Elaboración de sondas moleculares para la detección de virus de yerba mate

La yerba mate (Ilex paraguariensis A St‐Hil) es un arbusto perenne originario de América del Sur. En Argentina, se evidenciaron plantas de yerba mate con síntomas virales de amarillamiento, clorosis de nervaduras, moteado, anillos y diseños lineales cloróticos. Análisis mediante microscopía electrónica, técnicas moleculares y secuenciación masiva, permitieron identificar los virus Yerba mate chlorosis-associated virus (YmCaV), perteneciente al género Cytorhabdovirus, Yerba mate-associated circular DNA virus (YMaCV), un virus circular de ADN monocatenario, y otro patógeno viral parcialmente secuenciado, posiblemente de la familia Closteroviridae. El objetivo del trabajo fue elaborar sondas moleculares para la identificación masiva de los virus de yerba mate. Se purificaron productos de PCR amplificados con cebadores específicos, diseñados para cada uno de los virus. Los productos aislados se clonaron y secuenciaron para confirmar la identidad del inserto. A partir de los plásmidos seleccionados se sintetizaron ribosondas para la detección de YmCaV y el posible closterovirus, y una sonda de DNA para el virus YMaCV, utilizando los kits ?RNA Labeling and Detection? y ?DIG DNA Labeling and Detection? (Roche), respectivamente. Para el diagnóstico de plantas de yerba mate, se ajustó la técnica dot blot en nitrocelulosa. Las sondas específicas para YmCaV y YMaCV reaccionaron con los testigos positivos de cada virus, mientras que no reaccionaron con los testigos negativos. La sonda para la detección del posible closterovirus sigue en desarrollo. Este trabajo permitió ajustar una técnica para el diagnóstico masivo de los virus YmCaV y YMaCV.Fil: Nome, Claudia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: Bejerman, Nicolas. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: de Breuil, Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; Argentina5to Congreso Argentino de Fitopatología y 59º Reunión APS División CaribeArgentinaAsociación Argentina de Fitopatólogo

Production of polyclonal antiserum for the detection of cymbidium mosaic virus and odontoglossum ringspot virus in orchids.

Las orquídeas (familia Orchidaceae) son susceptibles a diversos factores bióticos y abióticos que afectan su desarrollo y calidad. Entre ellos, Cymbidium mosaic virus (CymMV) y Odontoglossum ringspot virus (ORSV) son los patógenos más frecuentes y de mayor importancia económica a nivel mundial. La transmisión mecánica de estos virus y la multiplicación principalmente agámica de las orquídeas hacen necesario contar con material madre libre de virus. El objetivo de este trabajo fue elaborar reactivos de diagnóstico para la detección de CymMV y ORSV. Se elaboró un antisuero policlonal contra CymMV+ORSV que se tituló 1:10000 mediante NC-ELISA. El antisuero fue procesado y se obtuvieron IgG e IgG-conjugada anti CymMV+ORSV dilución 1:500 para su utilización en DAS-ELISA. La capacidad inmunodiagnóstica de esta técnica se evaluó mediante el análisis de muestras provenientes de orquídeas con síntomas característicos de infección viral, recolectadas en viveros comerciales de la ciudad de Córdoba, Argentina. La presencia de virosis se detectó en el 22 % de las muestras estudiadas y en el 75 % de los establecimientos relevados. La capacidad de estos reactivos para identificar CymMV, ORSV e infecciones mixtas en orquídeas permitirá agilizar y economizar los análisis. Esto representaría una ventaja para las detecciones a gran escala.Orchids (family Orchidaceae) are susceptible to several biotic and abiotic factors that affect their development and quality. Among them, Cymbidium mosaic virus (CymMV) and Odontoglossum ringspot virus (ORSV) are the most frequent pathogens, with the greatest economic impact worldwide. The mechanical transmission of these viruses in addition to the predominantly agamic multiplication of orchids, make it necessary to work with virus-free plant material. The objective of this work was to develop diagnostic reagents for the detection of CymMV and ORSV. A polyclonal antiserum against CymMV + ORSV was made with a titer of 1:10000 determined by NC-ELISA. The antiserum was processed generating IgG and IgG-conjugated” anti CymMV+ORSV were obtained for use in DAS-ELISA in a dilution of 1:500. The immunodiagnostic capacity of this technique was evaluated by analyzing samples from orchids with characteristic viral symptoms, collected from commercial nurseries in the city of Córdoba, Argentina. Viral infections were detected in 22 % of the samples analyzed and in 75 % of the nurseries surveyed. The ability of these reagents to identify CymMV, ORSV and mixed infections in orchids, will speed up analyzes and reduce their costs. This would represent an advantage for large-scale detections.Fil: Dottori, Carolina Andrea. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; ArgentinaFil: de Breuil, Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: Tuma Borgonovo, Maria Alejandra. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Agropecuarias; ArgentinaFil: Nome, Sergio Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; Argentin

Análisis exploratorio de zonas con diferente probabilidad de ocurrencia del Groundnut ringspot virus en la provincia de Córdoba

