In vitro evaluation of the susceptibility of endodontic pathogens to calcium hydroxide combined with different vehicles

The aim of this study was to investigate in vitro the antimicrobial activity of calcium hydroxide [Ca(OH)2] in combination with different vehicles against endodontic pathogens. For such purpose, a broth dilution test was performed. Pastes were prepared with Ca(OH)2 powder and the following vehicles: sterile water, glycerin, camphorated monochlorophenol (CMCP), CMCP + glycerin, polyethyleneglycol and CMCP + polyethyleneglycol. The time required for the pastes to produce negative cultures against the tested microorganisms was recorded and analyzed statistically using the Kruskal Wallis test at 5% significance level. Timing for pastes to eliminate the aerobic and facultative anaerobic microorganisms ranged from 6 to 24 h, while strict anaerobic microorganisms were inhibited within 30 s to 5 min. Microbial susceptibility, ranked from weakest to strongest, can be presented as follows: Enterococcus faecalis (the most resistant microorganism), Candida albicans, Staphylococcus aureus, Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis and Prevotella intermedia (the last two microorganisms required the same time to be eliminated). In conclusion, calcium hydroxide pastes needed more time to eliminate facultative than anaereobic microorganisms. These findings suggest that the antimicrobial property is related both to paste formulation and to microbial susceptibility.O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a atividade antimicrobiana do hidróxido de cálcio [Ca(OH)2] em associação com diferentes veículos frente a patógenos endodônticos. O teste de difusão em caldo foi utilizado. Foram preparadas pastas com pó de Ca(OH)2 e os seguintes veículos: água destilada, glicerina, PMCC (paramonoclorofenol canforado), PMCC + glicerina, e PMCC + polietilenoglicol. O tempo necessário para as pastas produzirem culturas negativas frente aos microorganismos testados foi registrado e analisado estatisticamente por meio do teste de Kruskal Wallis com nível de significância de 5%. Foram necessárias de 6 a 24 h para eliminar os microrganismos aeróbios e facultativos e de 30 s a 5 min para os anaeróbios estritos. A suscetibilidade microbiana em ordem crescente foi: Enterococcus faecalis (patógeno mais resistente), Candida albicans, Staphylococcus aureus, Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis e Prevotella intermedia (os últimos dois microrganismos necessitaram do mesmo tempo para serem eliminados). Concluiu-se que as pastas de hidróxido de cálcio necessitaram de maior tempo para eliminar os microrganismos facultativos do que os anaeróbios. Esses achados sugerem que a propriedade antimicrobiana está relacionada tanto à formulação da pasta quanto à suscetibilidade microbiana.175180Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

Antimicrobial activity of AH Plus and Sistema Epiphany sealers and disinfected cone of gutt-percha and Resilon

