Estudo quantitativo e qualitativo do DNA obtido da medula óssea armazenada em blocos de parafina de pacientes portadores de anemia aplásica

Resumo: Os avanços tecnológicos e metodológicos na biologia molecular criaram a possibilidade de obter DNA de amostras teciduais estocadas em blocos de parafina, alternativa esta que permite estudos retrospectivos de grandes bancos de tecidos, contendo inúmeras doenças raras. A quantidade e a qualidade do DNA obtido são considerados de suma importância para os procedimentos pós-extração e a presença de contaminantes pode inibir a amplificação, especialmente em condições de escassez de DNA. Nosso objetivo é realizar a análise quantitativa e qualitativa do DNA extraído de blocos de parafina de casos de anemia aplásica severa (AAS) e analisar a eficiência/qualidade das técnicas de espectrofotometria tradicional e PCR na mensuração da qualidade e quantidade de DNA. Foram utilizadas 48 amostras de blocos de parafina contendo fragmentos de biópsia de medula óssea, do Serviço de Anatomia Patológica do Hospital de Clinicas da UFPR em Curitiba, nas quais o DNA foi extraído pelo método do fenol-clorofórmio. Os resultados estatísticos levantaram a suspeita da não confiabilidade da técnica de espectrofotometria na avaliação da eficiência do DNA extraído para amplificação e a comparação com os resultados da amplificação por PCR confirmam nossa suspeição. Foi realizado análise de correlação, no sentido de tornar mais evidente esta conclusão, a qual demonstrou a não ocorrência de correlação entre os níveis de pureza e a positividade da amostra (amplificação positiva), com rpb= -0.19. A amplificação por PCR ocorreu adequadamente em 45.85% (22 amplificações em 48 amostras) para o gene HLA-DRB1, sendo considerada satisfatória para o tipo de amostra utilizada, extremamente hipocelular e submetida previamente a protocolos de processamento considerados deletérios ao material genético. O estudo da qualidade e da quantidade de DNA também depende das técnicas de mensuração utilizadas; estas são influenciadas por diversos fatores,e podem distorcer o entendimento dos resultados finais. Concluímos que a análise da qualidade e da quantidade de DNA deve ser ponderada conforme as técnicas que estão sendo utilizadas. Por fim, salienta-se a relevância da natureza da amostra sobre os resultados finais de qualidade e quantidade de DNA mensurado

Detection of human papillomavirus in laryngeal squamous cell carcinoma: systematic review and meta-analysis

Background: Recent studies have reported a human papillomavirus (HPV) prevalence of 20% to 30% in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC), although clinical data on HPV involvement remain largely inconsistent, ascribed by some to differences in HPV detection methods or in geographic origin of the studies. Objective To perform a systematic review and formal meta-analysis of the literature reporting on HPV detection in LSCC. Methods Literature was searched from January 1964 until March 2015. The effect size was calculated as event rates (95% confidence interval [CI]), with homogeneity testing using Cochran's Q and I2 statistics. Meta-regression was used to test the impact of study-level covariates (HPV detection method, geographic origin) on effect size. Potential publication bias was estimated using funnel plot symmetry. Results One hundred seventy nine studies were eligible, comprising a sample size of 7,347 LSCCs from different geographic regions. Altogether, 1,830 (25%) cases tested HPV-positive considering all methods, with effect size of 0.269 (95% CI: 0.242 to 0.297; random-effects model). In meta-analysis stratified by the 1) HPV detection technique and 2) geographic study origin, the between-study heterogeneity was significant only for geographic origin (P = .0001). In meta-regression, the HPV detection method (P = .876) or geographic origin (P = .234) were not significant study-level covariates. Some evidence for publication bias was found only for studies from North America and those using non–polymerase chain reaction methods, with a marginal effect on adjusted point estimates for both. Conclusions Variability in HPV detection rates in LSCC is explained by geographic origin of study but not by HPV detection method. However, they were not significant study-level covariates in formal meta-regression

Fatores que interferem na qualidade do DNA extraído de amostras biológicas armazenadas em blocos de parafina

Os avanços tecnológicos e metodológicos da biologia molecular criaram a possibilidade de obter DNA de amostras teciduais estocadas em blocos de parafina, alternativa esta que permite estudos retrospectivos de grandes bancos de tecidos contendo inúmeras doenças raras. O objetivo deste trabalho foi a realização de uma breve revisão de alguns fatores inerentes à qualidade do produto extraído proveniente de blocos de parafina armazenados. Os processos envolvidos nas fases de prefixação, fixação, pós-fixação apresentam aspectos que são causa de resultados de produtos finais insatisfatórios. Na fase de prefixação, alterações bioquímicas influenciam na preservação das macromoléculas. As mudanças moleculares causadas pelos fixadores para evitar autólise celular podem ser um limitante no momento da extração de DNA. A qualidade do DNA obtido nas duas primeiras fases é considerada importante para os procedimentos de pós-fixação (extração e purificação do DNA). Existem na literatura vários protocolos, com diferentes passos que podem ser modificados, para a obtenção de DNA de material parafinado. Assim, a compreensão das reações em cada fase é importante para solucionar ou minimizar problemas, que influenciam na qualidade das macromoléculas de DNA

Evaluation in the understanding of icons as resource for filling in the physical activities diary for seniors

OBJECTIVE: Making icons as communications resource for filling in the daily physical activity for older adults, was the aim of this study. METHODS: The sample was composed of 30 women who participated in a physical activity program. The method used was the recognition of 50 figures was scored and the number of hits. To provide efficient communication activities were chosen that showed longer behavior of the elderly as also the environment of physical activity. The criterion for selection of icons was the hitting ratio: &gt; 0.80, figure approved; between 0.70 and 0.79, figure that needs modifications; &lt; 0.70, figure that needs to be redone. RESULTS: We found that five of the figures would have to be redone, and eight would need to be improved in relation to contrast and depth, the other (37 figures) achieved the expected proportion of correct&gt; 0.8000. CONCLUSIONS: The synthetic graphical shapes with large information content were partly responsible for the deviation in interpretation, but also the deterioration of normal vision caused by physiological changes of aging. The images have a size slightly enlarged and certain parts of the graphs were shown to lead to correct interpretation. It was observed that the icons become an effective communication tool that minimizes difficulties in understanding for the completion of daily physical activity for older adults.</p