, se determinó el genotipo de los aislados clínicos y ambientales. La mayoría de estos, pertenecen al genotipo T4, una muestra clínica es T3 (ISCIII-UAH 66/14) y dos muestras ambientales son T2 (P-UAH-O3 y PV-UAH-V2). También se analizaron los factores de patogenicidad, pero no se observaron claras diferencias entre las cepas clínicas (teóricamente patógenas) y las ambientales (teóricamente no patógenas). Por último, se estudió el efecto amebicida del dimetilsulfóxido (DMSO), aceite del árbol del té (TTO), nanopartículas, dendrones y dendrímeros sobre trofozoítos de dos cepas clínicas con distinto genotipo (A. polyphaga 2961 – T4 y A. griffini MYP2004 – T3). Se comprobó que la combinación de DMSO y TTO tiene un gran efecto amebicida, pero es citotóxico en células humanas (células epiteliales de cornea y HeLa). De los sistemas dendríticos estudiados, los que mayor eficacia mostraron fueron BDTL072 y BDTL073 y no presentan citotoxidad en células humanas. Ambos son dendrímeros catiónicos carbosilanos cuyos grupos funcionales son biguanidas

EL BLOG, UNA HERRAMIENTA PARA LA ORIENTACIÓN PROFESIONAL

El presente trabajo aborda un tema que, en Cuba, involucra a estudiantes, docentes, familias e instituciones laborales: la orientación profesional. Se originó a partir de las carencias detectadas en el conocimiento sobre la carrera, sus asignaturas, objetivos, modos de actuación profesional, la práctica profesional, lugares donde pueden trabajar y otros aspectos, que muestran los estudiantes de primer año de Ingeniería Informática en la Universidad de Sancti Spíritus “José Martí Pérez”. Tiene como objetivo describir las posibilidades del blog para la orientación profesional, a partir de la experiencia con la herramienta “Futuros ingenieros informáticos espirituanos”. Para su implementación se utilizó la plataforma Reflejos. A través de una encuesta los estudiantes valoraron de manera favorable la herramienta. Del mismo modo las evaluaciones hechas al conocimiento adquirido mediante sus interacciones con el blog permiten concluir que contribuyó a mejorar su orientación profesional

Amoebicidal activity of cationic carbosilane dendrons derived with 4-phenylbutyric acid against Acanthamoeba griffini and Acanthamoeba polyphaga trophozoites and cysts

Amoebae from the genus Acanthamoeba are important pathogens responsible for severe illnesses in humans such as Acanthamoeba keratitis and granulomatous amoebic encephalitis. In the last few decades, AK diagnoses have steadily increased. Most patients suffering from AK were contact lens users and the infection was related to poor hygiene. However, therapy is not yet well established, and treatments may last for several months due to resistance. Moreover, these treatments have been described to generate cytotoxicity. Therefore, there is an urgent need to develop new therapeutic strategies against AK. In this study, the amoebicidal activity of different generation cationic carbosilane dendrons derived with 4-phenylbutyric acid was demonstrated against Acanthamoeba polyphaga and Acanthamoeba griffini trophozoites and cysts. In addition, the combination of chlorhexidine digluconate and the most effective dendron (ArCO(2)G(2)(SNMe3I)(4)) showed an in vitro effect against Acanthamoeba trophozoites and cysts, reducing the minimal trophozoite amoebicidal concentration as well as concentrations with cysticidal activity.Ministerio de Economía y CompetitividadUniversidad de AlcaláComunidad de Madri

Procedimiento para determinar la demanda de fuerza de trabajo calificada en el municipio La Palma

