Miltefosine and Benznidazole Combination Improve Anti-Trypanosoma cruzi In Vitro and In Vivo Efficacy

Drug repurposing and combination therapy have been proposed as cost-effective strategies to improve Chagas disease treatment. Miltefosine (MLT), a synthetic alkylphospholipid initially developed for breast cancer and repositioned for leishmaniasis, is a promising candidate against Trypanosoma cruzi infection. This study evaluates the efficacy of MLT as a monodrug and combined with benznidazole (BZ) in both in vitro and in vivo models of infection with T. cruzi (VD strain, DTU TcVI). MLT exhibited in vitro activity on amastigotes and trypomastigotes with values of IC50 = 0.51 µM (0.48 µM; 0,55 µM) and LC50 = 31.17 µM (29.56 µM; 32.87 µM), respectively. Drug interaction was studied with the fixed-ration method. The sum of the fractional inhibitory concentrations (ΣFICs) resulted in ∑FIC= 0.45 for trypomastigotes and ∑FIC= 0.71 for amastigotes, suggesting in vitro synergistic and additive effects, respectively. No cytotoxic effects on host cells were observed. MLT efficacy was also evaluated in a murine model of acute infection alone or combined with BZ. Treatment was well tolerated with few adverse effects, and all treated animals displayed significantly lower mean peak parasitemia and mortality than infected non-treated controls (p<0.05). The in vivo studies showed that MLT led to a dose-dependent parasitostatic effect as monotherapy which could be improved by combining with BZ, preventing parasitemia rebound after a stringent immunosuppression protocol. These results support MLT activity in clinically relevant stages from T. cruzi, and it is the first report of positive interaction with BZ, providing further support for evaluating combined schemes using MLT and exploring synthetic alkylphospholipids as drug candidates.Fil: Gulin, Julián Ernesto Nicolás. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Bisio, Margarita María Catalina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Rocco, Daniela Marisa. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Altcheh, Jaime Marcelo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Solana, Maria Elisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; Argentina. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; ArgentinaFil: García Bournissen, Facundo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentina. Western University. Schulich School Of Medicine And Dentistry.; Canad

Molecular and biological characterization of a highly pathogenic Trypanosoma cruzi strain isolated from a patient with congenital infection

Although many Trypanosoma cruzi (T. cruzi) strains isolated from a wide range of hosts have been characterized, there is a lack of information about biological features from vertically transmitted strains. We describe the molecular and biological characteristics of the T. cruzi VD strain isolated from a congenital Chagas disease patient. The VD strain was typified as DTU TcVI; in vitro sensitivity to nifurtimox (NFX) and beznidazole (BZ) were 2.88 μM and 6.19 μM respectively, while inhibitory concentrations for intracellular amastigotes were 0.24 μM for BZ, and 0.66 μM for NFX. Biological behavior of VD strain was studied in a mouse model of acute infection, resulting in high levels of parasitemia and mortality with a rapid clearence of bloodstream trypomastigotes when treated with BZ or NFX, preventing mortality and reducing parasitic load and intensity of inflammatory infiltrate in skeletal and cardiac muscle. Treatment-induced parasitological cure, evaluated after immunossupression were 41% and 35% for BZ and NFX treatment respectively, suggesting a partial response to these drugs in elimination of parasite burden. This exhaustive characterization of this T. cruzi strain provides the basis for inclusion of this strain in a panel of reference strains for drug screening and adds a new valuable tool for the study of experimental T. cruzi infection.Fil: Gulin, Julián Ernesto Nicolás. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bisio, Margarita María Catalina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rocco, Daniela Marisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Altcheh, Jaime Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Solana, Maria Elisa. Universidad Nacional de Luján; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; ArgentinaFil: García Bournissen, Facundo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Effect of ageing on CMV-specific CD8 T cells from CMV seropositive healthy donors

