Avaliação da toxidade oral aguda e subcrônica de extrato etanólico de Pothomorphe umbellata L. Miq. (Parapiroba)

Existe uma grande preocupação quanto ao uso seguro de extratos vegetais e, por esta razão, a necessidade de estudos toxicológicos pré-clínicos e clínicos destes extratos. O objetivo deste trabalho foi o de avaliar a toxicidade aguda e subcrônica do extrato hidroalcoólico liofilizado de Pothomorphe umbellata L. Miq., administrado por via oral para animais de laboratório. O potencial mutagênico do extrato foi também avaliado pelo teste do micronúcleo. Os resultados dos estudos a curto e médio prazo demonstraram que o extrato não apresenta propriedades tóxicas.There is a high degree of concern regarding the secure use of plant extracts and, for this very reason, preclinical and clinic toxicological evaluation of these extracts are needed. With the aim to assure the quality and the safety of the extract and due to the scarcity of literature information about Pariparoba extract toxicity, our purpose was to investigate the acute and subchronic toxicity of the standardized ethanolic dried root extract of Pothomorphe umbellata L. Miq. This extract was administered orally to adult swiss mice and wistar rats and the mutagenic potencial of the extract was also evaluated. The extract showed to be non toxic

Simultaneous determination of chlorogenic acid, caffeic acid and caffeine in hydroalcoholic and aqueous extracts of Ilex paraguariensis by HPLC and correlation with antioxidant capacity of the extracts by DPPH· reduction

Um novo método de cromatografia líquida de alta eficiência foi desenvolvido para a determinação simultânea de ácido clorogênico, ácido caféico e cafeína no extrato hidroalcoólico e aquoso de Ilex paraguariensis. As curvas de calibração mostraram boa regressão linear nas faixas de concentração 0,49-7,8 µg/mL para o ácido clorogênico, 0,25-3,9 µg/mL para ácido caféico e 0,244-7,8 µg/mL para cafeína. A redução do radical DPPH· foi usada para determinar a capacidade antioxidante dos extratos. Nosso método para a determinação simultânea de ácido caféico, ácido clorogênico e cafeína foi altamente sensível, possuindo limites de detecção e de quantificação menores do que em outros trabalhos que empregaram metodologias semelhantes.A new high performance liquid chromatographic method has been established for simultaneous determination of chlorogenic acid, caffeic acid and caffeine in hydroalcoholic and aqueous extracts of Ilex paraguariensis. Analytical curves showed good linear regression in the concentration ranges 0.49-7.8 µg/mL for chlorogenic acid, 0.25-3.9 µg/mL for caffeic acid and 0.244-7.8 µg/mL for caffeine. Reduction of the DPPH· radical was used to determine the antioxidant capacity of the extracts. Our method for the simultaneous determination of chlorogenic acid, caffeic acid and caffeine was highly sensitive, having lower detection and quantitation limits than other papers that used similar methodology

Validation of ±-tocopherol and 4-nerolidylcathecol quantitative assessment methodologies

