The use of calcofluor white for the detection of fungi which cause subcutaneous and systemic mycoses

Esta técnica facilita la observación microscópica de elementos fúngicos en materiales clínicos, donde su presencia es escasa o no fácilmente detectable por las técnicas tradicionales.Se colocó una gota de la solución de blanco de Calcofluor con una gota de KOH al 20%, sobre el material estudiado, examinándolo microscópicamente con luz U. V.Los elementos fúngicos presentaron una fluorescencia verde manzana, lo que facilitó su detección en micosis sistémicas y subcutáneas. Presenta una sensibilidadsimilar a la coloración de Gomori-Grocott, pero tiene la ventaja de ser mucho más simple.Se concluye que esta técnica es mucho más sensible y específica que la observación microscópica directa

Platelet Membrane Glycoprofiling in a PMM2-CDG Patient

Congenital disorders of glycosylation (CDG) are metabolic hereditary diseases caused by defects in the synthesis of glycoconjugates. CDG have been described in sugar-nucleotide biosynthesis and transporter, glycosyltransferases, vesicular transport, as well as in lipid biosynthesis and glycosylphosphatidylinositol anchors. PMM2-CDG is caused by mutations in the phosphomannomutase-2 (PMM2) gene and shows autosomal recessive inheritance. It affects all organs and tissues, ranging from severe psychomotor retardation to moderate intellectual disability. Alterations in the primary haemostatic system have been reported in these patients and they can lead to severe bleeding or excessive thrombosis with subsequent vascular insufficiency. Despite of being the most common CDG, platelet glycosylation and sialylation defects in PMM2-CDG patients remain incompletely characterized. In this study, we applied a lectin-based flow cytometry approach to report the first characterization of the highly glycosylated platelet membrane glycan profile in a PMM2-CDG patient. In the PMM2-CDG patient’s platelet samples, a decreased binding of SNA lectin, indicative of reduced terminal α-2-6 sialic acid content, and an increased binding of PNA lectin, suggesting desialylation of β-1-Nacetylgalactosamine residues, were observed. Reduced expression of terminal sialic acids in platelet membrane glycoproteins may contribute to the increased risk of hemorrhage reported in these patients by promoting platelet clearance and thrombocytopenia.Fil: Papazoglu, Gabriela Magali. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas. Cátedra de Clínica Pediátrica; ArgentinaFil: Silvera Ruiz, Silene Maite. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas. Cátedra de Clínica Pediátrica; ArgentinaFil: Salinas, R.. Universidad Autónoma del Estado de Morelos; MéxicoFil: Pereira, Beatriz María Inés. Gobierno de la Provincia de Córdoba. Ministerio de Salud. Hospital de Niños de la Santísima Trinidad; ArgentinaFil: Cubilla, Marisa Angelica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas. Cátedra de Clínica Pediátrica; ArgentinaFil: Pesaola, Favio Nicolas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas. Cátedra de Clínica Pediátrica; ArgentinaFil: Ghione, S.. Argenlab San Francisco; ArgentinaFil: Ramadán, N.. Fundación para el Progreso de la Medicina; ArgentinaFil: Martinez Duncker, I.. Universidad Autónoma del Estado de Morelos; MéxicoFil: Asteggiano, Carla Gabriela. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Centro de Estudio de las Metabolopatías Congénitas. Cátedra de Clínica Pediátrica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba; Argentin

Empleo de blanco de calcoflúor para el estudio de las especies de Malassezia por microscopía directa The use of calcofluor white for identification of Malassezia species

Las especies del género Malassezia integran la flora habitual del ser humano, pero en ocasiones, causan diversas afecciones. Durante mucho tiempo, el diagnóstico temprano se vio demorado por la dificultad de obtener los cultivos de estos hongos. El objetivo de este trabajo es evaluar las ventajas del empleo de la microscopía de fluorescencia con blanco de calcoflúor para la observación de especies de Malassezia, tanto de material extraído de los pacientes, como de los cultivos. La técnica de fluorescencia ofrece, en comparación con la coloración tradicional de azul de lactofenol, la ventaja de facilitar además de la observación de los elementos fúngicos, observar el patrón de brotación de estos organismos, útil para la identificación. El análisis de materiales clínicos con la coloración de blanco de calcoflúor y posterior observación con microscopio de fluorescencia, resulta entonces un método sencillo y rápido para la identificación presuntiva y contribuye, por lo tanto, al diagnóstico temprano.Fungi of Malassezia genus are known as normal flora in human beings. However, different pathologies due to Malassezia, have been described. Traditionally, early diagnosis was delayed because of the difficulties in culture isolation of these organisms. The aim of this work, is to evaluate the technique of observation microscopy with calcofluor, for identification of Malassezia in both, clinical samples and isolates. In comparison to traditional method of direct examination with lactophenol-blue, calcofluor method offers an advantage because it turns easier the observation of fungal elements and its budding pattern. This technique contributes then, to identify species of Malassezia. The analysis of clinical specimens with calcofluor followed by observation under fluorescence microscopy is a simple and rapid method for the identification, and contribute therefore to the early diagnosis

Comparación de diferentes métodos para la identificación de especies del género Candida Comparison of different methods for species identification of genus Candida

Las diferentes especies del género Candida producen una variedad de enfermedades, desde infecciones mucocutáneas leves a formas diseminadas graves. Tradicionalmente, la taxonomía de las levaduras se ha llevado a cabo en base a estudios morfológicos y fisiológicos, pero éstos dependen de las condiciones de cultivo de las cepas, por lo que se han observado diversas dificultades. Por tal motivo, recientemente, se han probado técnicas de biología molecular. El objetivo de este trabajo es correlacionar los estudios taxonómicos de las especies correspondientes a las principales patógenas: C. albicans, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis y C. glabrata, realizados por técnicas fenotípicas tradicionales, métodos comerciales y por PCR fingerprinting. Al comparar las técnicas que identifican Candida albicans, agar harina de maíz y formación de tubos germinativos, estadísticamente se observa que no existen diferencias significativas entre ambos métodos (valor de la estadística X2 = 0,5 p = 0,4795). Comparando los métodos que discriminan especies de Candida: pruebas fisiológicas, CHROMagar, API20C y PCR fingerprinting se observó que no existen diferencias significativas en las proporciones de resultados que identifican cualquier Candida entre las pruebas fisiológicas, API20C y PCR fingerprinting. La proporción de resultados definitivos es mayor a la obtenida usando el método CHROMagar (pDifferent species of genus Candida can cause a wide range of pathologies, since mucocutaneous trivial infections to disseminated serious forms. Traditionally, taxonomy of yeast has been performed taking into account morphologic and physiologic studies, but they depend on the culture conditions of strains, what cause certain difficulties. Thus, recently, molecular biology methods have been tried. The aim of this work is to correlate taxonomic studies of most important pathogenic species -C. albicans, C. krusei, C. parapsilosis, C. tropicalis and C. glabrata- all of them performed by phenotypic traditional methods, commercial ones, and by a molecular method, PCR fingerprinting. Comparing useful methods for C. albicans identification, corn flour agar and germinative tube formation, no statistical differences between them are observed (X2 =0.5, p=0.4795). By comparison between methods to discriminate different Candida species, physiological tests, CHROMagar, API 20C and PCR fingerprinting we observed no significative differences in proportion of accurate results, in test that can identify any Candida species, such as physiological assays, API 20C and PCR fingerprinting. The proportion of unequivocal results is greater than the obtained performing the CHROMagar culture method (p< 0.001)