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    Efficient generation of adenovirus vectors carrying the Clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)-CRISPR associated proteins (Cas)12a system by suppressing Cas12a expression in packaging cells

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    Clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)-CRISPR associated proteins (Cas) 9 system is a powerful tool for genome editing and still being aggressively improved. Cas12a, a recently discovered Cas9 ortholog, is expected to become complementary to Cas9 due to its unique characteristics. Previously we attempted to establish an adenovirus (Ad) vector-mediated delivery of CRISPR-Cas12a system since Ad vector is widely used for gene transfer in basic researches and medical applications. However, we found difficulties preparing of Ad vectors at an adequate titer. In this study, we have developed Ad vectors that conditionally express Cas12a either by a tetracycline-controlled promoter or a hepatocyte specific promoter to avoid putative inhibitory effects of Cas12a. These vectors successfully proliferated in packaging cells, HEK293 cells, and were recovered at high titers. We have also developed packaging cells that express shRNA for Cas12a to suppress expression of Cas12a. Using the cells, the Ad vector directing constitutive expression of Cas12a proliferated efficiently and was successfully recovered at a high titer. Overall, we improved recovery of Ad vectors carrying CRISPR-Cas12a system, thus provided them as a tool in genome editing researches.Tsukamoto T., Sakai E., Nishimae F., et al. Efficient generation of adenovirus vectors carrying the Clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)-CRISPR associated proteins (Cas)12a system by suppressing Cas12a expression in packaging cells. Journal of Biotechnology 304, 1 (2019); https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2019.08.004

    タソウ コウゾウ ニヨル エンブロイダリー ノ ヒョウゲン ダイ2ホウ

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    布を重ねることによって濃度の変化(陰影)だけでなく,複雑な色を出したり思いがけない効果(偶然のもたらす効果)が出ることがある。第1報に続き多層構造による素材の扱いと,エンブロイダリーのテクニックを応用して作品製作の実践研究を試みた。作品のテーマは,ノルウェーのフィヨルドの風景である。このハルダンゲルフィヨルドを含むハルダンゲル地方はハーダンガー刺繍の発祥の地である。遠方に険しい山脈が雪をかぶり,フィヨルドの静かな水面と好対照である。手前の古い小屋とリンゴの木は典型的なこの地方の風景(果樹園が多い)である。夏の間このような別荘に住む人が多いそうだ。澄みきった空気,波のない静かな水面,自由にのびたリンゴの木,雑草の花々を自由に表現したいと思う。イメージの表現を重視し,テクニックはフリーステッチで糸は刺繍糸25番の他に,アブローダー,花糸,絹糸,毛糸,麻ひも,藍染めさしこ糸なども使用した。土台布はノルウェーの麻地である。透明度のある布を重ねる事(多層構造)による効果は先に述べた色彩効果の他に,ぼかしが自然にしかも簡単にできたことである。布は原画に基づきハサミでカットしたが,裁ち目の始末はそのままにしたところが多い。ほつれが気になる部分もあったが,従来の布端を折り返す方法や,裁ち目をかがる方法を用いなかったのは,布の面による効果を損ないたくなかったからである。土台布に何層もの布を重ねて,従来の周囲をかがるアップリケではなくキルトをすることで布をとめている(一番多いところは5枚)。土台布の下に重ねた布をとめる時は,その糸が表にひびかないように注意した。この作品は,1998年に服飾学会で発表したものをさらに手を加え完成させた

    日本刺繍その表現技法 : 匂いについて

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    仏教の伝来とともに中国から伝わったとされる日本刺繍の歴史をたどり、各時代に残された繍の作品の中に見られる花の表現を求め-匂い-について考察する。花の匂いとは、蕊を入れることであり、花の表現には欠くこと事のできないものである。糸の浮きを押えるために考案されたと思われる匂い。花の中心を強調するための匂い。花の特徴を示すための匂い。普遍的とも言える匂いの入れ方は、中世から現代まで脈々と繍い継がれてきた。花に命を吹き込む匂いの表現は、作者により無限に広がる。先人から学びえたことを、今後の作品制作に生かし、発展させて行きたい