La principal región manisera del país se encuentra en la provincia de Córdoba donde la superficie sembrada con este cultivo se localiza, en orden de importancia, en los departamentos Río Cuarto, Gral. Roca, Juárez Celman, Pte. R. Sáenz Peña, Tercero Arriba, Gral. San Martín y Río Segundo. Sin embargo, debido a la necesidad de suelos para los programas de rotación, la superficie sembrada con maní presenta un sostenido aumento en zonas no tradicionales ubicadas en los departamentos Río Primero, Calamuchita, Unión y Marcos Juárez, entre otros. En esta región, el cultivo es afectado por el Groundnut ringspot virus (GRSV), un virus perteneciente al género Orthotospovirus, el cual ha ocasionado epifitias provocando mermas en el rendimiento del cultivo en aquellos lotes afectados. En la naturaleza, este virus es transmitido desde una planta enferma a otra sana únicamente por especies de trips vectores que han adquirido el patógeno durante sus estadios juveniles de desarrollo. La presencia de estos insectos, su dinámica y características poblacionales, sumado a las condiciones climáticas de cada región, constituyen los factores más importantes que determinan el área donde la virosis constituye un riesgo para el cultivo. El objetivo de este trabajo fue comenzar a definir zonas con probabilidad diferencial de ocurrencia de la enfermedad a fin de generar conocimiento epidemiológico para el manejo regional de esta virosis.Instituto de Patología VegetalFil: Dottori, Carolina Andrea. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; ArgentinaFil: Giannini Kurina, F. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Cátedra de Estadística y Biometría; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola (UFYMA); Argentina.Fil: Córdoba, M. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Cátedra de Estadística y Biometría; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola (UFYMA); Argentina.Fil: Lenardon, Sergio Luis. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. Departamento Biología Agrícola; ArgentinaFil: De Breuil, Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola (UFYMA); Argentin

Database of historical records of the presence/absence of GRSV in 835 georeferenced peanut fields

A survey was carried out in commercial peanut fields over 16 years, from 2004-05 to 2010-11, and from 2012-13 to 2021-22 growing seasons, respectively. The study area encompassed different towns distributed throughout the main peanut-producing region of Argentina, located between 31° and 36° S and between 63° and 66° W, in the center of the country. The study were conducted annually from February to April. Altogether, 835 peanut fields were arbitrarily selected, georeferenced, and inspected for the presence/absence of orthotospovirus-infected plants.Fil: Dottori, Carolina Andrea. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: de Breuil, Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; Argentin

Identification and molecular characterization of a novel circularsingle?stranded DNA virus associated with yerba mate in Argentina

AbstractA single-stranded DNA (ssDNA) virus was detected in Yerba mate samples showing chlorotic linear patterns, chloroticrings and vein yellowing. The full-genome sequences of six different isolates of this ssDNA circular virus were obtained,which share > 99% sequence identity with each other. The newly identified virus has been tentatively named as yerbamate-associated circular DNA virus (YMaCV). The 2707 nt-long viral genome has two and three open reading frame onits complementary and virion-sense strands, respectively. The coat protein is more similar to that of mastreviruses (44%identity), whereas the replication-associated protein of YMaCV is more similar (49% identity) to that encoded by a recentlydescribed, unclassified ssDNA virus isolated on trees in Brazil. This is the first report of a circular DNA virus associatedwith yerba mate. Its unique genome organization and phylogenetic relationships indicates that YMaCV represents a distinctevolutionary lineage within the ssDNA viruses and therefore this virus should be classified as a member of a new specieswithin an unassigned genus or family

Effects of Cucumber mosaic virus on yield and yield components of peanut

In Argentina, peanut (Arachis hypogaea) is naturally infected by Cucumber mosaic virus (CMV), subgroup II. The study involved the evaluation of the effects on yield and yield components in response to CMV infection at different growth stages: 4-6 developed nodes on the main axis (V4-6), 12-16 developed nodes on the main axis (V12-16) and onset of bloom (R1). The results showed that CMV infection significantly reduces peanut seed yield, mainly due to a severe decrease in seed average weight which declined approximately by 30%, 20% and 11% when the virus was inoculated at V4-6, V12-16 and R1, respectively. The number of pods, seeds, and seeds per pod were affected only when the virus was inoculated at V4-6. The percentage of confectionery peanut was also significantly affected when CMV was inoculated at vegetative crop stages. In addition, seed size and weight/volume ratio were greatly affected by the virus since the infected plants produced a higher proportion of small seeds. Larger seeds decreased when the plants were infected at earlier growth stages. Finally, infected plants produced a significantly greater number of immature pods than the healthy ones.Fil: de Breuil, Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: Giolitti, Fabián José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: Bejerman, Nicolas. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: Lenardon, Sergio Luis. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; Argentin

Molecular characterization of Sunflower chlorotic mottle virus: A member of a distinct species in the genus Potyvirus