The demand of qualified work force is the fundamental element for the entrance projection and labor location of the graduate ones of the different formation levels. The work offers a tool for the determination of the necessity of qualified work force in the labor entities of the municipality La Palma. Starting from the results of the diagnosis it was proven that irregularities existed in the demand of graduates, besides that it was not in correspondence with the plans of integral development of the territory. With the elements obtained from the use of empiric methods of investigation, it was evaluated the necessity of elaborating a procedure for the upgrade of the demand of qualified work force in the selected municipality. The obtained results demonstrate the effectiveness of the elaborated tool by the increment of the quality of the information projected for the period 2018-2026.La demanda de fuerza de trabajo calificada es el elemento fundamental para la proyección de ingreso y ubicación laboral de los graduados de los diferentes niveles de formación. El trabajo que se propone brinda una herramienta para la determinación de la necesidad de fuerza de trabajo calificada en las entidades laborales del municipio La Palma. A partir de los resultados del diagnóstico se comprobó que existían irregularidades en la demanda de graduados, además de que la misma no estaba en correspondencia con los planes de desarrollo integral del territorio. Con los elementos obtenidos a partir de métodos empíricos de investigación utilizados se evaluó la pertinencia de elaborar un procedimiento para la actualización de la demanda de fuerza de trabajo calificada en el municipio seleccionado. Los resultados obtenidos demuestran la efectividad de la herramienta elaborada por el incremento de la calidad de la información proyectada para el período 2018-2026

A survey for gregarines (Protozoa: Apicomplexa) in arthropods in Spain

Gregarines thrive in the digestive tract of arthropods and may be deleterious to their hosts, especially when present in high densities. The impact of parasites on these invertebrates may affect both the ecosystem equilibrium and human economic activities. However, information available on gregarines in Spain is limited. Therefore, a microscopic study on prevalence of gregarine infection in 560 insects and crustaceans was undertaken in Madrid and Tarragona. Gregarina ormierei (78% prevalence), Stylocephalus gigas (56 %), Oocephalus hispanus (13 %) and Actinocephalus permagnus (only one infected out of six beetles examined) were found in coleopteran hosts. Gregarina ovata and G. chelidurellae showed moderate frequency of infection (35 %) in dermapterans. An undescribed Gregarina sp. (76 % prevalence) was observed for the first time in freshwater decapod crustaceans. Interestingly, G. ormierei showed a noticeable phenotypic dimorphism, which justifies its redescription based on modern taxonomic criteria. Sequences of the 18S rRNA gene could be obtained only in the presence of highly prevalent gregarines. G. ormierei and Gregarina sp. were related (85 and 94 % identity by BLASTN, respectively) to G. basiconstrictonea and G. cloptoni, respectively, whereas S. gigas was closely related to both Xiphocephalus ellisi and S. giganteus (> 97 % identity). Phylogenetic trees based on ribosomal sequences unequivocally grouped these new isolates either with the Gregarinidae (G. ormierei and Gregarina sp.) or the Stylocephalidae (S. gigas)

Influencia del estatus profesional de los jugadores de fútbol en la frecuencia y gravedad de las lesiones: estudio piloto comparativo

Objetivo El propósito del estudio es evaluar la frecuencia y la gravedad de las lesiones sufridas en un mismo equipo de fútbol durante 2 temporadas en 2 divisiones. Métodos Estudio comparativo entre 2 estatus de fútbol profesional: Primera División (PD) y Segunda División (SD). La muestra consistió en jugadores profesionales de un mismo equipo cuyas lesiones se registraron prospectivamente durante las temporadas 2006-2007 (SD) y 2008-2009 (PD). Resultados De las 101 lesiones registradas, 64 (63,4%) fueron consideradas leves, 26 (25,7%) moderadas y 11 (10,9%) graves. La incidencia de lesiones moderadas o graves durante el entrenamiento fue 3 veces mayor en la PD (3,36 vs 1,01; RR = 3,30), así como el total de lesiones durante el partido (52,82 vs 16,01; RR = 3,30). En cuanto a los días de baja, la incidencia fue mayor en PD, tanto en entrenamientos (60%) como en partidos (30%). El número de días perdidos por cada 1.000 h de exposición fue un 50% mayor en PD (129,60 vs 85,01 días/1.000 h de exposición). Conclusiones Los resultados obtenidos muestran que en el fútbol español el estatus profesional puede ser un factor determinante de las lesiones. Además, estos resultados confirman el hecho de que el riesgo de lesión en el lugar de trabajo es considerablemente más alto en el fútbol profesional que en la mayoría de los demás sectores. Sería necesario que los clubes analizaran la importancia de desarrollar estrategias de prevención de lesiones y usaran recursos financieros para reducir el riesgo

Influència de l’estatus professional dels jugadors de futbol en la freqüència i la gravetat de les lesions: estudi pilot comparatiu

