Obtención y caracterización de bioconjugados de metotrexato para la producción de anticuerpos

Los métodos analíticos para la identificación y cuantificación de metotrexato (MTX) se han diversificado y mejorado notablemente. Entre todos ellos, los métodos inmunoenzimáticos se han posicionado de manera sobresaliente debido a que son procedimientos que presentan prestaciones analíticas importantes en términos de sensibilidad, especificidad y potencial para tratar un gran número de muestras, a un costo relativamente inferior que aquéllas de índole instrumental. En este trabajo, se abordó la obtención de bioconjugados proteicos del MTX (BSA, OVA y HRP) y su caracterización, para ser utilizados como inmunorreactivos para la eventual producción de anticuerpos e identificación de MTX en ensayos inmunoenzimáticos en plataforma sólida tipo ELISA. Al objeto de realizar la conjugación proteica, se aprovecharon los carboxilatos disponibles en la estructura del MTX y los grupos -NH2 libres de los restos de lisina en las proteínas correspondientes. Etapa que implicó la formación del éster activo de MTX utilizando 1.3 equivalentes de carbonato de N,N’-disuccimidilo y 3.8 equivalentes de trietilamina en DMF anhidra. La obtención de los conjugados inmunizantes de mtx-C-BSA, de ensayo mtx-C-OVA y de señalización mtx-C-HRP, se prepararon a partir de disoluciones acuosas de la proteína correspondiente, en buffer de carbonatos 50 mM pH 9.6 y la adición del éster activo del hapteno del MTX. La determinación de la carga hapténica se realizó por UV/Vis y espectrometría de masas MALDI-TOF para cada uno de los bioconjugados resultando: 5.5 haptenos/ BSA que se utilizó como bioconjugado de inmunización, 3.0 haptenos/OVA para emplearse como conjugado de tapizado, y finalmente una relación de un hapteno por HRP, mismo que se empleó como trazador enzimático. Se aplicó un protocolo de inmunización en conejo hembra New Zealand blanco utilizando el bioconjugado inmunizante de mtx-C-BSA, y el suero policlonal se valoró a través de ensayos ELISA competitivos tanto en formato directo como indirecto que permitieron evaluar la afinidad de los anticuerpos policlonales hacia MTX con valores de IC50 del orden 3 nM. De esta manera, se comprobó la viabilidad de los bioconjugados proteicos del MTX preparados. No obstante, a las cargas hapténicas bajas de los bioconjugados preparados, se accedió satisfactoriamente a un lote de anticuerpos policlonales de conejo que exhibieron curvas de inhibición, con valores de IC50 cercanos a 3 nM permitiendo encontrar las condiciones óptimas para establecer un inmunoensayo c-ELISA en formato indirecto para la identificación del metotrexato en una matriz acuosa

Persistence of COVID-19 Symptoms after Recovery in Mexican Population

The severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is responsible for the coronavirus disease (COVID-19), a highly contagious infectious disease that has caused many deaths worldwide. Despite global efforts, it continues to cause great losses, and leaving multiple unknowns that we must resolve in order to face the pandemic more effectively. One of the questions that has arisen recently is what happens, after recovering from COVID-19. For this reason, the objective of this study is to identify the risk of presenting persistent symptoms in recovered from COVID-19. This case-control study was conducted in one state of Mexico. Initially the data were obtained from the participants, through a questionnaire about symptoms that they had at the moment of the interview. Initially were captured the collected data, to make a dataset. After the pre-processed using the R project tool to eliminate outliers or missing data. Obtained finally a total of 219 participants, 141 recovered and 78 controls. It was used confidence level of 90% and a margin of error of 7%. From results it was obtained that all symptoms have an associated risk in those recovered. The relative risk of the selected symptoms in the recovered patients goes from 3 to 22 times, being infinite for the case of dyspnea, due to the fact that there is no control that presents this symptom at the moment of the interview, followed by the nausea and the anosmia with a RR of 8.5. Therefore, public health strategies must be rethought, to treat or rehabilitate, avoiding chronic problems in patients recovered from COVID-19

Efecto de los ácidos fenólicos en el sistema antioxidante de plantas de tomate (Solanum lycopersicum Mill.)

