Study of the regulation of CD8+ T cell responses against Mycobacterium tuberculosis and HIV.1 dually infected individuals

La tuberculosis (TB) es la primera causa de muerte en pacientes HIV+. La infección por Mycobacterium tuberculosis induce la activación de células T CD8+, sin embargo, aún se desconoce si estas células pueden mediar protección contra esta enfermedad. Durante la infección por HIV, que incrementa dramáticamente el riesgo a desarrollar TB, los linfocitos T CD4+ específicos para M. tuberculosis disminuyen drásticamente. Por lo tanto, la caracterización de las respuestas T CD8+ en pacientes coinfectados con TB y HIV podría revelar potenciales blancos terapéuticos para el desarrollo de terapias adyuvantes. En el presente trabajo de tesis caracterizamos las respuestas T CD8+ específicas contra M. tuberculosis en pacientes coinfectados con TB y HIV-1 (HIV-TB) a través del estudio de la distribución de las poblaciones de memoria y efectoras en células T CD8+ por citometría de flujo y de la caracterizaron de las respuestas antígeno-específicas mediante la estimulación ex vivo con antígenos de M. tuberculosis en estos pacientes. A su vez, evaluamos el rol de la activación de los macrófagos y de la vía de PD-1 sobre la función citotóxica de las células T CD8+, para lo cual desarrollamos un sistema in vitro que nos permitió evaluar las respuestas T CD8+ citotóxicas específicas contra M. tuberculosis utilizando macrófagos diferenciados de monocitos como células blanco. Llamativamente, los pacientes HIV-TB mostraron una inhibición de las respuestas T CD8+ específicas para M. tuberculosis asociada a una diferenciación deficiente en comparación con dadores sanos y pacientes HIV+. Específicamente, las células diferenciadas terminalmente mostraron un fenotipo poco diferenciado, con menor expresión de la molécula CD45RA. A su vez, el porcentaje de estas células correlacionó positivamente con la expresión de PD-1 en células CD27+, sugiriendo que el agotamiento y la diferenciación deficiente en células T CD8+ están asociados en el marco de la coinfección HIV-TB. Estudios previos de nuestro grupo mostraron que los pacientes HIV-TB presentan un desbalance en los niveles de hormonas adrenales inmunomoduladoras, como el cortisol y la dehidroepiandrosterona (DHEA). A su vez, trabajos previos demostraron que la administración de DHEA incrementa respuestas específicas contra M. tuberculosis y otros patógenos en modelos murinos y durante la TB activa en humanos. Nosotros observamos que el nivel plasmático de DHEA correlacionó positivamente con el porcentaje de células T CD8+ diferenciadas terminalmente, lo que sugiere que el desbalance endócrino asociado a la coinfección por HIV y TB contribuye a la disfunción de estas células. Posteriormente, evaluamos el efecto modulador de DHEA sobre la función y el estado de diferenciación de células T CD8+. Así, DHEA incrementó las respuestas T CD8+ específicas para M. tuberculosis como también su diferenciación terminal in vitro. Con el objeto de estudiar el rol de la activación de los macrófagos y de la vía de PD-1 sobre la función citootóxica de células T CD8+, establecimos un sistema in vitro para evaluar las respuestas T CD8+ citotóxicas específicas contra M. tuberculosis utilizando macrófagos diferenciados de monocitos como células blanco. Mediante este ensayo pudimos detectar la citotoxicidad específica contra diversos estímulos incluidos antígenos de M. tuberculosis. A su vez, este método nos permitió determinar que la degranulación citotóxica es el principal mecanismo involucrado en la citotoxicidad producida durante el co-cultivo de células T CD8+ aisladas con macrófagos diferenciados in vitro. Los resultados mostraron que la activación por IFN-γ, que induce una polarización de los macrófagos hacia un perfil M1, incrementó notablemente la citotoxicidad antígeno-específica inducida por células T CD8+ sobre macrófagos diferenciados in vitro en comparación con los macrófagos no activados o activados alternativamente. A su vez, la expresión de PD-L1 en los macrófagos se incrementó prominentemente luego de su activación con IFN-γ. En concordancia con esto, tanto la expresión de PD-L1 en monocitos/macrófagos como la expresión de PD-1 en células T CD8+ provenientes de derrames pleurales de pacientes con pleuritis tuberculosa se vio incrementada notablemente respecto de su expresión en células de sangre periférica, indicando que la vía de PD-1 se encuentra inducida en el sitio de infección durante la pleuritis tuberculosa. Finalmente, observamos que la inhibición de la vía de PD-1/PD-L1 mediante el bloqueo de PD-L1 incrementó la citotoxicidad específica inducida por células T CD8+ tanto en macrófagos no activados como en macrófagos activados por IFN-γ. Por el contrario, el bloqueo de PDL-1 no tuvo efecto sobre la citotoxicidad ejercida sobre macrófagos polarizados hacia un perfil M2. En su conjunto, los resultados del presente trabajo de tesis muestran que la función citotóxica específica contra M. tuberculosis es deficiente en las células T CD8+ de pacientes coinfectados con HIV y Tuberculosis. A su vez, observamos que el desbalance hormonal característico de estos pacientes contribuye a la disfunción que presentan estas células y pudimos probar la capacidad de la hormona adrenal DHEA para restaurar, al menos parcialmente, esta función. Finalmente, determinamos la importancia de la activación de los macrófagos hacia un perfil M1 sobre la capacidad citotóxica de las células T CD8+, así como el rol inhibitorio de esta función por parte de la vía PD-1/PD-L1, mediante el desarrollo de un método fehaciente para evaluar la