Regulation of poly(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) gene expression through the post-translational modification of Sp1: a nuclear target protein of PARP-1

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Poly(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) is a nuclear enzyme that plays critical functions in many biological processes, including DNA repair and gene transcription. The main function of PARP-1 is to catalyze the transfer of ADP-ribose units from nicotinamide adenine dinucleotide (NAD⁺) to a large array of acceptor proteins, which comprises histones, transcription factors, as well as PARP-1 itself. We have previously demonstrated that transcription of the PARP-1 gene essentially rely on the opposite regulatory actions of two distinct transcription factors, Sp1 and NFI. In the present study, we examined whether suppression of PARP-1 expression in embryonic fibroblasts derived from PARP-1 knockout mice (PARP-1^-/-) might alter the expression and/or DNA binding properties of Sp1 and NFI. We also explored the possibility that Sp1 or NFI (or both) may represent target proteins of PARP-1 activity.</p> <p>Results</p> <p>Expression of both Sp1 and NFI was found to be considerably reduced in PARP-1^-/-cells. Co-immunoprecipitation assays revealed that PARP-1 physically interacts with Sp1 in a DNA-independent manner, but neither with Sp3 nor NFI, in PARP-1^+/+cells. In addition, <it>in vitro </it>PARP assays indicated that PARP-1 could catalyze the addition of polymer of ADP-ribose to Sp1, which also translated into a reduction of Sp1 binding to its consensus DNA target site. Transfection of the PARP-1 promoter into both PARP-1^+/+and PARP-1^-/-cells revealed that the lack of PARP-1 expression in PARP-1^-/-cells also results in a strong increase in PARP-1 promoter activity. This influence of PARP-1 was found to rely on the presence of the Sp1 sites present on the basal PARP-1 promoter as their mutation entirely abolished the increased promoter activity observed in PARP-1^-/-cells. Subjecting PARP-1^+/+cells to an oxidative challenge with hydrogen peroxide to increase PARP-1 activity translated into a dramatic reduction in the DNA binding properties of Sp1. However, its suppression by the inhibitor PJ34 improved DNA binding of Sp1 and led to a dramatic increase in PARP-1 promoter function.</p> <p>Conclusion</p> <p>Our results therefore recognized Sp1 as a target protein of PARP-1 activity, the addition of polymer of ADP-ribose to this transcription factor restricting its positive regulatory influence on gene transcription.</p

Production et caractérisation d'anticorps reconnaissant un adduit pyridyloxobutyl-protéine généré lors de la biotransformation des nitrosamines dérivées de la nicotine

L'objectif de cette étude était de produire des anticorps contre un adduit pyridyloxobutyl-protéine. Cet adduit est généré lors de la biotransformation des nitrosamines dérivées de la nicotine. Le dosage de cet adduit pourrait permettre l'évaluation de la susceptibilité d'un fumeur à développer un cancer par le tabagisme. Nous avons utilisé deux méthodes différentes d'hapténisation et deux types de porteurs différents. La méthode d'hapténisation par le 4-(carbethoxynitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone génère des adduits de type pyridyloxobutyl mais induit aussi un changement dans le point isoélectrique de la molécule porteuse. Par contre, l'hapténisation par le 4-carboxy-1-(3- pyridyl) butanone génère des adduits de type pyridyldioxobutyl sans affecter le point isoélectrique de la molécule porteuse. Les conjugués haptène-porteur, une fois injectés dans les animaux induisent deux types de réponses anticorps: T-dépendant et/ou T-indépendant, selon l'animal et le type de porteur utilisé. Les anticorps produits sont de type anti-pyridyloxobutyl et anti-pyridyldioxobutyl. Les anticorps anti­pyridyloxobutyl et anti-pyridyldioxobutyl sont capables de reconnaître des protéines portant des adduits pyridyloxobutyl. De plus, il est possible de reconnaître avec ces anticorps des métabolites de la 4-(méthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone, une nitrosamine spécifique du tabac. Il n'a pas cependant été possible de reconnaître de tels adduits ou métabolites dans les protéines sériques d'animaux traités à la 4-(méthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)­1-butanone ou chez un fumeur. Cependant, il serait possible, en principe, d'utiliser ce type d'anticorps dans des tests immunochimiques pour mesurer la dose biologique effective des adduits pyridyloxobutyl, et ainsi être utilisé en épidémiologie moléculaire des maladies reliées au tabagisme. Il faudrait, par contre, augmenter le niveau de sensibilité de détection de ces tests immunochimiques pour qu'ils soient applicables à la dosimétrie humaine. Pour ce faire, la production d'anticorps monoclonaux anti-pyridyloxobutyl ou polyclonaux de haute affinité, devrait pallier à ce problème