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida GomesTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Este estudo investigou: a) a atividade antimicrobiana de cimentos endodônticos (AH Plus e Epiphany) frente a microrganismos encontrados na microbiota intracanal (Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Actinomyces naeslundii e Candida albicans); b) a microinfiltração coronária de dentes obturados com AH Plus/ guta-percha e Epiphany/ Resilon; c) os possíveis efeitos antimicrobianos residuais destas substâncias nos cones quando em contato com E. faecalis e Porphyromonas gingivalis, d) as alterações na superfície dos cones de guta-percha e Resilon expostos à desinfecção com clorexidina gel 2% e hipoclorito de sódio 5,25%. A ação antimicrobiana dos cimentos foi testada através de dois métodos: o de contato direto nos tempos: imediato, 24 h, 48 h, 7 e 14 dias após a espatulação, e através do teste de difusão em Agar. A avaliação da microinfiltração coronária de dentes obturados endodonticamente foi acompanhada diariamente por 90 dias após a contaminação. A ação residual dos agentes desinfetantes sobre a superfície dos cones foi observada através do método de difusão em Agar (nos períodos de 1, 5, 10, 20 e 30 min), e as alterações estruturais na superfície dos cones foram testadas através de análise em Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV). Quanto ao método de contato direto os resultados foram: O cimento AH Plus teve maior atividade antimicrobiana que o Epiphany, o Epiphany apresentou grande dissolução em todos os tempos testados (p<0.05), A. naeslundii foi o microrganismo mais suscetível e E. faecalis o mais resistente a todos os cimentos testados. Quanto ao método de difusão em Agar a maior atividade antimicrobiana foi a do Primer, seguida do AH Plus e do Epiphany. C. albicans foi o microrganismo mais suscetível e o S. aureus o mais resistente. Quanto à prevenção da microinfiltração coronária, AH Plus/guta-percha foi superior ao sistema Epiphany (p<0.05). Os dentes obturados com o sistema Epiphany apresentaram clinicamente alterações de cor em suas raízes. Quanto à atividade antimicrobiana das substâncias químicas auxiliares sobre os cones, estas foram incapazes de se unirem aos componentes dos cones de guta-percha e de apresentarem efeito residual. Entretanto o cone de Resilon apresentou ação antibacteriana residual quando exposto a clorexidina gel. Quanto às alterações estruturais dos cones em MEV, não foi encontrada modificação nas características superficiais dos cones e nem presença de cristais de cloreto. Em conclusão, os resultados sugerem que o sistema Epiphany não demonstrou ser superior ao AH Plus quanto à ação antimicrobiana e à prevenção da microinfiltração coronária, e que as substâncias químicas auxiliares usadas na desinfecção dos cones de guta-percha e de Resilon não apresentaram ação residual nos cones de guta-percha e nem alteraram a superfície dos dois tipos de cones testados. Entretanto o cone de Resilon apresentou ação antibacteriana residual quando exposto à clorexidina gel.Abstract: The aims of the present study were to investigate: a) the antimicrobial property of endodontic sealers (AH Plus and Epiphany) against the following microorganisms: Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Actinomyces naeslundii and Candida albicans; b) the coronal microleakage of teeth obturated with AH Plus/ gutta-percha and Epiphany/ Resilon; c) to evaluate the alterations on the surface of the gutta-percha and Resilon cones disinfected with 2% CHX-gel and 5.25% NaOCl; d) the possible residual antimicrobial properties of these substances on the cones when in contact with E. faecalis and Porphyromonas gingivalis. The antimicrobial properties of endodontic sealers were tested by two methods: the direct contact at different times (immediately, 24/ 48 hours and after 7/14 days) and the Agar diffusion method. The coronal microleakage was followed daily during 90 days after contamination. The residual property of the disinfectant agents on the cones was tested by the Agar diffusion method (at 1, 5, 10, 20 and 30 min) and the alterations on the surface structure of the cones were observed by the Scanning Electron Microscopy (SEM) analysis. Regarding the direct contact method, the results are: the AH Plus sealer showed greater antimicrobial than the Epiphany; Epiphany presented greater dissolution during all tested times (p< 0.05). A. naeslundii was the most susceptible microorganism and S. aureus the most resistant against all tested sealers. Regarding the Agar diffusion method, the greatest antimicrobial activity was achieved by the primer, followed by AH Plus and Epiphany. C. albicans was the most susceptible microorganism, while S. aureus was the most resistant. Regarding the prevention of the coronal microleakage, AH Plus/ gutta-percha presented better results than the Epiphany system (p<0.05). All teeth filled with Epiphany system presented color alteration on the root surface. Regarding the antimicrobial property of the auxiliary chemical substances on the cones, both chemical agents were unable to bind to the gutta-percha cone components and to release themselves into the Agar medium during all the periods of time tested. Nevertheless, when disinfected with 2% CHX gel, the Resilon cone demonstrated a residual action. Regarding the residual property of the disinfectants on the surface of the cones, SEM analysis showed no alteration on their superficial features. In conclusion, the results suggest that the Epiphany system was not superior to the AH Plus regarding the antimicrobial action and the prevention of the coronal microleakage, and the auxiliary chemical substances used in the disinfection of gutta-percha and Resilon cones did not show any residual action on the gutta-percha cones and did not cause any damage on the surface of both types of cones. However, the Resilon cones showed a residual antibacterial action when exposed to the chlorhexidine gel.DoutoradoEndodontiaDoutor em Clínica Odontológic

Estudo in vitro da atividade antimicrobiana do hipoclorito de sodio e da clorexidina usados como substancias quimicas auxiliares frente a biofilmes de especie unica