citotoxicidad in vitro. Así, nuestros hallazgos contribuyen al conocimiento de la inmunopatología Tuberculosa en pacientes infectados con HIV, ayudando a dilucidar los procesos que subyacen a la mayor susceptibilidad a la Tuberculosis en estos pacientes. Asimismo, nuestros resultados ratifican la importancia de la inmunidad mediada por células T CD8+ durante la infección tuberculosa, contribuyendo al conocimiento de estas células como posibles blancos terapéuticos en el desarrollo de mejores tratamientos para la TB en pacientes HIV+ así como de una tan necesaria vacuna efectiva contra la Tuberculosis.Tuberculosis (TB) is the first cause of death among HIV-infected people. Mycobacteriumtuberculosis infection elicits CD8+ T-cell responses, which are recruited to the lung duringinfection and found in the granulomas of infected people, although, it is still unknown whether CD8+ T cells mediate protection against TB. During HIV infection, which dramatically increases TB risk, anti-tubercular CD4+ T cell responses are severely diminished. Therefore, wehypothesized that characterizing CD8+ T cell responses in HIV-infected patients would uncoverpotential therapeutic targets for adjuvant anti-TB treatment in these patients. In the presentwork, we characterized TB-specific CD8+ T cell responses in a cohort of HIV-1-TB co-infectedpatients and compared these responses with those found in healthy subjects and HIV-infectedpatients. We studied effector/memory distribution of CD8+ T cells by multicolor flow cytometryand characterized specific anti-TB CD8+ T cell responses by ex-vivo stimulation with M.tuberculosis bacilli. One of our most important findings was that HIV-TB patients showed a strong inhibition inspecific CD8+ T cell responses due to impaired cytotoxic cells differentiation. Specifically,terminally differentiated CD8+ T cells showed a less differentiated phenotype with lower levelsof CD45RA. Also, the percentage of these less differentiated cells positively correlated withthose of PD-1+ cells among central memory CD8+ T cells, suggesting that exhaustion anddeficient differentiation are related during HIV-TB co-infection. Previous work from our group showed that HIV-TB patients exhibit an imbalance in immunemodulatoryadrenal hormones, like cortisol and dehydroepiandrosterone (DHEA). Also, inprevious works DHEA improved specific immune responses against M. tuberculosis and otherpathogens in mouse models and also during active TB in humans. We observed that DHEAplasma levels positively correlated with those of CD8+ T cells fully differentiated, suggesting Abstractthat the endocrine imbalance associated to HIV-TB co-infection contributes to dysfunction inthese cells. Then we evaluated the effect of DHEA in-vitro. We found that DHEA improved TB-specificcytotoxic CD8+ T cell responses and CD8+ T cell differentiation in cells from HIV-TB patients. In order to evaluate the role or the macrophage activation and PD-1 pathway on CD8+ T cellsfunction, we established an in vitro system to study cytotoxic CD8+ T cell responses against M.tuberculosis antigens by using monocyte-derived macrophages as target cells. By this, we wereable to detect cytotoxic specific responses against a variety of stimuli including M. tuberculosisantigens. This method also allowed us to determine the preponderant role of cytotoxicdegranulation as the main mechanism involved in cytotoxic killing during CD8+ T cellmacrophageco-culture in vitro. Our results showed that IFN-γ activation, which induced M1 polarization, significantly increasedantigen-specific CD8+ T cell cytotoxicity over in vitro differentiated macrophages, compared tonon-activated or M2 activated macrophages. Additionally, PD-L1 expression in macrophageswas notably increased after IFN-γ activation. Accordingly, both the expression of PD-L1 inmonocytes/macrophages and the expression of PD-1 in CD8+ T cells from pleural effusion wereincreased compared to peripheral blood in TB pleurisy patients, showing that PD-1 pathway isexacerbated in the site of infection during TB pleurisy. Finally, PD-1/PD-L1 pathway inhibitionincreased specific cytotoxicity by CD8+ T cells on macrophages in vitro both in non-activatedand IFN-γ-activated macrophages. On the contrary, PDL-1 blockade had no effect over thecitotoxicity exerted by CD8+ T cells on M2-polarized macrophages. The results shown in the present study show that cytotoxic function against M. tuberculosisantigens is impaired in CD8+ T cells from HIV-TB coinfected patients. Also, we showed that thecharacteristic hormonal imbalance in these patients contributes to CD8+ T cell dysfunction while DHEA can restore it, at least partially. Finally, we determined the importance of macrophageactivation to an M1 profile over CD8+ T cell cytotoxicity, as well as the inhibitory role of PD- Abstract 1/PDL-1 pathway over this function, by developing a feasible method to study cytotoxic killing invitro. Altogether, our findings contributes to the knowledge of tuberculous immune pathology in HIV+persons, helping to disclose the process beneath the higher susceptibility for TB in HIV-infectedpatients. Furthermore, our results support the importance of CD8+ T cell mediated immunityduring M. tuberculosis infection, providing information on these cells as new cell targets for thedevelopment of better therapeutic treatments for TB inr HIV+ patients, as well as anindispensable effective vaccine against Tuberculosis.Fil: Suárez, Guadalupe Verónica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Expansion of CD25-Negative Forkhead Box P3-Positive T Cells during HIV and Mycobacterium tuberculosis Infection

