Ragweed pollen extract intensifies lipopolysaccharide-induced priming of NLRP3 inflammasome in human macrophages

Ragweed pollen extract (RWE) possesses intrinsic NADPH oxidase activity that induces oxidative stress by initiating the production of intracellular reactive oxygen species (ROS). The ROS are important contributors to the manifestation of allergic inflammation; furthermore, concomitant exposure to an allergen and an endotoxin trigger a stronger inflammatory response. One of the main pro-inflammatory cytokines produced in inflammatory responses is interleukin-1β (IL-1β), and its production is associated with caspase-1-containing inflammasome complexes. Intracellular ROS have been implicated in NLRP3 inflammasome-mediated IL-1β production, therefore, we aimed to study whether RWE influences the function of NLRP3 inflammasome. Here we describe that, in the presence of NADPH, RWE significantly elevates lipopolysaccharide-induced IL-1β production of THP-1 cells as well as human primary macrophages and dendritic cells. We also demonstrate that increased IL-1β production is mediated through NLRP3 inflammasome in THP-1 macrophages. We provide evidence that RWE elevates cytosolic ROS level in these cells, and ROS inhibitors abolish IL-1β production. Furthermore, we show that RWE enhances lipopolysaccharide-induced gene transcription/expression of pro-IL-1β and key components of the inflammasome via a ROS-dependent mechanism

Sejtfelszíni és magreceptorok többszörös asszociációjának és dinamikájának vizsgálata fluoreszcencia korrelációs spektroszkópia és energia transzfer segítségével = Examination of the multiple association and dynamics of cell surface and nuclear receptors by fluorescence correlation spectroscopy and energy transfer

Az interleukin-2 és -15 citokinek fontos szerepet játszanak a T sejtek funkciójának és homeosztázisának szabályozásában. A pályázat keretében az IL-2/15R komplex összeszerelődését, sejtfelszíni elrendeződését és más membránfehérjékkel kialakított kölcsönhatásait tanulmányoztuk humán T sejtek felszínén. Igazoltuk, hogy az MHC I glikoproteinek szervező szerepet játszanak az IL-2/15R klaszterek összeszerelődésében. Az IL-2/15R és az MHC I/II glikoproteinek által alkotott klaszterek stabilitása nem függ jelentős mértékben a citoszkeletontól, az asszociációk apoptotikus blebek felszínén is megmaradnak. Jellemeztük az ILRAP - egy IL-2R-rel asszociálódó fehérje molekuláris kölcsönhatásait, ami hozzájárulhat az IL-2/IL-15 eltérő hatásspektrumának magyarázatához. Közvetlen bizonyítékát adtuk az IL-15 transz prezentációjának két T limfóma sejttípus között. Kidolgoztunk egy megbízható módszert, mellyel GFP és mRFP között lehet FRET méréseket végezni. FRET, FCCS és modellezés segítségével leírtuk a Jun-Fos komplex C terminális konformációját, ami a működésre vonatkozó felvetéseket is eredményezett. RXR és RAR magreceptorok és funkcionális mutánsaik mobilitását vizsgálva megállapítottuk, hogy a magreceptorok ligand hiányában ? ellentétben a jelenleg elfogadott molekuláris kapcsoló modellel ? nagyrészt szabad állapotban vannak. Agonista hatására részleges átrendeződés történik egy alacsony mobilitású állapotba, amelyben a receptor feltehetően koaktivátort köt, és DNS-kötő affinitása megnő. | Interleukin-2 and -15 play an important role in regulating the function and homeostasis of T cell function. In our research we investigated the assembly, cell surface organization and interactions of the IL-2/15R complex with other membrane proteins in human T cells. We showed that MHC I glycoproteins play an organizing role in the assembly of IL-2/15R clusters. The stability of clusters formed by IL-2/15R and MHCI/II proteins does not critically depend on the cytoskeleton, associations remain stable on the surface of apoptotic blebs as well. We characterized the interactions of ILRAP, an IL-2R-associated protein, which may contribute to understanding the distinct effects of IL-2 and IL-15. We gave direct evidence of the trans presentation of IL-15 between two T lymphoma cell types. We elaborated a method for the measurement of FRET between GFP and mRFP. By using FRET, FCCS and MD-modeling the C terminal conformation of the Jun-Fos complex was characterized, which yielded implications for their mode of action. By measuring the mobility of RXR and RAR nuclear receptors and their functional mutants we demonstrated that receptors are in a freely diffusing state in the absence of ligand, which is in contrast to expectations of the molecular switch model. Agonist treatment yields a shift to a less mobile state, in which the receptor probably binds coactivator and has an increased DNA-binding affinity