The complete nucleotide (nt) and deduced amino acid (aa) sequences of the C (common) and CRS (chlorotic ringspot) Argentine strains of SuCMoV have been determined. The SuCMoV-C RNA genome consists of 9,965 nt, whereas indels within the P1 coding region of SuCMoV-CRS make its genomic length 15 nt shorter. Nucleotide and aa sequence identities between the polyproteins of the C and CRS strains of SuCMoV were 92.3 and 95.6%, respectively. Pairwise comparisons between the polyproteins of the C and CRS strains of SuCMoV and the viruses of the Potato virus Y (PVY) subgroup revealed identities of 66.5-66.9% at the nt level and 69.7-69. 8% at the aa level. These results and phylogenetic analyses show that although SuCMoV strains cluster together with the potyviruses belonging to the PVY subgroup, SuCMoV should be considered a member of a distinct species in the genus Potyvirus. © 2010 Springer-Verlag.Fil: Bejerman, Nicolas. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Fitopatología y Fisiología Vegetal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Giolitti, Fabián José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Fitopatología y Fisiología Vegetal; ArgentinaFil: de Breuil, Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Fitopatología y Fisiología Vegetal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; ArgentinaFil: Lenardon, Sergio Luis. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Fitopatología y Fisiología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria; Argentin

Sequencing of two Sunflower chlorotic mottle virus isolates obtained from different natural hosts shed light on its evolutionary history

Sunflower chlorotic mottle virus (SuCMoV), the most prevalent virus of sunflower in Argentina, was reported naturally infecting not only sunflower but also weeds. To understand SuCMoV evolution and improve the knowledge on its variability, the complete genomic sequences of two SuCMoV isolates collected from Dipsacus fullonum (-dip) and Ibicella lutea (-ibi) were determined from three overlapping cDNA clones and subjected to phylogenetic and recombination analyses. SuCMoV-dip and -ibi genomes were 9,953-nucleotides (nt) long; their sequences contained an open reading frame of 9,561 nucleotides, which encoded a polyprotein of 3,187 amino acids flanked by a 5′-noncoding region (NCR) of 135 nt and a 3′-NCR of 257 nt. SuCMoV-dip and -ibi genome nucleotide sequences were 90.9 identical and displayed 90 and 94.6 % identity to that of SuCMoV-C, and 90.8 and 91.4 % identity to that of SuCMoV-CRS, respectively. P1 of SuCMoV-dip and -ibi was 3-nt longer than that of SuCMoV-CRS, but 12-nt shorter than that of SuCMoV-C. Two recombination events were detected in SuCMoV genome and the analysis of dN/dS ratio among SuCMoV complete sequences showed that the genomic regions are under different evolutionary constraints, suggesting that SuCMoV evolution would be conservative. Our findings provide evidence that mutation and recombination would have played important roles in the evolutionary history of SuCMoV.Instituto de Patología VegetalFil: Bejerman, Nicolas Esteban. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Giolitti, Fabian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; ArgentinaFil: De Breuil, Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Lenardon, Sergio Luis. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patología Vegetal; Argentin

Development of a full-length infectious clone of sunflower chlorotic mottle virus (SuCMoV)

A full-length cDNA clone (p35SuCMoV) of the sunflower chlorotic mottle virus common strain (SuCMoV-C) genomic RNA was constructed. Three cDNA fragments covering the whole genome of SuCMoV-C were cloned between a cauliflower mosaic virus 35S promoter and a nopaline synthase terminator. Mechanical inoculation of sunflower and Nicotiana occidentalis seedlings with p35SuCMoV DNA led to systemic infection. Symptoms induced by p35SuCMoV were similar to those caused by the wild-type SuCMoV-C but appeared four days later. Infection was confirmed by a western blot test, electron microscopy, RT-PCR and inoculation of progeny virions to sunflower seedlings. This is the first report about the construction of a biologically active, full-length cDNA copy of the SuCMoV-C RNA genome.Fil: Bejerman, Nicolas. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Giolitti, Fabián José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; ArgentinaFil: de Breuil, Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Lenardon, Sergio Luis. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Patología Vegetal; Argentina. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria; Argentin

Effects of Cucumber mosaic virus on yield and yield components of peanut

In Argentina, peanut (Arachis hypogaea) is naturally infected by Cucumber mosaic virus (CMV), subgroup II. The study involved the evaluation of the effects on yield and yield components in response to CMV infection at different growth stages: 4-6 developed nodes on the main axis (V4-6), 12-16 developed nodes on the main axis (V12-16) and onset of bloom (R1). The results showed that CMV infection significantly reduces peanut seed yield, mainly due to a severe decrease in seed average weight which declined approximately by 30%, 20% and 11% when the virus was inoculated at V4-6, V12-16 and R1, respectively. The number of pods, seeds, and seeds per pod were affected only when the virus was inoculated at V4-6. The percentage of confectionery peanut was also significantly affected when CMV was inoculated at vegetative crop stages. In addition, seed size and weight/volume ratio were greatly affected by the virus since the infected plants produced a higher proportion of small seeds. Larger seeds decreased when the plants were infected at earlier growth stages. Finally, infected plants produced a significantly greater number of immature pods than the healthy ones.Fil: de Breuil, Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: Giolitti, Fabián José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: Bejerman, Nicolas. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; ArgentinaFil: Lenardon, Sergio Luis. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Fitopatología y Modelización Agrícola; Argentin