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Ageing is associated with changes in the immune system with substantial alterations in T-lymphocyte subsets. Cytomegalovirus (CMV) is one of the factors that affect functionality of T cells and the differentiation and large expansions of CMV pp65-specific T cells have been associated with impaired responses to other immune challenges. Moreover, the presence of clonal expansions of CMV-specific T cells may shrink the available repertoire for other antigens and contribute to the increased incidence of infectious diseases in the elderly. In this study, we analyse the effect of ageing on the phenotype and frequency of CMV pp65-specific CD8 T cell subsets according to the expression of CCR7, CD45RA, CD27, CD28, CD244 and CD85j.</p> <p>Results</p> <p>Peripheral blood from HLA-A2 healthy young, middle-aged and elderly donors was analysed by multiparametric flow cytometry using the HLA-A*0201/CMV pp65_495–504(NLVPMVATV) pentamer and mAbs specific for the molecules analysed. The frequency of CMV pp65-specific CD8 T cells was increased in the elderly compared with young and middle-aged donors. The proportion of naïve cells was reduced in the elderly, whereas an age-associated increase of the CCR7^nulleffector-memory subset, in particular those with a CD45RA^dimphenotype, was observed, both in the pentamer-positive and pentamer-negative CD8 T cells. The results also showed that most CMV pp65-specific CD8 T cells in elderly individuals were CD27/CD28 negative and expressed CD85j and CD244.</p> <p>Conclusion</p> <p>The finding that the phenotype of CMV pp65-specific CD8 T cells in elderly individuals is similar to the predominant phenotype of CD8 T cells as a whole, suggests that CMV persistent infections contributes to the age-related changes observed in the CD8 T cell compartment, and that chronic stimulation by other persistent antigens also play a role in T cell immunosenescence. Differences in subset distribution in elderly individuals showing a decrease in naive and an increase in effector-memory CD8 T cells may be relevant in the age-associated defective immune response.</p

CA 15-3 prognostic biomarker in SARS-CoV-2 pneumonia.

The severity of lung involvement is the main prognostic factor in severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) infection. Carbohydrate antigen 15-3 (CA 15-3), a marker of lung damage and fibrosis, could help predict the prognosis of SARS-CoV-2 pneumonia. This was a retrospective and observational study. CA 15-3 was analyzed in the blood samples of patients consecutively admitted for SARS-CoV-2 pneumonia and whose blood samples were available in the biobank. Other prognostic markers were also measured (interleukin 6 [IL6], C-reactive protein [CRP], D-dimer, troponin T, and NT-ProBNP). The occurrence of in-hospital complications was registered, including death, the need for medical intensive care, and oxygen therapy at discharge. In this study, 539 patients were recruited (54.9% men, mean age: 59.6 ± 16.4 years). At admission, the mean concentrations of CA 15-3 was 20.5 ± 15.8 U/mL, and the concentration was correlated with male sex, older age, and other severity markers of coronavirus disease of 2019 (COVID-19) (IL6, CRP, D-dimer, troponine T, and NT-ProBNP). CA 15-3 levels were higher in patients who died (n = 56, 10.4%) (35.33 ± 30.45 vs. 18.8 ± 12.11, p < 0.001), who required intensive medical support (n = 78, 14.4%; 31.17 ± 27.83 vs. 18.68 ± 11.83; p < 0.001), and who were discharged with supplemental oxygen (n = 64, 13.3%; 22.65 ± 14.41 vs. 18.2 ± 11.7; p = 0.011). Elevated CA 15-3 levels (above 34.5 U/mL) were a strong predictor of a complicated in-hospital course, in terms of a higher risk of death (adjusted odds ratio [OR] 3.74, 95% confidence interval [CI]: 1.22-11.9, p = 0.022) and need for intensive care (adjusted OR 4.56, 95% CI: 1.37-15.8) after adjusting for all other risk factors. The degree of lung damage and fibrosis evaluated in terms of CA 15-3 concentrations may allow early identification of the increased risk of complications in patients with SARS-CoV-2 pneumonia.S

