Phenotype characterization of anemic mutant BALB/c mouse

Várias linhagens de camundongos resultam de mutações genéticas pontuais espontâneas ou induzidas e estas alterações podem apresentar fenótipos relevantes semelhantes a doenças hereditárias humanas. Massironi et al. (2006) desenvolveram vários camundongos BALB/c mutantes com o agente mutagênico etil-nitroso-uréia (ENU) no Biotério de Experimentação do Departamento de Imunologia do Instituto de Ciências Biomédicas (ICB) da Universidade de São Paulo. Destes, o mutante chamado anêmico foi objeto de estudo desta pesquisa, que tem como objetivo a sua fenotipagem. A avaliação hematológica revelou moderada anemia com intensa policromasia e reticulocitose, acompanhada de anisocitose, macrocitose, hipocromia, inclusões intraeritrocíticas e corpúsculos de Heinz, do nascimento até 18 meses de idade. Apresentaram também hemoglobinúria, bilirrubinemia, hiperfosfatemia e populações eritrocíticas com diferentes resistências à lise osmótica. No estudo da hemoglobina, não foi possível distinguir Hb anormal pela eletroforese em acetato-celulose em pH alcalino, ou cadeia globínica diferente pela eletroforese de cadeias globínicas em pH alcalino, mas constatou-se precipitação da hemoglobina no teste de estabilidade térmica e no teste de isopropanol. Na necrópsia, observou-se intensa esplenomegalia, especialmente nas fêmeas de 12 a 18 meses de idade, discreta hepatomegalia, moderada cardiomegalia e icterícia subcutânea. No exame histopatológico, observou-se intenso aumento da hematopoiese e hemossiderose nos órgãos hematopoiéticos e nas células tubulares renais notou-se deposição de ferro intracitoplasmático e houve aumento da concentração de creatinina plasmática animais mais idosos. Estes dados permitem classificar o quadro como anemia hemolítica congênita regenerativa crônica, semelhante a quadros de anemia por hemoglobina instável, descritos para humanos. Massironi (dados não publicados) concluiu o mapeamento genético deste mutante, que revelou a troca de aminoácidos na posição 88 da cadeia beta da hemoglobina (leucina por prolina), devido à troca de T por C no gene da globina β Hbb-b1 no cromossomo 7, que corresponde à mutação da hemoglobina de Santa Ana descrita em humanos. A Hb Santa Ana é uma hemoglobina instável rara, com descrição de casos no Brasil, EUA, França, Hungria e Japão e que resulta em importante anemia hemolítica congênita crônica com evidente esplenomegalia. Este camundongo BALB/c mutante anêmico apresenta fenótipo e genótipo muito similares ao quadro de hemoglobina instável de Santa Ana e, considerando-se a importância dos modelos animais para o avanço dos estudos de doenças humanas, este modelo seria o primeiro camundongo mutante descrito para o estudo desta doença.Many strains of mice result from spontaneous or induced punctual genetic mutations and these changes may present relevant and similar phenotypes to inherited human diseases. Massironi et al. (2006) developed some BALB/c mice mutants with the mutagen ethyl-nitroso-urea (ENU) in the Biotério de Experimentação, Departamento de Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas (ICB) of Universidade de São Paulo. From these, the mutant called anemic is the object of this research, which aims to characterize its phenotype. The hematologic evaluation revealed moderate anemia with intense reticulocytosis and polychromasia, followed by anisocytosis, macrocytosis, hypochromia and intraerythrocytic inclusion and Heinz bodies, presented from birth to 18 months of age. They also presented hemoglobinuria, bilirrubinaemia, hyperfosfatemia, and erythrocytic populations with different resistance to osmotic lysis. In the hemoglobin study, it was not possible to distinguish an abnormal Hb by cellulose acetate electrophoresis at alkaline pH nor a different globin chain with globin chains electrophoresis at alkaline pH, but there was hemoglobin precipitation at heat stability test and isopropanol test. At necropsy, there was evident splenomegaly - especially within the 12 to 18 months old mutant female group, discrete hepatomegaly, moderate cardiomegaly, and subcutaneous jaundice. On histopathologic examination, there was dramatic increase in the hematopoiesis and hemosiderosis in hematopoietic organs and intracellular iron deposition on tubular renal cells with elevated plasma creatinin concentration in the oldest animals. These data indicate a congenital hemolytic regenerative anemia, similar to human unstable hemoglobin anemia. By genetic mapping concluded by Massironi (data not published), it has been detected an amino acid exchange (leucine to proline) at position 88 in the beta globin protein, because of a T to C change in β globin gene Hbb-b1 on chromosome7, which corresponds to the Santa Ana hemoglobin mutation described in humans. Hb Santa Ana is a rare unstable hemoglobin reported in Brazil, USA, France, Hungary and Japan, that presents cronic congenital hemolytic anemia with evident splenomegaly. This BALB/c mutant mouse presents similar genotype and phenotype to the human Santa Ana unstable hemoglobin. Considering the importance of animal models for human diseases studies advance, this model would be the first mutant mouse described for study of Hb Santa Ana

