Efecto de la leucorreducción sobre la vía glucolítica y el ciclo de las pentosas fosfato en glóbulos rojos almacenados para transfusión

La sangre desplasmatizada (SD) continúa siendo al día de hoy la principal herramienta terapéutica para los pacientes con anemia. Esta es obtenida a partir de donantes de sangre voluntarios y almacenada a 4°C por 42 días en un medio conservador que contiene glucosa, principal fuente energética del eritrocito. Durante ese período, los glóbulos rojos sufren alteraciones denominadas lesiones por almacenamiento que modifican sus características bioquímicas, metabólicas, morfológicas, antioxidantes, entre otras. A su vez, las unidades de SD pueden ser sometidas a un procedimiento denominado leucorreducción (LR), en el que se le extraen los leucocitos remanentes a la unidad, dejando un recuento por debajo de un nivel seguro para los pacientes. En nuestro país, la LR no se aplica de manera universal, sino en pacientes con patologías puntuales. En este proyecto proponemos la hipótesis que los glóbulos rojos LR almacenados para transfusión sufren menos daños metabólicos y oxidativos al estar menos expuestos a citoquinas y mediadores proinflamatorios producidos por los leucocitos remanentes de la unidad. Se midieron las concentraciones de ATP, NADP+ y NADPH y actividad de G6PDH en glóbulos rojos almacenados para transfusión de 3 donantes de sangre del Hospital de Clínicas, en los días 1, 7, 14, 21 y 42 de almacenamiento, en condiciones de leucorreducción y no leucorreducción. El ATP se midió utilizando cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC); el NADPH se cuantificó mediante un método de ciclado enzimático, midiendo la formación de MTT red en un lector de placas; mientras que la actividad de la G6PDH se realizó midiendo la formación de NADPH reducido en el tiempo. No se observaron diferencias significativas de ATP, NADP+ y NADPH entre unidades leucorreducidas y no leucorreducidas. El ATP disminuyó en todas las unidades a partir del día 21, mientras que el NADP+ y el NADPH se mantuvieron constantes. La actividad de la G6PDH se mantuvo durante todo el almacenamiento y no hubo diferencias entre unidades leucorreducidas y no leucorreducidas. Los resultados obtenidos sugieren que existen cambios en las rutas metabólicas a las que se destina la glucosa, disminuyendo el potencial energético, pero no así el poder antioxidante. A su vez, se pusieron a punto técnicas confiables para la medida de nucleótidos en glóbulos rojos, lo que facilitará aumentar el número de muestras y obtener resultados más precisos.ANII: FMV 1_2019_1_15559

Informe final del proyecto: Estrategias para mejorar la manufactura, conservación y calidad de los preparados de hemocomponentes para transfusión

La transfusión de glóbulos rojos y de otros hemoderivados son una herramienta de extremo valor para la práctica clínica. Sin embargo, las reacciones adversas a la transfusión de hemo componentes son una complicación relativamente frecuente. La presencia de leucocitos y de los mediadores solubles generados por estas células en la bolsa de transfusión ha sido señalada como responsable de cambios estructurales y metabólicos en los glóbulos rojos durante el almacenamiento. El empleo de técnicas de leucoreducción en la Unión Europea y en parte de los Estados Unidos ha disminuido la incidencia de estas reacciones desfavorables. En nuestro país, de los 160.000 volúmenes de concentrados de glóbulos rojos trasfundidos al año, sólo un 15% se leucorreducen. Además, este proceso se realiza sobre preparados almacenados por un tiempo variable, lo que lleva a la acumulación de mediadores inflamatorios y la aparición de un fenotipo senescente en los eritrocitos. Este proyecto se origina a partir de la colaboración entre la Cátedra de Medicina Transfusional del Hospital de Clínicas, Facultad de Medicina e investigadores del Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias, con el fin de colaborar en la instauración de políticas sanitarias tendientes a mejorar la provisión de esta importante herramienta terapéutica. De los resultados obtenidos en el proyecto podemos concluir: 1. Que la leucorreducción es una herramienta efectiva para prevenir la acumulación de mediadores proinflamatorios en el preparado, 2. Que la remoción de leucocitos enlentece el desarrollo del fenotipo envejecido en los glóbulos rojos almacenados. 3. Que la presencia de lactato deshidrogenasa en el sobrenadante de los preparados es un índice sensible para evaluar el estado de los preparados para transfusión. 4. La financiación obtenida permitió además el dictado de dos cursos en el área, la realización de un simposio internacional y la formación de recursos humanos.Agencia Nacional de Investigación e Innovació