Cine en compañía para prevenir enfermedades

El proyecto “Cine en compañía para prevenir enfermedades” es continuación del proyecto iniciado en 2017 (INNOVA-Docencia 18/2018, ApS-UCM 18/2019) y se encuadra en el campo de Salud Pública, higiene y prevención de enfermedad, dirigido a personas desfavorecidas o en riesgo de exclusión social. En esta edición se ha ampliado el área de conocimiento y profesores participantes, incluyendo no solo enfermedades infecciosas, como en ediciones anteriores, sino otras del ámbito de la Bioquímica y Biología Molecular. El proyecto es multidisciplinar e interfacultativo (21 tutores: profesores, colaboradores postdoctorales, doctorandos, estudiantes participantes en ediciones anteriores y técnico de laboratorio, de las Facultades de Farmacia, Biología y Medicina y del Hospital 12 de Octubre) y en él han participado 41 estudiantes de distintos Grados (Biología, Bioquímica, Ciencia y Tecnología de los Alimentos, Derecho, Farmacia, Ingeniería Electrónica) y Postgrados (Máster en Biología Sanitaria, y en Microbiología y Parasitología: Investigación y Desarrollo; Doctorado en Bioquímica y Biología Molecular) y participantes en la asignatura Transversal “Ciencia para la Sociedad”. La necesidad social detectada y atendida es la situación de algunos colectivos, por ejemplo, personas sin hogar, mujeres en exclusión, adictos a drogas, presidiarios o familias residentes en áreas no salubres, de una mayor exposición a determinadas enfermedades debido a sus condiciones de vida (enfermedades infecciosas, mentales, metabólicas derivadas de adicciones o alcoholismo), además de que encuentran escasas posibilidades de conocer cómo prevenirlas y la forma adecuada de recibir tratamiento. Adicionalmente, y no menos importante, acusan una carencia severa de compañía, atención y escucha de sus necesidades. Los estudiantes de universidad que cursan estudios en el campo de Ciencias y Ciencias de la Salud estudian estas enfermedades, por lo que pueden ayudar a estos colectivos en la mejora de prácticas higiénico-sanitarias, así como al acceso a la información para su prevención y tratamiento. Las actividades desarrolladas en el proyecto han consistido en el acompañamiento y desarrollo de una actividad lúdica mediante la proyección de películas comerciales que traten una enfermedad de interés en el colectivo a atender, seguida de coloquio para ayudar a conocer las formas adecuadas de prevención y tratamiento. Los equipos de 4-5 estudiantes (de distintas titulaciones y cursos) y dos tutores (senior y junior) han realizado varias visitas a centros sociales atendidos por Fundaciones con las que existe convenio de la UCM (centros de día para personas sin hogar, mujeres en exclusión, discapacitados o presidiarios, gestionados por Cáritas, Hogar-Sí, Diaconía, Medinacelli). Han investigado en profundidad las enfermedades que afectan y de interés del grupo atendido, seleccionado y analizado críticamente películas adecuadas, preparado materiales divulgativos (carteles, juegos) y diseñado y analizado encuestas para evaluar su actividad por parte de las personas atendidas y los coordinadores de los centros. Los resultados de las encuestas a todos los participantes (tutores, estudiantes, centros) y la recogida de opiniones y memorias de los estudiantes muestran una alta consecución de los objetivos de aprendizaje previstos, refuerzo de contenidos específicos de los estudios y, sobre todo, trabajo y adquisición de competencias transversales como trabajo en equipo, coordinación y asunción de responsabilidades, análisis crítico o expresión científica divulgativa. En cuanto a los objetivos de servicio, destaca la utilidad del proyecto en atención e información a los colectivos, la aplicación de los estudios a situaciones reales en atención a personas desfavorecidas y el valor social del proyecto

In vitro and in vivo activity of voriconazole and benznidazole combination on trypanosoma cruzi infection models

Combination therapy has been proposed as an ideal strategy to reduce drug toxicity and improve treatment efficacy in Chagas disease. Previously, we demonstrated potent in vivo anti-Trypanosoma cruzi activity of voriconazole. In this work, we aimed to study the synergistic effect of voriconazole (VCZ) and benznidazole (BZ) both in vitro and in vivo models of T. cruzi infection using the Tulahuen strain. Combining VCZ and BZ at fixed concentrations, the inhibitory concentration 50% (I