Ultrassonografia modo B e Doppler na avaliação renal de cães submetidos à tomografia computadorizada após administração intravenosa de diferentes meios de contraste iodado

RESUMO: A nefropatia induzida por contraste (NIC) é uma doença de caráter agudo, secundária à administração intravascular de meios de contraste iodado (MCI). Dentre os mecanismos fisiopatológicos desta enfermidade destacam-se a vasoconstrição intrarrenal prolongada, consequente redução da perfusão renal, hipóxia e isquemia medulares, associada ao dano tubular renal devido à citotoxicidade do contraste. Frente à existência de poucas informações relacionadas a estes mecanismos na literatura médico-veterinária, objetivaram-se comparar os efeitos renais da administração intravenosa de MCI não iônicos de diferentes osmolaridades, em grupos de cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC, por meio das avaliações ultrassonográficas modo B, Doppler colorido, de amplitude e pulsado, pareada aos exames laboratoriais, a fim de estimar indiretamente o potencial nefrotóxico de cada contraste. Constituíram-se dois grupos de acordo com o MCI utilizado: o grupo GIH [11 cães receberam iohexol (baixa osmolaridade)] e o grupo GID [sete cães receberam iodixanol (isosmolar)]. Administrou-se a dose de 600mgI/kg/IV em ambos. Avaliaram-se os seguintes aspectos renais antes da administração do MCI (momento basal) e após 1h30min, 24 horas e 48 horas: morfometria (comprimento e volume), morfologia, ecogenicidade cortical e perfusão renais e resistência vascular intrarrenal (índices hemodinâmicos de resistividade e pulsatilidade). Realizou-se ainda exame de urina e se mensuraram as razões gama-glutamil transferase:creatinina (GGT:C) e proteína:creatinina (RPC) urinárias e a concentração sérica de creatinina. Os grupos apresentaram comportamentos similares para comprimento, volume, RPC, exame de urina e creatinina sérica. Em relação ao índice de pulsatilidade (IP), os grupos apresentaram comportamentos não similares, mas sem diferenças significantes entre o momento basal e os demais. Para o índice de resistividade (IR) e a razão GGT:C urinária, os grupos revelaram comportamentos não similares e se constataram aumentos significantes do IR e da razão GGT:C urinária no período de 1h30min após a administração do contraste, somente para o grupo que recebeu iohexol. Concluiu-se que o IR pode ser utilizado para monitorar a hemodinâmica intrarrenal, visto que junto com a razão GGT:C urinária, demonstrou a existência de maior potencial nefrotóxico do iohexol, quando comparado ao iodixanol. Dessa forma, considera-se o uso do iodixanol, opção favorável para cães com fatores de risco para o desenvolvimento da NIC

Retained placenta on the proteinogram of Holstein cows

Com o objetivo de avaliar a infl uência da retenção de placenta (RP) no proteinograma de fêmeas bovinas da raça Holandesa, de propriedades comerciais, foram utilizadas 129 vacas com RP e 145 vacas com parto e pós-parto fi siológicos e sem nenhum tratamento no período avaliado. As amostras de sangue foram divididas nos momentos: 1odia pós-parto (DPP), 2o-3o, 4o- 5o, 6o-7o, 8o-14o, 15o-29o, 30o-59o e 60o-90o DPP. O fracionamento das proteínas foi realizado por eletroforese em fi ta de acetato de celulose e em gel de poliacrilamida, contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), nas quais se avaliou o comportamento de 19 bandas proteicas identifi cadas pelos respectivos pesos moleculares, que variaram entre 23KDa e 187KDa. Não houve infl uência da RP na proteína sérica total e gamaglobulinas. A albumina sérica permaneceu abaixo dos valores de referência até os 90DPP nos animais com RP. Concluiu-se que vacas Holandesas com RP apresentam um quadro de normoproteinemia com hipoalbuminemia e aumento das frações alfaglobulinas e betaglobulinas até os 90DPP, presença de resposta infl amatória de fase aguda positiva pelo signifi cativo aumento de haptoglobina, ceruloplasmina, glicoproteína ácida, e de fase aguda negativa pela diminuição de albumina na primeira semana pós-parto.The aim of this study was to evaluate the infl uence of retained placenta on the proteinogram of Holstein cows from commercial dairy farms. Blood samples were collected from 129 animals with retained placenta (RP) and 145 animals with normal delivery and postpartum period, without any treatment, on following days: 1st day in milk (DIM), 2nd-3th, 4th-5th, 6th-7th, 8th- 14th, 15th-29th, 30th-59th and 60th-90th DIM were analyzed. Protein electrophoresis were performed in acetate cellulose and sodium dodecyl sulfate polyacrilamide gel (SDS-PAGE), where 19 protein bands were observed with molecular weights between 23KDa and 187KDa. There was no infl uence on serum total protein and gamma globulins. Serum albumin remained below the normal reference values up to 90DIM. In conclusion, Holstein cows with RP have normoproteinemia with hypoalbuminemia up to 90DIM, presence of positive acute phase response by increase of haptoglobin, ceruloplasmin, acid glycoprotein, alpha and beta globulins and negative acute phase response by decreased of albumin within the fi rst week postpartum