Tuberculosis (TB) and HIV alter the immune system, and coinfected (HIV-TB) individuals usually present deregulations of T-lymphocytic immune response. We previously observed an increased frequency of “unconventional” CD4+CD25−FoxP3+ Treg (uTreg) population during HIV-TB disease. Therefore, we aimed to explore the phenotype and function of uTreg and conventional CD4+CD25+FoxP3+ Treg subsets (cTreg) in this context. We evaluated the expression of CD39, programmed cell death protein 1 (PD1), glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR), and the effector/memory distribution by flow cytometry in cTreg and uTreg. Also, IL-10, TGF-β, IFN-γ production, and the suppressor capacity of uTregs were analyzed in cocultures with effector lymphocytes and compared with the effect of regulatory T cells (Tregs). We found diminished expression of CD39 and higher levels of PD1 on uTreg compared to cTreg in both HIV-TB and healthy donors (HD). In addition, uTreg and cTreg showed differences in maturation status in both HIV-TB and HD groups, due to the expansion of effector memory uTregs. Interestingly, both HIV-TB and HD showed a pronounced production of IFN-γ in uTreg population, though no significant differences were observed for IL-10 and TGF-β production between uTreg and cTreg. Moreover, IFN-γ+ cells were restricted to the CD39− uTreg population. Finally, when the suppressor capacity was evaluated, both uTreg and cTreg inhibited polyclonal T cell-proliferation and IFN-γ production in a similar extent. These findings suggest that uTregs, which are expanded during HIV-TB coinfection, exert regulatory functions in a similar way to cTregs despite an altered surface expression of Treg characteristic markers and differences in cytokine production.Fil: Angerami, Matias. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Suárez, Guadalupe Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Vecchione, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Laufer, Natalia Lorna. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Ameri, Diego. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos ; ArgentinaFil: Ben, Graciela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos ; ArgentinaFil: Perez, Hector. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos ; ArgentinaFil: Sued, Omar Gustavo. Fundación Huésped; ArgentinaFil: Salomon, Horacio Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Quiroga, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentin

Cross-hybridization between HPV genotypes in the Linear Array Genotyping Test confirmed by Next-Generation Sequencing

Background: Linear Array Genotyping Test (LA) is one of the gold standards used for Human Papillomavirus (HPV) genotyping, however, since its launching in 2006, new HPV genotypes are still being characterized with the use of high specificity techniques such as Next-Generation Sequencing (NGS). Derived from a previous study of the IMSS Research Network on HPV, which suggested that there might be cross-reaction of some HPV genotypes in the LA test, the aim of this study was to elucidate this point. Methods: Double stranded L1 fragments (gBlocks) from different HPVs were used to perform LA test, additionally, 14 HPV83+ and 26 HPV84+ cervical samples determined with LA, were individually genotyped by NGS. Results: From the LA HPV83+ samples, 64.3% were truly HPV83+, while 42.9% were found to be HPV102+. On the other hand, 69.2% of the LA HPV84+ samples were HPV84+, while 3.8, 11.5 and 30.8% of the samples were indeed HPV 86, 87 and 114 positive, respectively. Additionally, novel nucleotide changes in L1 gene from HPV genotypes 83, 84, 87, 102 and 114 were determined in Mexican cervical samples, some of them lead to changes in the protein sequence. Conclusions: We demonstrated that there is cross-hybridization between alpha3-HPV genotypes 86, 87 and 114 with HPV84 probe in LA strips and between HPV102 with HPV83 probe; this may be causing over or under estimation in the prevalence of these genotypes. In the upcoming years, a switch to more specific and sensitive genotyping methods that detect a broader spectrum of HPV genotypes needs to be implemented

LA U INVESTIGA: Revista Científica. Facultad Ciencias de la Salud. Volumen 3. Número 2

En el presente volumen se distinguen varios ámbitos de la investigación en salud desde artículos asociados a la promoción de salud, prevención de enfermedades, así como investigaciones de casos clínicos que evidencia la experiencia del equipo de salud en patologías específicas. Hay que resaltar que muchos de los artículos presentados en el volumen actual corresponden a los resultados de investigaciones ejecutadas en la academia, propias de la Universidad Técnica del Norte y de otras.1._ Melanoma antebraquial derecho metastásico a pa¬red abdominal y pelvis presentación de un caso clínico. 2._ Carcinoma papilar de localizacion extratiroidea. 3._ Tumores del golfo de la yugular 4._ Estudio comparativo del desarrollo psicomotor en niños/as de 1 a 3 años del Centro Infantil del Buen Vivir “CENTRO PUCARA” y “GOTITAS DE AMOR” del cantón Antonio Ante de la provincia de Imbabura. 5._ Adaptaciones de las técnicas comunicacionales al proceso terapéutico de salud mental infantil. 6._ La dinámica de la investigación científica en la formación de los profesionales de enfermería: una aproximación al problema de investigación. 7._ Las agresiones en las parejas de enamorados en la adolescencia y el equilibrio emocional. 8._ Rasgos de personalidad y su influencia en la calidad de vida en los estudiantes de la Unidad Educativa” Las Américas” 9._ Estudio de la postura corporal y su relación con la obesidad y sobrepeso en niños de 6 a 12 años del cantón Antonio Ante de la provincia de Imbabura. 10._ Caracterización de cuidadores informales de personas con discapacidad de la provincia de Im¬babura. 11._ Intervención educativa sobre embarazo en la adolescencia en estudiantes del tercer año de bachillerato de la unidad educativa “Madre Tere¬sa Bacq” Imbabura-Ecuador. 12._ Acceso a la atención de consulta externa de los usuarios del centro de llamadas, que asisten al subcentro de salud San Antonio, Tanguarin Iba¬rra, ecuador 2016. 13._ Prevalencia de disfunción familiar en la parro¬quia urbana de Urcuquí