Introduction. Phenolic acids belong to the group of phenolic compounds, their synthesis and concentration in plants increases when they are under biotic or abiotic stress conditions. Objective. To evaluate the effect of phenolic acids on the enzymatic and non-enzymatic antioxidant defense system in tomato plants subjected to biotic stress. Materials and methods. The experiment was carried out from March to December 2016, in Saltillo, Mexico. A tomate crop Saladette type of the Rio Fuego variety (Solanum lycopersicum Mill.) was stablished. Tomato plants inoculated with Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (1X105 CFU ml-1) were foliar sprayed with phenolic acids at a dose of 1 kg ha-1 with the Defens Gr® product (IA: phenolic acids 10 000 ppm). Leaves were sampled at 15, 31, and 92 days after the transplantation (ddt) and fruits at 90 ddt. Six treatments were used: 1) absolute control (T0), 2) application of phenolic acids before the inoculation with Clavibacter (AFA), 3) application of phenolic acids after inoculation with Clavibacter (AFD), 4) application of phenolic acids before and after inoculation with Clavibacter (AFAD), 5) only application of phenolic acids (AF), and 6) only inoculation with Clavibacter (Cmm). Results. The application of phenolic acids intervened in the activity of enzymatic and non-enzymatic antioxidants. A higher antioxidant capacity was found in leaf than in fruit, which was determined by ABTS (2,2’-azino-bis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonic acid)) and DPPH (1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil). The inoculation of tomato plants increased the activity of catalase and phenylalanine ammonium lyase enzymes in leaf; in addition, there was reduction of superoxide dismutase enzyme activity and total phenol content. Conclusion. Phenolic acids intervened in the enzymatic defense mechanisms of the plant and reduced the stress levels caused by inoculation.Introducción. Los ácidos fenólicos pertenecen al grupo de los compuestos fenólicos, su síntesis y concentración en las plantas aumenta cuando estas se encuentran bajo condiciones de estrés biótico o abiótico. Objetivo. Evaluar el efecto de los ácidos fenólicos sobre el sistema de defensa antioxidante enzimático y no enzimático en plantas de tomate sometidas a estrés biótico. Materiales y métodos. El experimento se realizó de marzo a diciembre de 2016, en Saltillo, México. Se estableció un cultivo de tomate tipo Saladette de la variedad Río Fuego (Solanum lycopersicum Mill.). A plantas de tomate inoculadas con Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (1X105 UFC ml-1) se les realizaron aspersiones foliares de ácidos fenólicos a una dosis de 1 kg ha-1 con el producto Defens Gr® (IA: ácidos fenólicos 10 000 ppm). Se muestrearon hojas a los 15, 31 y 92 días después del trasplante (ddt) y frutos a los 90 ddt. Se trabajó con seis tratamientos: 1) testigo absoluto (T0), 2) aplicación de ácidos fenólicos antes de inocular Clavibacter (AFA), 3) aplicación de ácidos fenólicos después de inocular Clavibacter (AFD), 4) aplicación de ácidos fenólicos antes y después de inocular Clavibacter (AFAD), 5) solo aplicación de ácidos fenólicos (AF) y 6) solo inoculación con Clavibacter (Cmm). Resultados. La aplicación de ácidos fenólicos intervino en la actividad de antioxidantes enzimáticos y no enzimáticos. Se encontró mayor capacidad antioxidante en hoja que en fruto, la cual se determinó por ABTS [2,2’-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-ácido sulfónico)] y DPPH (1,1-difenil-2-picrilhidrazil). La inoculación de las plantas de tomate aumentó la actividad de las enzimas catalasa y fenilalanina amonio liasa en hoja; además, hubo reducción de la actividad enzimática del superóxido dismutasa y el contenido de fenoles totales. Conclusión. Los ácidos fenólicos intervinieron en los mecanismos de defensa enzimáticos de la planta y redujeron los niveles de estrés ocasionados por la inoculación

Efecto de los ácidos fenólicos en plantas de tomate ("Lycopersicon esculentum" Mill.) inoculadas con "Clavibacter michiganensis"