    Perfekts lietuviešu valodā : empīrisks pētījums

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    Reikšminiai žodžiai: Dalyvis; Istorinė gramatika; Laikas; Laiko kategorija; Perfektas; Perfekto formos; Rusų kalba; Veikslas; Veiksmo baigtinumas; Aspect, tense; Historical grammar; Lithuanian; Participle; Perfect; Perfect forms; Russian; Telicity; Tense categoryThis paper presents observations regarding the meanings and functions of the analytic perfect forms (in the active voice), traditionally called “compound tenses” (Lith. sudurtiniai laikai or sudėtiniai laikai), consisting of the verb būti ‘be’ and adjectival past participles in Lithuanian. The status of Lithuanian analytic forms is quite a controversial theme in Lithuanian linguistics, and its relation to finite verb forms has been widely discussed. However, the discussions about the perfect in Lithuanian from the semantical and typological perspective are still insufficient. Therefore, the main purpose of the research is to observe the functional-semantic content of the Lithuanian analytic perfect forms from the typological viewpoint by analyzing how this content correlates with aspectual properties of verbs, and to analyze the divisions in the usage domain of the simple tense forms and the analytic perfect forms. By referring to the contrastive analysis with Russian, I will try to provide a more detailed explanation of the meanings and functions of the Lithuanian analytic perfect forms. Moreover, I will offer an analysis of the divisions in the usage domain of the simple tense forms and the analytic perfect forms in Lithuanian, based on the results of a survey conducted in Lithuania

    Aplinkybėmis einančių dalyvių sąveika su pagrindiniais veksmažožiais lietuvių kalboje: veikslas ir tranzityvumas

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    Straipsnyje ketinta apibūdinti veiksnius, kurie sąlygoja, kaip būtojo laiko dalyviai, turintys aplinkybinę funkciją, lietuvių kalboje derinami su pagrindiniais veiksmažodžiais. Taip pat siekta atskleisti akivaizdų ryšį tarp aspekto ir tranzityvumo. Aplinkybinių būtojo laiko dalyvių derinimas su pagrindiniais veiksmažodžiais yra sąlygojamas įvairių sakinio semantinėje struktūroje esančių veiksnių, kurių pagrindinis vaidmuo tenka aspektui ir tranzityvumui. tipo predikato sakinyje būtojo laiko dalyviai su pagrindiniais veiksmažodžiais konstruoja vieną predikatą kaip vieną esmę, kurioje kombinacijų galimybės yra griežtai sąlygojamos semantinio nuoseklumo principo pagal jų statyvumą ir intranzityvumą. Tuo tarpu, tipo predikato sakinyje būtojo laiko dalyviai formuoja kitą, nuo tų pagrindinių veiksmažodžių labiau nepriklausomą predikatą, o jį sąlygojantys semantiniai veiksniai yra silpniausi. tipo predikato sakiniai užima tarpinę poziciją tarp minėtų dviejų predikatų sakinių. Būtojo laiko padalyvių atveju, tie sąlygojantys semantiniai veiksniai, kurie pastebimi su būtojo laiko dalyviais, neįtakoja jų derinimo su pagrindiniais veiksmažodžiais nei aspekto, nei tranzityvumo požiūriu.This paper is aimed at providing some observations about certain constraints which determine how past participles, functioning as adverbials (in semi-predicative usage), combine with main verbs in Lithuanian. In previous studies (Sakurai 2000; 2003) I presented some remarks on the semantic constraints, in particular those looked upon from the angle of aspect, under which past participles, functioning as adverbials, combine with main verbs. This issue has not yet been addressed to date either in traditional Lithuanian grammar (LKG, DLKG) or in other studies about Lithuanian. Here, by adding to this analysis the viewpoint on transitivity, I am going to emphasize the close linkage between aspect and transitivity in this problem: in type predicate sentences, adjectival past participles and main verbs construct one predicate as a single entity where the combinatory possibilities are strictly constrained by the principle of semantic consistency in stativity and intransitivity
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