Objectiu El propòsit d’aquest estudi fou avaluar la freqüència i la gravetat de les lesions sofertes en un mateix equip de futbol durant 2 temporades, en 2 divisions. Mètode Estudi comparatiu entre 2 estatus de futbol professional: primera divisió (PD) i segona divisió (SD). La mostra consistí en jugadors professionals d’un mateix equip les lesions dels quals s’enregistraren prospectivament durant les temporades 2006-2007 (SD) i 2008-2009 (PD). Resultats De les 101 lesions registrades, 64 (63,4%) foren considerades lleus, 26 (25,7%) moderades i 11 (10,9%) greus. La incidència de lesions moderades o greus durant l’entrenament fou 3 vegades superior a la PD (3,36 vs 1,01; RR = 3,30), així com el total de lesions durant el partit (52,82 vs 16,01; RR = 3,30). Quant als dies de baixa, la incidència fou major a la PD, tant en els entrenaments (60%) com en els partits (30%). El nombre de dies per cada 1.000 h d’exposició fou un 50% major a la PD (129,60 vs 85,01 dies/1.000 h d’exposició). Conclusions Els resultats obtinguts mostren que en el futbol espanyol l’estatus professional pot ser un factor determinant de lesions. A més, aquests resultats confirmen el fet que el risc de lesió en el lloc de treball és considerablement més alt en el futbol professional que en la majoria dels altres sectors. Caldria que els clubs analitzessin la importància de desenvolupar estratègies de prevenció de les lesions i que empressin els recursos econòmics necessaris per reduir-ne el risc

Laboratory analysis of soil respiration using oxygen-sensitive microplates

Soil respiration is usually monitored by measuring CO2 efflux. Most techniques available for such kind of analyses are inconvenient and difficult to adapt to micro-method format. The present study evaluates a new microplate-based method for studying soil respiration in the laboratory. Second-generation oxygen-sensitive microplates (OSM - containing a fluorescent probe attached to the bottom of the well which provides time-resolved fluorescence data) were used to measure soil respiration either in microcosm assays or in soil water extracts. The latter procedure (water extracts) was the least cumbersome, hence it was selected for further experiments. Soil respiration curves generally showed no lag phase, starting with an exponential oxygen consumption phase, followed by a period where respiration became stable after 8-10 h of incubation at 25 ºC. Once the procedure for measurement of oxygen consumption in soil was established, the acute toxic effect of diverse chemicals on soil was analysed with OSM. Streptomycin and penicillin failed to reduce soil respiration. Kanamycin plus neomycin, trimethoprim and 5-fluorocytosine exhibited limited inhibitory effects. In contrast, some chemicals (copper sulphate and amphotericin B) and fungicides (such as dodine and fosetyl) noticeably reduced fluorescence readings, showing concentrations to give half-maximal inhibition of respiration (ICR50) ranging from 0.0064 to 0.082 g/L. Finally, some insecticides and soil amendments assayed were either neutral or increased respiration. It is concluded that OSM are reliable, convenient, and yield quantitative results. Moreover, the system is relatively inexpensive and amenable to automation. However, results obtained using soil water extracts may be different from those derived from undisturbed soil aggregates, clods or slurries studied under field conditions

Ultrastructural Study of Acanthamoeba polyphaga Trophozoites and Cysts Treated In Vitro with Cationic Carbosilane Dendrimers

Cationic carbosilane dendrimers are branched molecules with antimicrobial properties. Their activity has been tested againstAcanthamoeba polyphaga, a causative agent ofAcanthamoebakeratitis, a severe ocular disease in humans.A. polyphagatrophozoites and cysts were exposed to different noncytotoxic cationic carbosilane dendrimers with proven antiamoebic activity. The effects of treatment on cell surface and cell ultrastructure were examined by scanning and transmission electron microscopy, respectively. Two of the dendrimers tested induced dramatic alterations of cellular ultrastructure in both trophozoites and cysts, including vacuolization, depletion of cytoplasmic contents, and reduced cell size. Additionally, we observed severe alterations of the plasma membrane with membrane blebbing in trophozoites and disruption in cysts. These alterations were also observed with chlorhexidine, a drug used for treatment ofAcanthamoebakeratitis. Our results support that these compounds may target membranes, and their action is critical for parasite integrity.Ministerio de Economía y CompetitividadComunidad de MadridJunta de Comunidades de Castilla-La Manch