Con el objetivo de evaluar el efecto de aplicaciones exógenas de ácidos fenólicos en el cultivo de tomate, se establecieron cuatro tratamientos: 1) un testigo absoluto; 2) plantas inoculadas con Clavibacter michiganensis subesp. Michiganensis (Cmm); 3) plantas inoculadas con Clavibacter michiganensis subesp. michiganensis y con aplicación de ácidos fenólicos; y 4) plantas solo con aplicación de ácidos fenólicos. Las aplicaciones se realizaron con intervalos de una semana hasta acumular un total de 10 aplicaciones durante el ciclo de cultivo. Los resultados indican que la aplicación de ácidos fenólicos no promovió efectos en las variables agronómicas del cultivo, sin embargo, si se observó una disminución significativa en severidad de Cmm. Además, se demostró que la aplicación de ácidos fenólicos modifica la densidad e índice estomático y en combinación con estrés biótico induce un menor tamaño de estomas. En las variables histológicas se encontró que con la aplicación de ácidos fenólicos el parénquima empalizada disminuyó su longitud, también indujo un menor número y área de vasos de xilema en hoja y raíz respectivamente y una mayor longitud de córtex en la raíz. Los resultados demostraron que la aplicación de ácidos fenólicos puede ser una alternativa viable para el control de Cmm. Palabras clave: cambios histológicos, estomas, incidencia, severidad

The Cytocidal Spectrum of Bacillus thuringiensis Toxins: From Insects to Human Cancer Cells

Bacillus thuringiensis (Bt) is a ubiquitous bacterium in soils, insect cadavers, phylloplane, water, and stored grain, that produces several proteins, each one toxic to different biological targets such as insects, nematodes, mites, protozoa, and mammalian cells. Most Bt toxins identify their particular target through the recognition of specific cell membrane receptors. Cry proteins are the best-known toxins from Bt and a great amount of research has been published. Cry are cytotoxic to insect larvae that affect important crops recognizing specific cell membrane receptors such as cadherin, aminopeptidase-N, and alkaline phosphatase. Furthermore, some Cry toxins such as Cry4A, Cry4B, and Cry11A act synergistically with Cyt toxins against dipteran larvae vectors of human disease. Research developed with Cry proteins revealed that these toxins also could kill human cancer cells through the interaction with specific receptors. Parasporins are a small group of patented toxins that may or may not have insecticidal activity. These proteins could kill a wide variety of mammalian cancer cells by recognizing specific membrane receptors, just like Cry toxins do. Surface layer proteins (SLP), unlike the other proteins produced by Bt, are also produced by most bacteria and archaebacteria. It was recently demonstrated that SLP produced by Bt could interact with membrane receptors of insect and human cancer cells to kill them. Cyt toxins have a structure that is mostly unrelated to Cry toxins; thereby, other mechanisms of action have been reported to them. These toxins affect mainly mosquitoes that are vectors of human diseases like Anopheles spp (malaria), Aedes spp (dengue, zika, and chikungunya), and Culex spp (Nile fever and Rift Valley fever), respectively. In addition to the Cry, Cyt, and parasporins toxins produced during spore formation as inclusion bodies, Bt strains also produce Vip (Vegetative insecticidal toxins) and Sip (Secreted insecticidal proteins) toxins with insecticidal activity during their vegetative growth phase

Platelet Membrane: An Outstanding Factor in Cancer Metastasis

In addition to being biological barriers where the internalization or release of biomolecules is decided, cell membranes are contact structures between the interior and exterior of the cell. Here, the processes of cell signaling mediated by receptors, ions, hormones, cytokines, enzymes, growth factors, extracellular matrix (ECM), and vesicles begin. They triggering several responses from the cell membrane that include rearranging its components according to the immediate needs of the cell, for example, in the membrane of platelets, the formation of filopodia and lamellipodia as a tissue repair response. In cancer, the cancer cells must adapt to the new tumor microenvironment (TME) and acquire capacities in the cell membrane to transform their shape, such as in the case of epithelial−mesenchymal transition (EMT) in the metastatic process. The cancer cells must also attract allies in this challenging process, such as platelets, fibroblasts associated with cancer (CAF), stromal cells, adipocytes, and the extracellular matrix itself, which limits tumor growth. The platelets are enucleated cells with fairly interesting growth factors, proangiogenic factors, cytokines, mRNA, and proteins, which support the development of a tumor microenvironment and support the metastatic process. This review will discuss the different actions that platelet membranes and cancer cell membranes carry out during their relationship in the tumor microenvironment and metastasis