O objetivo do nosso trabalho foi desenvolver um método para avaliação da concentração do ±-tocoferol, considerado o antioxidante lipofílico de maior importância, e do 4-nerolidilcatecol (4-NC), uma substância natural com comprovada ação antioxidante in vitro e in vivo, em matriz biológica (homogeneizado de pele). Utilizamos a cromatografia de alta eficiência acoplada a um detector eletroquímico, sendo que o método apresentou linearidade para as concentrações de 0,025 µg/mL a 0,1 µg/mL para o ±-T (tempo de retenção 3, 4 min) e de 0,15 µg/mL a 2,5 µg/mL para o 4-NC (tempo de retenção 2,06 min), dissolvidos em etanol e etanol:água (1:1). A taxa de recuperação do ±-T adicionado nas concentrações de 0,5; 0,1 e 0,025 µg/mL aos homogeneizados de pele foi de 94,03; 111,2 e 80,7%, respectivamente. A taxa de recuperação de 4-NC adicionado nas concentrações de 2,5; 0,625 e 0,156 µg/mL foi de 103,7; 91,7 e 91,7%. Este método analítico foi e está sendo empregado, com sucesso devido à sua precisão e rapidez, em diversas análises do laboratório.Topical administration of antioxidants, such as ±-tocopherol (±-T), provides an efficient manner of enriching the endogenous cutaneous protection system, and it constitutes a successful strategy for diminishing the ultraviolet radiation-mediated oxidative damage. Besides ±-tocopherol the use of other natural occurring compounds with antioxidant activity has been proposed for the same purpose. The aim of this study was to develop a validated analytical method for the determination of a-tocopherol and 4-nerolidylcathecol (4-NC) concentrations in skin homogenates in a pharmaceutical formulations. We employed liquid chromatography with electrochemical detection. Chromatography was performed on a Supelcosil LC-8, 3 mm, 75x4.6 mm column (Supelco, Bellefonte, PA, USA) with a mobile phase of methanol:water (9:1) for 4-NC and (95:5) for a-T, both containing 20 mM LiClO4 and 2 mM KCl. The flow rate was set at 1.0 ml/min. We established validation parameters including sensitivity, precision, accuracy, stability and found a linear relationship between the concentrations ranges of 0.025 µg/mL to 0.1 µg/mL of ±-T and 0.15 mg/mL to 2.5 mg/mL of 4-NC. The recovery of ±-T from skin homogenates was 94.03, 111.2 and 80.7% for the concentrations of 0.5, 0.1 and 0.025 µg/mL respectively. The recovery for the following concentrations of 4-NC: 2.5, 0.625 and 0.156 µg/mL was 103.7, 91.7 and 91.7%. This analytical procedure has been successfully employed in cutaneous permeation studies, antioxidant activity studies and determinations of 4-NC in Pothomorphe umbellata root extracts

Prevention of photo-oxidative damage to the skin for topical treatment with root extract of Phothomorphe umbellata L. Miq

Entre as estratégias de fotoproteção encontra-se a inibição da formação e/ou o seqüestro de radicais livres e espécies reativas de oxigênio geradas em conseqüência da exposição à radiação UV, mediante aplicação tópica de antioxidantes. No presente trabalho avaliou-se a permeação cutânea e o efeito da aplicação tópica de um extrato de Pothomorphe umbellata nos efeitos da exposição aguda e crônica à radiação ultravioleta, na pele de camundongos sem pêlo. No estudo de permeação cutânea foram testadas três formulações (gel, gel-creme e creme) contendo o princípio ativo do extrato (4-nerolidilcatecol) isolado. Também foram testadas duas formulações (gel, e gel-creme) contendo o extrato hidroalcoólico liofilizado de Pothomorphe umbellata, quanto à permeação do princípio ativo 4-nerolidilcatecol. A formulação gel tanto para o princípio ativo isolado, quanto para o princípio ativo presente no extrato, apresentou o melhor desempenho, sendo o gel o veículo escolhido para preparação da formulação utilizada nos ensaios de exposição crônica e aguda à radiação ultravioleta. Nos estudos de exposição aguda à radiação UVB não foram observadas alterações significativas nos níveis de ácido ascórbico e na atividade enzimática, mas sim uma redução de 40% (p0,05). No estudo de exposição crônica dos camundongos sem pêlo à radiação ultravioleta, os grupos irradiados que não receberam tratamento com gel de P. umbellata apresentaram a pele fotoenvelhecida. O grupo irradiado e tratado com o gel de Pothomorphe umbellata não apresentou diferença significativa em relação ao grupo controle não irradiado, o que demostra que o extrato de Pothomorphe umbellata pode ser empregado com sucesso como agente foto protetor tópico no fotoenvelhecimento da pele.Topical administration of antioxidants provides an efficient way to enrich the endogenous antioxidant system and thus may be a successful strategy for diminishing ultraviolet radiation-mediated oxidative damage in the skin. The Brazilian Flora is rich in medicinal plants with a high potential to provide these antioxidant substances. Crude dried root ethanolic extracts of Pothomorphe umbellata, from the piperaceae family, demonstrated a significant activity in the prevention of in vitro spontaneous brain lipid peroxidation. This activity was attributed to 4-nerolidylcathecol, a compound isolated from the hexane extracts of roots and leaves of P. umbellata. In this work we evaluated the influence of topical application of P. umbellata root extract gel, containing 0,1% of 4-nerolidylcathecol, on the antioxidant network in ultraviolet-induced oxidative damage in hairless mouse skin. In this study we evaluated the influence of three different formulations (gel, gel-emulsion and emulsion) on the percutaneous absorption of 4-nerolidylcathecol, an antioxidant compound isolated from Pothomorphe umbellata root extracts. Also the absorption of the isolated 4-nerolidylcathecol was compared with its absorption when dried Pothomorphe umbellata root ethanolic extract was incorporated in gel and gel-emulsion formulations. The 4-nerolidylcathecolgel formulation presented the higher rate of penetration, leading to higher dry drug levels in the tissue.4-nerolidylcathecol was also absorbed in biological conditions and was stable when exposed to UV-irradiation. The UV-irradiation had no influence on ascorbic acid levels, or on the antioxidant enzymes activities, but topical P. umbellata treatment protected α-tocopherol from depletion after UV-irradiation. After UV-irradiation α-tocopherol concentration decreased significantly (≈40%, p0.05). We also tested the extract activity on animals chronically exposed to UV-radiation. The extract was able to prevent photoaging of the irradiated animals skin. These data demonstrate that P. umbellata may successfully employed as a topical photoprotective agent