Retained placenta on the proteinogram of Holstein cows

Com o objetivo de avaliar a infl uência da retenção de placenta (RP) no proteinograma de fêmeas bovinas da raça Holandesa, de propriedades comerciais, foram utilizadas 129 vacas com RP e 145 vacas com parto e pós-parto fi siológicos e sem nenhum tratamento no período avaliado. As amostras de sangue foram divididas nos momentos: 1odia pós-parto (DPP), 2o-3o, 4o- 5o, 6o-7o, 8o-14o, 15o-29o, 30o-59o e 60o-90o DPP. O fracionamento das proteínas foi realizado por eletroforese em fi ta de acetato de celulose e em gel de poliacrilamida, contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), nas quais se avaliou o comportamento de 19 bandas proteicas identifi cadas pelos respectivos pesos moleculares, que variaram entre 23KDa e 187KDa. Não houve infl uência da RP na proteína sérica total e gamaglobulinas. A albumina sérica permaneceu abaixo dos valores de referência até os 90DPP nos animais com RP. Concluiu-se que vacas Holandesas com RP apresentam um quadro de normoproteinemia com hipoalbuminemia e aumento das frações alfaglobulinas e betaglobulinas até os 90DPP, presença de resposta infl amatória de fase aguda positiva pelo signifi cativo aumento de haptoglobina, ceruloplasmina, glicoproteína ácida, e de fase aguda negativa pela diminuição de albumina na primeira semana pós-parto.The aim of this study was to evaluate the infl uence of retained placenta on the proteinogram of Holstein cows from commercial dairy farms. Blood samples were collected from 129 animals with retained placenta (RP) and 145 animals with normal delivery and postpartum period, without any treatment, on following days: 1st day in milk (DIM), 2nd-3th, 4th-5th, 6th-7th, 8th- 14th, 15th-29th, 30th-59th and 60th-90th DIM were analyzed. Protein electrophoresis were performed in acetate cellulose and sodium dodecyl sulfate polyacrilamide gel (SDS-PAGE), where 19 protein bands were observed with molecular weights between 23KDa and 187KDa. There was no infl uence on serum total protein and gamma globulins. Serum albumin remained below the normal reference values up to 90DIM. In conclusion, Holstein cows with RP have normoproteinemia with hypoalbuminemia up to 90DIM, presence of positive acute phase response by increase of haptoglobin, ceruloplasmin, acid glycoprotein, alpha and beta globulins and negative acute phase response by decreased of albumin within the fi rst week postpartum

Retenção de placenta no proteinograma de vacas Holandesas

The aim of this study was to evaluate the influence of retained placenta on the proteinogram of Holstein cows from commercial dairy farms. Blood samples were collected from 129 animals with retained placenta (RP) and 145 animals with normal delivery and postpartum period, without any treatment, on following days: 1 stday in milk (DIM), 2 nd -3 th , 4 th -5 th , 6 th -7 th , 8 th -14 th , 15 th -29 th , 30 th -59 thand 60 th -90 thDIM were analyzed. Protein electrophoresis were performed in acetate cellulose and sodium dodecyl sulfate polyacrilamide gel (SDS-PAGE), where 19 protein bands were observed with molecular weights between 23KDa and 187KDa. There was no influence on serum total protein and gamma globulins. Serum albumin remained below the normal reference values up to 90DIM. In conclusion, Holstein cows with RP have normoproteinemia with hypoalbuminemia up to 90DIM, presence of positive acute phase response by increase of haptoglobin, ceruloplasmin, acid glycoprotein, alpha and beta globulins and negative acute phase response by decreased of albumin within the first week postpartum.Com o objetivo de avaliar a influência da retenção de placenta (RP) no proteinograma de fêmeas bovinas da raça Holandesa, de propriedades comerciais, foram utilizadas 129 vacas com RP e 145 vacas com parto e pós-parto fisiológicos e sem nenhum tratamento no período avaliado. As amostras de sangue foram divididas nos momentos: 1odia pós-parto (DPP), 2o-3o, 4o-5o, 6o-7o, 8o-14o, 15o-29o, 30o-59o e 60o-90o DPP. O fracionamento das proteínas foi realizado por eletroforese em fita de acetato de celulose e em gel de poliacrilamida, contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), nas quais se avaliou o comportamento de 19 bandas proteicas identificadas pelos respectivos pesos moleculares, que variaram entre 23KDa e 187KDa. Não houve influência da RP na proteína sérica total e gamaglobulinas. A albumina sérica permaneceu abaixo dos valores de referência até os 90DPP nos animais com RP. Concluiu-se que vacas Holandesas com RP apresentam um quadro de normoproteinemia com hipoalbuminemia e aumento das frações alfaglobulinas e betaglobulinas até os 90DPP, presença de resposta inflamatória de fase aguda positiva pelo significativo aumento de haptoglobina, ceruloplasmina, glicoproteína ácida, e de fase aguda negativa pela diminuição de albumina na primeira semana pós-parto.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