Hypospleniás és aspleniás állapotok jelzésére szolgáló komplex laboratóriumi és morphologiai vizsgálatok eredményeinek összehasonlító elemzése egerekben a postsplenectomiás sepsis időbeni felismerése céljából = Comparative study on the results of complex laboratory and morphological examinations in hyposplenic and asplenic status in order to diagnose postsplenectomy sepsis in due time

150 Balb/c inbred egéren és 24 beagle kutyán végzett műtétek és komplex -immunologiai, haematologiai, haemostaseologiai, haemorheologiai, immunhistologiai- utánkövetéses vizsgálatok során elemeztük a lép autotransplantatio hatékonyságát. A lép autotransplantatumok filtrációs funkció megőrző szerepét jelző értékű vizsgálatokkal - vörösvérsejt deformabilitás és aggregatio- sikerült alátámasztani. Kombinált vakcináció hatásának vizsgálatában a leukocyta antisedimentatiós ráta változás elemzése hatékony volt. Kiemelten fontos volt az autotransplantált lépdarabokban a phagocyta sejtek utánpótlásáért felelős őssejtek regenerációban betöltött szerepének vizsgálata, mely során a granulocyta-macrophag progenitor őssejtek jelenlétét és expanzióját mutattuk ki. Megállapítottuk, hogy lép autotransplantatio után a postoperativ időszakban a haemopoeticus őssejt termelés nő a splenectomizált és az áloperált csoporthoz képest. Az egerekben végzett immunologiai vizsgálatok igazolták, hogy a lép autotransplantatio normalizálja a T- és B-lymphocyták számát és eloszlását, javítja az IgM termelést és a granulocyták phagocytáló képességét. Eredményeink rávilágítanak arra, hogy a visszaültetett lépdarabok súlyarányuknál nagyobb részben képesek a funkciókiesést pótolni. Ez táplálja azt a reményünket, hogy a splenectomia helyett alkalmazott autotransplantatio fokozhatja a fertőzések elleni védekezőképességet, csökkentheti a krónikus fertőzések és a rettegett OPSI kialakulásának veszélyét. | 150 Balb/c inbred mice and 24 beagle dogs were subjected to operations and to complex ?immunological, hematological, hemostaseological, hemorheological, immunhistological- follow-up investigations for analyzing the efficacy of spleen autotransplantation. The restoration of autotransplanted spleen-chips? filtration function was proved with indicator tests, such as red blood cell deformability and aggregation. Investigating a combined vaccination?s effect the analysis of leukocyte antisedimentation rate?s changes was be useful. The role of stem cells, responsible for the phagocyte reinforcement, in the autotransplanted spleen-chips? regeneration process was of high priority. The presence and expansion of granulocyte-macrophage progenitors stem cells were oberved. In the autotransplanted spleen-chips we could reveal the presence of primitive, early-phase, pluripotent stem cells capable for differentiation into various cell-lines. Immunological tests in mice showed that spleen autotransplantation helps to normalize the count and distrubution of B and T lymphocytes, improves the IgM production and the granulocytes? phagocyte function. Our results reflect to that the autotransplated spleen-chips can restore the functions even in a higher degree comparing to their own weight. This could feed our hope that autotransplantation used instead of splenectomy may increase the defensive ability against infections, reduce the risk of chronic infections and the frightening OPSI