Prevention of photo-oxidative damage to the skin for topical treatment with root extract of Phothomorphe umbellata L. Miq

Entre as estratégias de fotoproteção encontra-se a inibição da formação e/ou o seqüestro de radicais livres e espécies reativas de oxigênio geradas em conseqüência da exposição à radiação UV, mediante aplicação tópica de antioxidantes. No presente trabalho avaliou-se a permeação cutânea e o efeito da aplicação tópica de um extrato de Pothomorphe umbellata nos efeitos da exposição aguda e crônica à radiação ultravioleta, na pele de camundongos sem pêlo. No estudo de permeação cutânea foram testadas três formulações (gel, gel-creme e creme) contendo o princípio ativo do extrato (4-nerolidilcatecol) isolado. Também foram testadas duas formulações (gel, e gel-creme) contendo o extrato hidroalcoólico liofilizado de Pothomorphe umbellata, quanto à permeação do princípio ativo 4-nerolidilcatecol. A formulação gel tanto para o princípio ativo isolado, quanto para o princípio ativo presente no extrato, apresentou o melhor desempenho, sendo o gel o veículo escolhido para preparação da formulação utilizada nos ensaios de exposição crônica e aguda à radiação ultravioleta. Nos estudos de exposição aguda à radiação UVB não foram observadas alterações significativas nos níveis de ácido ascórbico e na atividade enzimática, mas sim uma redução de 40% (p0,05). No estudo de exposição crônica dos camundongos sem pêlo à radiação ultravioleta, os grupos irradiados que não receberam tratamento com gel de P. umbellata apresentaram a pele fotoenvelhecida. O grupo irradiado e tratado com o gel de Pothomorphe umbellata não apresentou diferença significativa em relação ao grupo controle não irradiado, o que demostra que o extrato de Pothomorphe umbellata pode ser empregado com sucesso como agente foto protetor tópico no fotoenvelhecimento da pele.Topical administration of antioxidants provides an efficient way to enrich the endogenous antioxidant system and thus may be a successful strategy for diminishing ultraviolet radiation-mediated oxidative damage in the skin. The Brazilian Flora is rich in medicinal plants with a high potential to provide these antioxidant substances. Crude dried root ethanolic extracts of Pothomorphe umbellata, from the piperaceae family, demonstrated a significant activity in the prevention of in vitro spontaneous brain lipid peroxidation. This activity was attributed to 4-nerolidylcathecol, a compound isolated from the hexane extracts of roots and leaves of P. umbellata. In this work we evaluated the influence of topical application of P. umbellata root extract gel, containing 0,1% of 4-nerolidylcathecol, on the antioxidant network in ultraviolet-induced oxidative damage in hairless mouse skin. In this study we evaluated the influence of three different formulations (gel, gel-emulsion and emulsion) on the percutaneous absorption of 4-nerolidylcathecol, an antioxidant compound isolated from Pothomorphe umbellata root extracts. Also the absorption of the isolated 4-nerolidylcathecol was compared with its absorption when dried Pothomorphe umbellata root ethanolic extract was incorporated in gel and gel-emulsion formulations. The 4-nerolidylcathecolgel formulation presented the higher rate of penetration, leading to higher dry drug levels in the tissue.4-nerolidylcathecol was also absorbed in biological conditions and was stable when exposed to UV-irradiation. The UV-irradiation had no influence on ascorbic acid levels, or on the antioxidant enzymes activities, but topical P. umbellata treatment protected α-tocopherol from depletion after UV-irradiation. After UV-irradiation α-tocopherol concentration decreased significantly (≈40%, p0.05). We also tested the extract activity on animals chronically exposed to UV-radiation. The extract was able to prevent photoaging of the irradiated animals skin. These data demonstrate that P. umbellata may successfully employed as a topical photoprotective agent

