Helping the Help for CD8+ T Cell Responses

Eickhoff et al. and Hor et al. use time-lapse intravital microscopy to show an unexpected choreography of CD4+ and CD8+ T cells “dancing” between different dendritic cell sub-populations during priming of cytotoxic immune responses to viruses

Regulation of Antigen Export to the Cytosol During Cross-Presentation

Cross-priming refers to the induction of primary cytotoxic CD8+ T cell responses to antigens that are not expressed in antigen presenting cells (APCs) responsible for T cell priming. Cross-priming is achieved through cross-presentation of exogenous antigens derived from tumors, extracellular pathogens or infected neighboring cells on Major Histocompatibility Complex (MHC) class I molecules. Despite extensive research efforts to understand the intracellular pathways involved in antigen cross-presentation, certain critical steps remain elusive and controversial. Here we review recent advances on antigen cross-presentation, focusing on the mechanisms involved in antigen export to the cytosol, a crucial step of this pathway

Inflammatory dendritic cells in mice and humans.

International audienceDendritic cells (DCs) are a heterogeneous population of professional antigen-presenting cells. Several murine DC subsets have been identified that differ in their phenotype and functional properties. In the steady state, DC precursors originating from the bone marrow give rise to lymphoid-organ-resident DCs and to migratory tissue DCs. During inflammation, an additional DC subset has been described, so-called inflammatory DCs (infDCs), which differentiate from monocytes recruited to the site of inflammation. Here, we review recent work on the development and functions of murine infDCs. We also examine the criteria that define infDCs. Finally, we discuss the characterization of human infDCs and their potential role in inflammatory diseases

Utilisation d'un anticorps monoclonal anti-Tn en immunothérapie des cancers

La transformation des cellules normales de l organisme en un phénotype malin est souvent accompagnée de changements dans leur antigénicité. L antigène Tn (GalNac-O-Ser/Thréo) est un antigène (Ag) glycopeptidique spécifique des tumeurs et exprimé à la membrane plasmique des cellules cancéreuses dans la majorité des carcinomes humains ainsi que dans certaines tumeurs hématologiques, tandis qu il n est pas détecté dans les cellules normales. Il représente donc une cible potentielle très intéressante pour l immunothérapie passive par anticorps, car il n est pas détectable dans les cellules normales, mais est démasqué dans environ 90% des cancers épithéliaux du fait d une dérégulation des processus de glycosylation. Les anticorps monoclonaux (AcM) spécifiques d antigènes exprimés à la membrane des cellules tumorales ont une efficacité prouvée dans le traitement de certains cancers. Ces AcM thérapeutiques sont particulièrement intéressants pour le traitement des cancers du fait de leur forte spécificité pour les cellules tumorales et de leur faible toxicité pour les cellules normales, contrairement aux chimiothérapies conventionnelles, mais leur mécanisme d action est encore mal connu. L AcM Chi-Tn est un anticorps chimérique homme/souris capable de se fixer de façon spécifique à l antigène tumoral Tn, alors qu il ne se fixe pas sur les cellules normales. Cet AcM pourrait donc être envisagé comme agent thérapeutique dans le traitement des cancers épithéliaux par immunothérapie passive.Nous nous sommes intéressés à l AcM Chi-Tn non couplé en vue d analyser son mécanisme d action et d évaluer son efficacité thérapeutique in vivo. Nous avons montré que l AcM Chi-Tn seul ne possède pas d effet toxique direct sur les lignées de cellules tumorales Tn-positives in vitro. Cependant, en présence de macrophages, cet AcM est capable d induire la lyse de ces cellules par un mécanisme d ADCC. In vivo, l AcM Chi-Tn, associé à la cyclophosphamide, induit le rejet d'une tumeur du sein dans plus de 80% des souris. Cette inhibition de la croissance tumorale est abolie chez les souris déficientes pour la chaine associée aux récepteurs RFc activateurs, suggérant in vivo un mécanisme d ADCC. Par l étude microscopique du microenvironnement tumoral, nous avons observé que les cellules tumorales forment in vivo des synapses avec des macrophages, des neutrophiles, mais aussi des lymphocytes B. Des expériences de survie in vivo chez des souris déficientes pour différentes populations cellulaires montrent que les lymphocytes T semblent nécessaires à la protection des souris par Chi-Tn contre la tumeur. Ainsi, ces résultats confirment le rôle des effecteurs exprimant des RFc activateurs, mais aussi le rôle indispensable de la réponse immune adaptative pour assurer l'effet thérapeutique des AcM.Nous nous sommes également intéressés à l utilisation potentielle de l AcM Chi-Tn comme vecteur d agents cytotoxiques. In vivo, dans un modèle de tumeurs solides chez la souris, des expériences de biodistribution montrent que l AcM Chi-Tn est capable de cibler spécifiquement les zones tumorales, ce qui en fait un anticorps potentiellement utilisable comme vecteur de molécules toxiques. L internalisation du complexe anticorps/antigène cible est un pré-requis nécessaire à l utilisation de l anticorps conjugué. Nous avons montré in vitro que l AcM Chi-Tn est internalisé dans les endosomes précoces et de recyclage pendant un temps relativement long, faisant de cet AcM un bon candidat pour être couplé à des agents cytotoxiques. Durant ma thèse, nous avons couplé l AcM Chi-Tn à la toxine saporine ou à la molécule cytotoxique auristatine F, et nous avons montré in vitro que ces conjugués sont cytotoxiques sur des lignées cellulaires Tn-positives.Pas de résumé en anglaisPARIS5-Bibliotheque electronique (751069902) / SudocSudocFranceF