Production et caractérisation d'anticorps reconnaissant un adduit pyridyloxobutyl-protéine généré lors de la biotransformation des nitrosamines dérivées de la nicotine

L'objectif de cette étude était de produire des anticorps contre un adduit pyridyloxobutyl-protéine. Cet adduit est généré lors de la biotransformation des nitrosamines dérivées de la nicotine. Le dosage de cet adduit pourrait permettre l'évaluation de la susceptibilité d'un fumeur à développer un cancer par le tabagisme. Nous avons utilisé deux méthodes différentes d'hapténisation et deux types de porteurs différents. La méthode d'hapténisation par le 4-(carbethoxynitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone génère des adduits de type pyridyloxobutyl mais induit aussi un changement dans le point isoélectrique de la molécule porteuse. Par contre, l'hapténisation par le 4-carboxy-1-(3- pyridyl) butanone génère des adduits de type pyridyldioxobutyl sans affecter le point isoélectrique de la molécule porteuse. Les conjugués haptène-porteur, une fois injectés dans les animaux induisent deux types de réponses anticorps: T-dépendant et/ou T-indépendant, selon l'animal et le type de porteur utilisé. Les anticorps produits sont de type anti-pyridyloxobutyl et anti-pyridyldioxobutyl. Les anticorps anti­pyridyloxobutyl et anti-pyridyldioxobutyl sont capables de reconnaître des protéines portant des adduits pyridyloxobutyl. De plus, il est possible de reconnaître avec ces anticorps des métabolites de la 4-(méthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone, une nitrosamine spécifique du tabac. Il n'a pas cependant été possible de reconnaître de tels adduits ou métabolites dans les protéines sériques d'animaux traités à la 4-(méthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)­1-butanone ou chez un fumeur. Cependant, il serait possible, en principe, d'utiliser ce type d'anticorps dans des tests immunochimiques pour mesurer la dose biologique effective des adduits pyridyloxobutyl, et ainsi être utilisé en épidémiologie moléculaire des maladies reliées au tabagisme. Il faudrait, par contre, augmenter le niveau de sensibilité de détection de ces tests immunochimiques pour qu'ils soient applicables à la dosimétrie humaine. Pour ce faire, la production d'anticorps monoclonaux anti-pyridyloxobutyl ou polyclonaux de haute affinité, devrait pallier à ce problème

Le TREC (Techniques de Randonnée Equestre de Compétition) (approche des efforts sur l'appareil locomoteur, contribution à la préparation du cheval)

LYON1-BU Santé (693882101) / SudocSudocFranceF

The genes pme-1 and pme-2 encode two poly(ADP-ribose) polymerases in Caenorhabditis elegans.