Assessment of acute and subchronic oral toxicity of ethanolic extract of Pothomorphe umbellata L. Miq (Pariparoba) Avaliação da toxidade oral aguda e subcrônica de extrato etanólico de Pothomorphe umbellata L. Miq. (Parapiroba)

There is a high degree of concern regarding the secure use of plant extracts and, for this very reason, preclinical and clinic toxicological evaluation of these extracts are needed. With the aim to assure the quality and the safety of the extract and due to the scarcity of literature information about Pariparoba extract toxicity, our purpose was to investigate the acute and subchronic toxicity of the standardized ethanolic dried root extract of Pothomorphe umbellata L. Miq. This extract was administered orally to adult swiss mice and wistar rats and the mutagenic potencial of the extract was also evaluated. The extract showed to be non toxic.<br>Existe uma grande preocupação quanto ao uso seguro de extratos vegetais e, por esta razão, a necessidade de estudos toxicológicos pré-clínicos e clínicos destes extratos. O objetivo deste trabalho foi o de avaliar a toxicidade aguda e subcrônica do extrato hidroalcoólico liofilizado de Pothomorphe umbellata L. Miq., administrado por via oral para animais de laboratório. O potencial mutagênico do extrato foi também avaliado pelo teste do micronúcleo. Os resultados dos estudos a curto e médio prazo demonstraram que o extrato não apresenta propriedades tóxicas

Simultaneous determination of chlorogenic acid, caffeic acid and caffeine in hydroalcoholic and aqueous extracts of Ilex paraguariensis by HPLC and correlation with antioxidant capacity of the extracts by DPPH&middot; reduction Determinação simultânea de ácido clorogênico, ácido caféico e cafeína, no extrato aquoso e hidroalcoólico de Ilex paraguariensis por CLAE e correlação com a capacidade antioxidante dos extratos por redução do DPPH&middot;

