El igf-ii estimula la actividad de mmp-9 y mmp-2 en un modelo de trofoblasto humano

La invasión del útero por el trofoblasto extravelloso de placenta de primer trimestre depende de la secreción de metaloproteasas de matriz (MMPs) las cuales degradan la matriz extracelular; dentro de las cuales las gelatinasas MMP-9 y MMP-2 juegan un papel muy importante. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de los ligandos del sistema de factores de crecimiento similares a la insulina (IGF) en la actividad de gelatinasas en una línea celular establecida de trofoblasto extravelloso invasivo, HTR8/SVneo. Mediante ensayos de zimografía se encontró que el tratamiento con IGF-II 10 nM estimula la actividad de proMMP-9 y proMMP-2 únicamente a las 24 horas. Dosis mayores de IGF-II mostraron un efecto inhibitorio en la actividad proteasa. Adicionalmente, el IGF-II 10 nM estimuló la actividad de otras dos gelatinasas no identificadas de peso molecular 52 kDa tras tratamiento por 24 horas. Ni la insulina ni el IGF-I en concentraciones 10 nM mostraron un efecto estimulador en la actividad de las gelatinasas. Estos resultados muestran el papel potencial del sistema IGF en la regulación de la invasión celular y ayudan a comprender el desarrollo del crecimiento maligno

EL IGF-II ESTIMULA LA ACTIVIDAD DE MMP-9 Y MMP-2 EN UN MODELO DE TROFOBLASTO HUMANO

La invasión del útero por el trofoblasto extravelloso de placenta de primer trimestre depende de la secreción de metaloproteasas de matriz (MMPs) las cuales degradan la matriz extracelular; dentro de las cuales las gelatinasas MMP-9 y MMP-2 juegan un papel muy importante. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de los ligandos del sistema de factores de crecimiento similares a la insulina (IGF) en la actividad de gelatinasas en una línea celular establecida de trofoblasto extravelloso invasivo, HTR8/SVneo. Mediante ensayos de zimografía se encontró que el tratamiento con IGF-II 10 nM estimula la actividad de proMMP-9 y proMMP-2 únicamente a las 24 horas. Dosis mayores de IGF-II mostraron un efecto inhibitorio en la actividad proteasa. Adicionalmente, el IGF-II 10 nM estimuló la actividad de otras dos gelatinasas no identificadas de peso molecular 52 kDa tras tratamiento por 24 horas. Ni la insulina ni el IGF-I en concentraciones 10 nM mostraron un efecto estimulador en la actividad de las gelatinasas. Estos resultados muestran el papel potencial del sistema IGF en la regulación de la invasión celular y ayudan a comprender el desarrollo del crecimiento maligno

Transforming Growth Factor Beta has Dual Effects on MMP9 and uPA Expression in HTR-8/SVneo Human Trophoblastic Cell Line

Invasion of trophoblast into endometrium is vital for successful pregnancy development. MMP9 and uPA are key proteases in this process, but it is still not clear the regulation of its expression by Transforming Growth Factor Beta (TGF-β), known negative regulator of trophoblast invasion. We evaluated the effect of TGF-β on the transcriptional expression of uPA and MMP9 over time, in HTR- /SVneo trophoblast cells cultured with or without 0.5 % fetal bovine serum, via RT qPCR. The involved transcription factors and signaling pathways were analyzed in silico, using Proscan, Enrich, PCViz and WikiPathway. Results showed that that TGF-β regulates the expression of uPA and MMP9. Serum modified the nature of TGF-β’s effects on uPA expression, from negative without serum to positive with it, showing opposite effects on MMP9 expression. In silico analysis evidenced different transcription factors for each protease, some belonging to TGF-β ssignaling pathway, and crosstalk with MAPK and Wnt/β-catenin pathways. The TGF-β ddual role is discussed proposing that serum affects the cellular context. Transcriptional regulation of MMP9 and uPA by TGF-β is differential and depends on serum presence and evaluation time

Additional file 1: of Serum depletion induces changes in protein expression in the trophoblast-derived cell line HTR-8/SVneo

Table S2. Preliminary assay: proteins identified via MS and bioinformatics analysis from 0.5 % serum culture. HTR-8/SVneo cells were grown in medium with 10 or 0.5 % FBS for 24 h. Total protein extracts (0.15 mg) were separated by 7 cm 2DE gels as previously described. Protein spots were analyzed via MALDI TOF and identified using the MASCOT search engine. MW (kDa) – theoretical and experimental molecular weight in kDalton; pI ~ – theoretical pI; MS score – protein score given by Mascot; % Seq – percentage sequence coverage; Pep match – number of peptides assigned to protein; Fold FBS 0.5 %/10 % – fold optical density of protein spot (expression) of 0.5 % serum proteomes (0.5 % FBS) compared to control proteomes (10 % FBS). Relevant GO terms for molecular function and biological process, retrieved by Nextprot database and DAVID tool. (XLS 57 kb