Poly(ADP-ribose) polymerases (PARPs) are an expanding, well-conserved family of enzymes found in many metazoan species, including plants. The enzyme catalyses poly(ADP-ribosyl)ation, a post-translational modification that is important in DNA repair and programmed cell death. In the present study, we report the finding of an endogenous source of poly(ADP-ribosyl)ation in total extracts of the nematode Caenorhabditis elegans. Two cDNAs encoding highly similar proteins to human PARP-1 (huPARP-1) and huPARP-2 are described, and we propose to name the corresponding enzymes poly(ADP-ribose) metabolism enzyme 1 (PME-1) and PME-2 respectively. PME-1 (108 kDa) shares 31% identity with huPARP-1 and has an overall structure similar to other PARP-1 subfamily members. It contains sequences having considerable similarity to zinc-finger motifs I and II, as well as with the catalytic domain of huPARP-1. PME-2 (61 kDa) has structural similarities with the catalytic domain of PARPs in general and shares 24% identity with huPARP-2. Recombinant PME-1 and PME-2 display PARP activity, which may partially account for the similar activity found in the worm. A partial duplication of the pme-1 gene with pseudogene-like features was found in the nematode genome. Messenger RNA for pme-1 are 5'-tagged with splice leader 1, whereas those for pme - 2 are tagged with splice leader 2, suggesting an operon-like expression for pme - 2. The expression pattern of pme-1 and pme-2 is also developmentally regulated. Together, these results show that PARP-1 and -2 are conserved in evolution and must have important functions in multicellular organisms. We propose using C. elegans as a model to understand better the functions of these enzymes

Relations entre les anorthoses de l'Erebus et leurs inclusions vitreuses

From Erebus volcano observations and from its activity a process for pyroclastite formation is suggested. In anorthoclase pyroclastes different kinds of glassy inclusions were studied. Their morphology and localization were first observed and discussed. For these observations polished and oriented thin sections were required. Optical and X-ray studies show heterogeneous properties of crystals. On the other hand, microprobe analysis gave homogeneous results in crystals and in glassy phase inclusions. From cavity and their thermal optical behaviour, it was possible to precise relationships between melted glass and cavity walls in the range of crystallization minimal temperature. In this work, the complexity of the genesis of the crystals was discussed and the important effects of magma history on crystal properties was shown.Les observations faites sur l'appareil volcanique de l'Erebus et sur son activité ont permis de suggérer un processus de formation de pyroclastites. L'observation d'une série de lames minces orientées et polies, taillées dans les pyroclastes d'anorthose, a permis de mettre en évidence pour la première fois la morphologie et la localisation de plusieurs types d'inclusions vitreuses. Une étude optique et radiocristallographique détaillée a révélé l'hétérogénéité des propriétés des cristaux. Par contre les analyses effectuées à la microsonde électronique ont mis en évidence leur homogénéité chimique et celle de la phase vitreuse piégée sous forme d'inclusions. L'étude intrinsèque des cavités et leur comportement thermo-optique a permis de préciser les rapports entre le verre fondu et les parois de la cavité dans le domaine de température minimale de cristallisation. L'ensemble de ces travaux permet de mieux saisir la complexité de la genèse de ces cristaux et montre l'importance de l'effet de l'héritage magmatique sur leurs propriétés.Clocchiatti Roberto, Desnoyers Christian, Sabroux Jean-Christophe, Tazieff Haroun, Wilhelm Serge. Relations entre les anorthoses de l'Erebus et leurs inclusions vitreuses. In: Bulletin de la Société française de Minéralogie et de Cristallographie, volume 99, 2-3, 1976. Les cavités intracristallines microscopiques des matériaux de la lithosphère

Regulation of poly(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) gene expression through the post-translational modification of Sp1: a nuclear target protein of PARP-1-0

<p><b>Copyright information:</b></p><p>Taken from "Regulation of poly(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) gene expression through the post-translational modification of Sp1: a nuclear target protein of PARP-1"</p><p>http://www.biomedcentral.com/1471-2199/8/96</p><p>BMC Molecular Biology 2007;8():96-96.</p><p>Published online 25 Oct 2007</p><p>PMCID:PMC2175517.</p><p></p>e position of the 120 kDa and 60 kDa proteins used as molecular mass markers is indicated. The asterisk indicates the position of the typical NFI complex whereas the arrowhead designates NFI complexes with a reduced electrophoretic mobility that predominated in the extract from PARP-1cells. Data of one from three similar experiments are presented