In vivo imaging of cytotoxic T cell infiltration and elimination of a solid tumor

Although the immune system evolved to fight infections, it may also attack and destroy solid tumors. In most cases, tumor rejection is initiated by CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTLs), which infiltrate solid tumors, recognize tumor antigens, and kill tumor cells. We use a combination of two-photon intravital microscopy and immunofluorescence on ordered sequential sections to analyze the infiltration and destruction of solid tumors by CTLs. We show that in the periphery of a thymoma growing subcutaneously, activated CTLs migrate with high instantaneous velocities. The CTLs arrest in close contact to tumor cells expressing their cognate antigen. In regions where most tumor cells are dead, CTLs resume migration, sometimes following collagen fibers or blood vessels. CTLs migrating along blood vessels preferentially adopt an elongated morphology. CTLs also infiltrate tumors in depth, but only when the tumor cells express the cognate CTL antigen. In tumors that do not express the cognate antigen, CTL infiltration is restricted to peripheral regions, and lymphocytes neither stop moving nor kill tumor cells. Antigen expression by tumor cells therefore determines both CTL motility within the tumor and profound tumor infiltration

Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids

Exosomes are small membrane vesicles found in cell culture supernatants and in different biological fluids. Exosomes form in a particular population of endosomes, called multivesicular bodies (MVBs), by inward budding into the lumen of the compartment. Upon fusion of MVBs with the plasma membrane, these internal vesicles are secreted. Exosomes possess a defined set of membrane and cytosolic proteins. The physiological function of exosomes is still a matter of debate, but increasing results in various experimental systems suggest their involvement in multiple biological processes. Because both cell-culture supernatants and biological fluids contain different types of lipid membranes, it is critical to perform high-quality exosome purification. This unit describes different approaches for exosome purification from various sources, and discusses methods to evaluate the purity and homogeneity of the purified exosome preparations

Dendritic cell–derived exosomes for cancer therapy

International audienceDC-derived exosomes (Dex) are nanometer-sized membrane vesicles that are secreted by the sentinel antigen-presenting cells of the immune system: DCs. Like DCs, the molecular composition of Dex includes surface expression of functional MHC-peptide complexes, costimulatory molecules, and other components that interact with immune cells. Dex have the potential to facilitate immune cell–dependent tumor rejection and have distinct advantages over cell-based immunotherapies involving DCs. Accordingly, Dex-based phase I and II clinical trials have been conducted in advanced malignancies, showing the feasibility and safety of the approach, as well as the propensity of these nanovesicles to mediate T and NK cell–based immune responses in patients. This Review will evaluate the interactions of Dex with immune cells, their clinical progress, and the future of Dex immunotherapy for cancer