La renovación de la palabra en el bicentenario de la Argentina : los colores de la mirada lingüística

El libro reúne trabajos en los que se exponen resultados de investigaciones presentadas por investigadores de Argentina, Chile, Brasil, España, Italia y Alemania en el XII Congreso de la Sociedad Argentina de Lingüística (SAL), Bicentenario: la renovación de la palabra, realizado en Mendoza, Argentina, entre el 6 y el 9 de abril de 2010. Las temáticas abordadas en los 167 capítulos muestran las grandes líneas de investigación que se desarrollan fundamentalmente en nuestro país, pero también en los otros países mencionados arriba, y señalan además las áreas que recién se inician, con poca tradición en nuestro país y que deberían fomentarse. Los trabajos aquí publicados se enmarcan dentro de las siguientes disciplinas y/o campos de investigación: Fonología, Sintaxis, Semántica y Pragmática, Lingüística Cognitiva, Análisis del Discurso, Psicolingüística, Adquisición de la Lengua, Sociolingüística y Dialectología, Didáctica de la lengua, Lingüística Aplicada, Lingüística Computacional, Historia de la Lengua y la Lingüística, Lenguas Aborígenes, Filosofía del Lenguaje, Lexicología y Terminología

Adrenal steroids modulate the phenotype and function of M. tuberculosis-stimulated human dendritic cells

Cell-mediated immunity, cytokines induced during the specific immune response and T-cell populations are crucial factors for containing Mycobacterium tuberculosis infection. Recent reports suggest a cross-regulation between adrenal steroids (glucocorticoids and dehydroepiandrosterone, DHEA) and the function of antigen-presenting cells (APCs). Therefore, we investigated the role of adrenal hormones on the functional capacity of M. tuberculosis-induced dendritic cells (DCs). Cortisol significantly inhibited the functions of M. tuberculosis-induced DCs. Interestingly, the presence of DHEA enhanced the M. tuberculosis-induced expression of MHC I, MHC II and CD86 and also increased ERK1/2 phosphorylation. Moreover, DHEA improved the production of IL-12 in response to M. tuberculosis stimulation, diminished IL-10 secretion and could not modify TNF-α synthesis. Importantly, we observed that DHEA enhanced the antigen-specific T-cell proliferation and IFN-γ production induced by M. tuberculosis-stimulated DC. These data show for the first time the relevance of the adrenal axis (especially of DHEA) in the modulation of DC function in the context of tuberculosis, a disease where the induction of a Th1 environment by APCs is crucial for the development of an effective immune response to the mycobacteria.Fil: Angerami, Matías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina; Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia del Sida; Argentina;Fil: Suárez, Guadalupe Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina;Fil: Pascutti, María Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina;Fil: Salomon, Horacio Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina; Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología; Argentina;Fil: Bottasso, Oscar Adelmo. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Inmunología; Argentina;Fil: Quiroga, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina; Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Microbiología. Centro Nacional de Referencia del Sida; Argentina

Cisplatin inhibits testosterone synthesis by a mechanism that includes the action of reactive oxygen species (ROS) at the level of P450scc