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida GomesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: O objetivo deste estudo foi investigar a atividade antimicrobiana do hipoclorito de sódio (NaOCl) 2,5% e 5,25% e da clorexidina (CLX) 2.0% tanto na forma gel como líquida utilizados como substância química auxiliar durante o preparo químico-mecânico frente a biofilmes de espécies única. Biofilmes simples dos microrganismos Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Prevotella intermedia, Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Fusobacterium nucleatum e Candida albicans foram formados em filtros de membrana de nitrato de celulose sobre placas de agar sangue. Os biofilmes foram imersos nas substâncias químicas por 30s, 5, 10, 15, 30 e 60 min com ou sem agitação mecânica e em seguida transferidos para meios de cultura contendo neutralizadores das substâncias químicas. A seguir, foram realizadas diluições em série, alíquotas foram inoculadas em placas de agar sangue, incubadas e após crescimento, as unidades formadoras de colônias foram quantificadas através de suas diluições. O hipoclorito de sódio (NaOCl) 5,25% eliminou todos microrganismos testados em 30 segundos de contato. Frente aos microrganismos anaeróbios estritos, todas as substâncias químicas obtiveram o mesmo desempenho, sendo efetivas em 30 segundos. A solução salina permitiu o crescimento microbiano de todas as cepas. Concluiu-se que NaOCl a 5,25% foi a substância química testada mais efetiva, seguido pela CLX líquida 2%. Os resultados demonstraram que a efetividade do agente antimicrobiano depende dos microrganismos que constituem o biofilme, do tempo de contato destes com o a substância química, da ação ou não da agitação mecânica e forma de apresentação da substânciaAbstract: The aim of this study was to investigate the antimicrobial activity of 2.5% and 5.25% sodium hypoclorite and 2.0% chlorhexidine gel and liquid as auxiliary chemical substances against selected single-species biofilms. Enterococcus faecalis, Staphylococus aureus, Prevotella intermedia, Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis, Fusobacterium nucleatum and Candida albicans were grown on cellulose nitrate membrane placed on agar medium, generating single biofilms, which were immersed in the endodontic auxiliary chemical substance for 30 second and 5, 10, 15, 30, and 60 minutes with mechanical agitation or not. Sterile saline was used as a control group. After each time tested, the antimicrobial activity was neutralized. The microorganisms were suspended using a vortex, which was tem-fold serially diluted. Aliquots of the dilutions were plated on 5% sheep blood agar media, and incubated. Colony-forming units were then calculated. NaOCl 5.25% was observed to eliminate all strains in 30 seconds. However, other irrigating solutions showed effective antimicrobial activity against the anaerobic microorganisms in 30 seconds. Sterile saline showed microbial growth in all tested times. NaOCl 5.25% followed by 2% liquid chlorhexidine, was the most effective agents tested. These results indicate that the effectiveness of an antimicrobial agent is closely related to the organization of microorganisms in the biofilm as well as to the contact time between microorganisms and substances, presence or lack of the mechanical agitation, and presentation form of the substancesMestradoEndodontiaMestre em Clínica Odontológic

In Vitro Evaluation Of The Antimicrobial Activity Of Calcium Hydroxide Combined With Chlorhexidine Gel Used As Intracanal Medicament.

The aim of this study was to investigate the antimicrobial activity of calcium hydroxide (Ca(OH)2) combined with 2% chlorhexidine gluconate (CHX) gel against endodontic pathogens and to compare the results with the ones achieved by Ca(OH)2 mixed with sterile water and by CHX gel alone. Two methods were used: the agar diffusion test and the direct contact test. Ca(OH)2 + 2% CHX gel produced inhibitory zones ranging from 2.84 to 6.5 mm, and required from 30 seconds to 6 hours to eliminate all tested microorganisms. However, 2% CHX gel showed the largest microbial growth zones from 4.33 to 21.67 mm, and required 1 minute or less to inhibit all tested microorganisms. A paste of Ca(OH)2 plus sterile water inhibited only the microorganisms with which it was in direct contact and required from 30 seconds to 24 hours to kill all tested microorganisms. In conclusion, 2% CHX gel + Ca(OH)2 showed better antimicrobial activity than Ca(OH)2 manipulated with sterile water.102544-5

In Vitro Evaluation Of The Susceptibility Of Endodontic Pathogens To Calcium Hydroxide Combined With Different Vehicles.

The aim of this study was to investigate in vitro the antimicrobial activity of calcium hydroxide [Ca(OH)2] in combination with different vehicles against endodontic pathogens. For such purpose, a broth dilution test was performed. Pastes were prepared with Ca(OH)2 powder and the following vehicles: sterile water, glycerin, camphorated monochlorophenol (CMCP), CMCP + glycerin, polyethyleneglycol and CMCP + polyethyleneglycol. The time required for the pastes to produce negative cultures against the tested microorganisms was recorded and analyzed statistically using the Kruskal Wallis test at 5% significance level. Timing for pastes to eliminate the aerobic and facultative anaerobic microorganisms ranged from 6 to 24 h, while strict anaerobic microorganisms were inhibited within 30 s to 5 min. Microbial susceptibility, ranked from weakest to strongest, can be presented as follows: Enterococcus faecalis (the most resistant microorganism), Candida albicans, Staphylococcus aureus, Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas endodontalis and Prevotella intermedia (the last two microorganisms required the same time to be eliminated). In conclusion, calcium hydroxide pastes needed more time to eliminate facultative than anaerobic microorganisms. These findings suggest that the antimicrobial property is related both to paste formulation and to microbial susceptibility.16175-8