Influence of puerperium on the serum proteins of Saanen goats, obtained by the analysis of electrophoresis on sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel

Com o objetivo de avaliar a influência do puerpério no proteinograma de caprinos da raça Saanen foram colhidas 108 amostras de soro sangüíneo de 12 cabras, sendo os resultados apresentados em nove momentos: imediatamente após a parição, 1, 3, 5, 7, 10, 15, 21 e 30 dias após o parto. Os teores séricos de proteína total foram determinados pela técnica do biureto, e para o fracionamento das proteínas foi realizada a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). No método utilizado foram observadas 17 bandas protéicas, cujos pesos moleculares (PM) variaram de 25 KDa a 275 KDa, sendo possível a identificação das seguintes frações protéicas: imunoglobulina A (180 KDa), ceruloplasmina (115 KDa), transferrina (79 KDa), albumina (65 KDa), imunoglobulina G cadeia pesada(58 KDa), haptoglobina (45 KDa), glicoproteína ácida (37 KDa) e imunoglobulina G cadeia leve (28 KDa). As outras 9 frações protéicas não identificadas apresentaram pesos moleculares iguais a 275 KDa, 140 KDa, 125 KDa, 103 KDa, 95 KDa, 41 KDa, 35 KDa, 30 Kda e 25 KDa. Os resultados obtidos permitem concluir que durante a primeira semana do puerpério ocorre um aumento das concentrações de glicoproteína ácida, enquanto as demais frações protéicas não sofrem influência do puerpério.   Aiming to evaluate the puerperal influence on the proteinogram of Saanen goats, 108 samples of blood serum from 12 goats were collected, and the results were presented at nine times: just after parturition, 1, 3, 5, 7, 10, 15, 21 and 30 days after parturition. Total amount of serum proteins were determined by the biuret technique, and the sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was used to the protein fractionation. In this last method, 17 protein bands were observed, from which molecular weights varied between 25 KDa and 275 KDa. In addition, it was possible to identify the following protein fractions: immunoglobulin A (180 KDa), ceruloplasmin (115 KDa), transferrin (79 KDa), albumin (65 KDa), heavy-chain immunoglobulin G (58 KDa), haptoglobin (45 KDa), acid glycoprotein (37 KDa) and light-chain immunoglobulin G (28 KDa). Another 9 nonidentified protein fractions presented, each molecular weights equal to 275 KDa, 140 KDa, 125 KDa, 103 KDa, 95 KDa, 41 KDa, 35 KDa, 30 Kda and 25 KDa. The results allow us to conclude that by the first week of puerperium, an improvement of acid glycoprotein occurs, whereas those others protein fractions do not suffer any puerperal influence.   

Influência do puerpério sobre o proteinograma sérico de caprinos da raça Saanen obtido por eletroforese em gel de poliacrilamida

Aiming to evaluate the puerperal influence on the proteinogram of Saanen goats, 108 samples of blood serum from 12 goats were collected, and the results were presented at nine times: just after parturition, 1, 3, 5, 7, 10, 15, 21 and 30 days after parturition. Total amount of serum proteins were determined by the biuret technique, and the sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was used to the protein fractionation. In this last method, 17 protein bands were observed, from which molecular weights varied between 25 KDa and 275 KDa. In addition, it was possible to identify the following protein fractions: immunoglobulin A (180 KDa), ceruloplasmin (115 KDa), transferrin (79 KDa), albumin (65 KDa), heavy-chain immunoglobulin G (58 KDa), haptoglobin (45 KDa), acid glycoprotein (37 KDa) and light-chain immunoglobulin G (28 KDa). Another 9 nonidentified protein fractions presented, each molecular weights equal to 275 KDa, 140 KDa, 125 KDa, 103 KDa, 95 KDa, 41 KDa, 35 KDa, 30 Kda and 25 KDa. The results allow us to conclude that by the first week of puerperium, an improvement of acid glycoprotein occurs, whereas those others protein fractions do not suffer any puerperal influence