Cisplatin (Cs) is a chemotherapeutic agent able to generate reactive oxygen species (ROS) which are linked to several side effects of the drug. Even when it is known that Cs produces Leydig cell dysfunction, it is unknown whether this particular side effect is mediated by ROS. The aim of this study was to evaluate the in vitro effects of Cs on testosterone production and the participation of ROS in this effect. We demonstrate that Cs promotes the generation of ROS in a time-, and concentration-dependent fashion, not only in mouse testicular interstitial cells but also in MA-10 Leydig cells. Also, Cs inhibits testosterone synthesis in a concentration-dependent fashion (5–50 μM for 4 h) and to a similar extent, in cells exposed to human chorionic gondadotropin hormone (hCG), to an analog of the second messenger cAMP (8Br-cAMP) or to a freely diffusible cholesterol analog (22R-hydroxycholesterol). However, this treatment does not inhibit the conversion of pregnenolone to testosterone. These data suggest that Cs exerts its inhibitory action on testosterone synthesis by an action at the level of P450scc. We also demonstrated that an antioxidant impairs the inhibitory effect of Cs on the conversion of the cholesterol analog into pregnenolone and that Cs does not change the expression level of P450scc mRNA. Therefore, it is concluded that Cs inhibits testosterone synthesis by a mechanism that includes the inhibition of P450scc by ROS.Fil: Mori Sequeiros, María de Las Mercedes. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquimica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentina; ArgentinaFil: Acquier, Andrea Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquimica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentina; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Odontología. Cátedra de Farmacología; ArgentinaFil: Suárez, Guadalupe Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentina; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquimica; ArgentinaFil: Gómez, Natalia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquimica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentina; ArgentinaFil: Gorostizaga, Alejandra Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquimica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentina; ArgentinaFil: Mendez, Carlos Fernando. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquimica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentina; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Odontología. Cátedra de Farmacología; ArgentinaFil: Paz, Cristina del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentina; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Departamento de Bioquimica; Argentin

Detection of Alpha, Beta, Gamma, and Unclassified Human Papillomaviruses in Cervical Cancer Samples From Mexican Women

International audienceBackground: Cervical cancer (CC) is associated to high-risk human papillomavirus (HPV) infections, for this reason it is crucial to have sensitive and accurate HPV diagnostic tests. To date, most research is focused on HPVs within the Alphapapillomavirus (α-PVs) genus and little attention has been paid to cervical infections with other HPV genotypes, like those of the Betapapillomavirus (β-PVs) and Gammapapillomavirus (γ-PVs) genera. The aim of this study was to determine the HPV genotypes from different genera in women with CC using Next-Generation Sequencing (NGS).Methods: The study comprised 48 HPV positive CC samples evaluated with the Linear Array HPV Genotyping test and individually sequenced by 454 NGS using PGMY09/11 and FAP primers. To determine the HPV genotypes present in each sample, the obtained sequences were compared with all HPV L1 gene reference sequences from the Papillomavirus Episteme database (PaVE). Moreover, 50 HPV positive low-grade cervical lesion samples individually genotyped with NGS were also included to determine the genotypes present preferentially in CC patients.Results: Among the 48 CC samples, 68.75% consisted of multiple HPV infections, 51 different genotypes were detected, of which 7 are still unclassified, 28 belong to α-PVs (6, 11, 16, 18, 26, 30, 33, 35, 39, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 53, 54, 59, 62, 66, 68, 69, 70, 71, 74, 81, 102, 114), 10 to β-PVs (5, 12, 21, 37, 38b, 47, 80, 107, 118, 122), and 6 to γ-PVs (101, 103, 123, 135, 147, 214). Among them, HPV16 was the most prevalent genotype (54.2%), followed by HPV18 (16.7%), HPV38b (14.6%), and HPVs 52/62/80 (8.3%). Some genotypes were exclusively found in CC when compared with Cervical Intraepithelial Neoplasia grade 1 (CIN1) samples, such as HPVs 5, 18, 38b, 107, 122, FA39, FA116, mSK_120, and mSK_136.Conclusions: This work demonstrates the great diversity of HPV genotypes detected by combining PGMY and FAP primers with NGS in cervical swabs. The relatively high attribution of β- and γ- PVs in CC samples suggest their possible role as carcinogenic cofactors, but deeper studies need to be performed to determine if they have transforming properties and the significance of HPV-coinfections