A new high performance liquid chromatographic method has been established for simultaneous determination of chlorogenic acid, caffeic acid and caffeine in hydroalcoholic and aqueous extracts of Ilex paraguariensis. Analytical curves showed good linear regression in the concentration ranges 0.49-7.8 µg/mL for chlorogenic acid, 0.25-3.9 µg/mL for caffeic acid and 0.244-7.8 µg/mL for caffeine. Reduction of the DPPH&middot; radical was used to determine the antioxidant capacity of the extracts. Our method for the simultaneous determination of chlorogenic acid, caffeic acid and caffeine was highly sensitive, having lower detection and quantitation limits than other papers that used similar methodology.<br>Um novo método de cromatografia líquida de alta eficiência foi desenvolvido para a determinação simultânea de ácido clorogênico, ácido caféico e cafeína no extrato hidroalcoólico e aquoso de Ilex paraguariensis. As curvas de calibração mostraram boa regressão linear nas faixas de concentração 0,49-7,8 µg/mL para o ácido clorogênico, 0,25-3,9 µg/mL para ácido caféico e 0,244-7,8 µg/mL para cafeína. A redução do radical DPPH&middot; foi usada para determinar a capacidade antioxidante dos extratos. Nosso método para a determinação simultânea de ácido caféico, ácido clorogênico e cafeína foi altamente sensível, possuindo limites de detecção e de quantificação menores do que em outros trabalhos que empregaram metodologias semelhantes

Standardization and determination of photostability of leaf extracts of Pothomorphe umbellata L. Miq (pariparoba) and evaluation of the inhibition in vitro of metalloproteinases 2 and 9 in skin

A maioria das pesquisas realizadas até hoje sobre os efeitos benéficos da pariparoba (Pothomorphe umbellata L. Miq) foi feita com o extrato da raíz desta espécie, e o seu emprego em larga escala comprometeria a exploração sustentável deste insumo natural. Neste sentido o uso das folhas da pariparoba, ao invés de raízes pela indústria cosmética, não põe em risco a existência da espécie. Neste trabalho foi determinada a concentração de 4-nerolidilcatecol (4-NC) de um extrato de folhas por metodologia analítica validada em nosso laboratório, cujo valor foi cerca de 30% menor que no extrato de raiz, obtido da mesma maneira. Na avaliação de fotoestabilidade do extrato de folhas, uma solução de 0,25 mg/mL não apresentou alterações significativas do perfil espectroscópico após 2 horas de exposição à radiação UVB, demonstrando sua estabilidade. Metaloproteinases (MMPs) são endopeptidases dependentes de zinco, envolvidas na remodelagem da matriz extracelular (MEC), e importantes na formação das rugas típicas do fotoenvelhecimento cutâneo. Também avaliamos, por técnica de zimografia, a capacidade do extrato de folhas de P. umbellata de inibir a atividade de MMPs 2 e 9 in vitro de pele de camundongos sem pêlo. O extrato de folhas (0,1 mg/mL) inibiu em 80% a atividade destas enzimas, conforme avaliação densitométrica.Most researches that have been done until today about the beneficial effects of pariparoba (Pothomorphe umbellata L. Miq) have been done with root extract of this species, but the use in large scale would compromise the sustainable exploration of this natural resource. In this sense, the utilization of pariparoba leaves, substituting the roots, in the cosmetic industry does not put in risk the existence of the species. In this work the concentration of 4-nerolidylcathecol (4-NC) in leaf extract was determined by the analytical methodology validated in our laboratory. The concentration of 4-NC in leaf extract was around 30% less than that of root extract, obtained in the same way. Concerning the study of the photostability of a leaves extract solution containing 4-NC did not demonstrate meaningful alterations in the spectrometry profile after 2 hours of exposure under UVB radiation, showing its stability under this conditions. Metalloproteinases (MMPs) are endopeptidases that are zinc-dependent, involved in remodeling extracellular matrix (ECM), that are important in the appearance of typical photoaging wrinkles. In this work the capacity of leaf extract of P. umbellata to inhibit MMP-2 and 9 activities of hairless mouse skin in vitro by zymography gel was also evaluated. The leaf extract (0,1 mg/mL) inhibit in 80% activity of this enzymes, according to the densitometric zymography evaluation.FAPES