Modificaciones morfológicas en el epitelio asociado al folículo del apéndice cecal e íleon terminal (Placa de Peyer) del conejo tras la administración de ovoalbúmina

Investigación BásicaEsta tesis evalúa morfológicamente (hoy, estándar dorado) modificaciones en el epitelio asociado al folículo del apéndice cecal y placa de Peyer del conejo (dos de los GALTs mayores digestivos) tras administración parenteral de ovoalbúmina, acrecentando bibliográficos desafíos antigénicos orales previos. Fue realizada en dichos órganos de este apropiado modelo biológico mediante seis grupos de animales (uno, control y cinco experimentales) y método y técnicas compatibles. De los resultados, reseñados y debatidos, son concluidos: (a) aportes originales (modificaciones en áreas del FAE y bolsillos membranosos de las células M, linfocitos intraepiteliales, apoptosis, lectinas y cambios histopatológicos - eosinófilos, edema, linfangiectasias y macrófagos - en dos etapas sucesivas [inflamatoria y reparadora]; probable merma funcional de la barrera mucosa en epitelio y sistema inmune mucoso; conexión entre los sistemas inmunitarios periférico y mucoso y origen criptal de las células M); (b) concordancias, discordancias e interacciones entre ambos órganos y (c) su posible derivación médica. Respondidas las preguntas-guía, corroborada la hipótesis alternativa y cumplidos los objetivos, la vía parenteral, prácticamente inexplorada hasta la fecha en dos órganos inmunoinductores claves así como los referidos cambios morfológicos post-desafío antigénico proveen la originalidad exigible a este tipo de trabajo.Fil: Roma, Stella Maris. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Carrera de Doctorado en Ciencias Biomédicas. Rosario; Argentin

Angiotensin type-2 (AT-2)-receptor activation reduces renal fibrosis in cyclosporine nephropathy: evidence for blood-pressure independent effect

Compound 21 (C21), selective agonist of AT2 receptors, shows antinflammatory effects in hypertension and nephroprotection in diabetes. The aim of this study was to evaluate the effects of C21 in cyclosporine nephropathy, which is characterized mainly by tubulo-interstitial fibrosis. Ten days before and during the experimental periods, low-salt diet was administered to Sprague Dawley rats. Cyclosporine-A (15mg/kg/day, i.p.) and cyclosporine-A plus C21 (0.3 mg/kg /day, i.p) were administered for 1 and 4 weeks. Control groups was left without any treatment. Blood pressure (plethysmographic method) and 24 hour albuminuria were measured once a week. At the end of the experiments, the kidneys were excised for histomorphometric analysis of renal fibrosis and for immunohistochemical evaluation of inflammatory infiltrates and type I and IV collagen expression.After 1 and 4 weeks, the rats treated with cyclosporine showed a significant increase (p <0.01) in blood pressure, no significant changes in albuminuria, a significant increase (p <0.01) in glomerular and tubulo-interstitial fibrosis and inflammatory infiltrates as compared to the control rats. Treatment with C21 did not modify the cyclosporine dependent increase of blood pressure, which was higher than in control rats, but after 4 weeks of treatment significantly reduced (p <0.01) glomerular and tubulo-interstitial fibrosis, type 1 collagen expression and macrophage infiltration, as compared to rats treated with cyclosporine.The administration of C21 showed a protective effect on cyclosporine nephropathy, decreasing renal fibrosis and macrophage infiltration. These data suggest that C21 may counteract tubulo-interstitial fibrosis, the most potent predictor of the progression of renal diseases

Histopathological changes in rectum from ovalbumin- sensitized and orally challenged rabbits

La alergia digestiva es una entidad frecuente y diagnosticable en distintas especies. Corresponde a respuestas inmunes anómalas en animales previamente sensibilizados, frente al ingreso por vía oral del antígeno y que pueden ser detectadas histopatológicamente. El objetivo fue describir los cambios histopatológicos del recto de conejos sensibilizados y desafiados con ovoalbúmina (OVA). Treinta conejos neozelandeses se dividideron en 3 grupos (G). G1: control, G2: sensibilizados por vía subcutánea con OVA y G3: sensibilizados con OVA y desafiados por vía oral con OVA. Muestras de recto se procesaron mediante técnica convencionales para microscopía óptica. La histopatología reveló en G3 edema focalizado en las túnicas mucosa y submucosa, linfangiectasias e infiltrado de eosinófilos, mientras que G1 y G2 no exhibieron alteraciones. El conejo constituye un modelo biológico de interés para el estudio de la reacción local de hipersensibilidad. El recto forma parte del sistema inmune común de las mucosas y por su fácil acceso a la biopsia y la simplicidad del estudio histopatológico, permite ser un referente de lo ocurrido en otros sitios del aparato digestivo. Los patrones histopatológicos descriptos, sumados a otros datos clínicos, permiten diagnosticar alergia digestiva y servirían, además, para la detección de alergenos en los alimentos balanceados.Food allergy is a frequent disturbance that may be diagnosed in different animal species. In a previously antigen-sensitized host, a further exposure to the putative antigen results in an altered immune response, able to promote a gastrointestinal anaphylactic reaction characterized by typical clinicopathological changes. The aim of the present work was to describe the histopathological modifications in rectum from ovalbumin (OVA) sensitized and further challenged rabbits. Thirty adult New Zealand rabbits were divided into three groups (G). G1: control. G2: OVA subcutaneously sensitized. G3: OVA sensitized followed by OVA oral challenge. Rectum samples were fixed in formaldehyde, paraffin-embedded and stained with H&E. Histopathological analy- ses from G3 rabbits showed localized oedema in mucosa and submucosa, lymphangiectasis together with eosinophil leukocyte infiltration. G1 and G2 animals remained without changes. The rabbit constitutes a useful animal model for studying the local anaphylactic immune reaction. Furthermore, the rectum belongs to the common immune mucosal system, reflects the immune responses taking place in another mucosal sites, and it is also accessible to biopsy. The allergic pattern of present histopathological findings reinforces the suitability of this model for the detection of food allergy.Facultad de Ciencias Veterinaria

Histopathological changes in rectum from ovalbumin- sensitized and orally challenged rabbits

La alergia digestiva es una entidad frecuente y diagnosticable en distintas especies. Corresponde a respuestas inmunes anómalas en animales previamente sensibilizados, frente al ingreso por vía oral del antígeno y que pueden ser detectadas histopatológicamente. El objetivo fue describir los cambios histopatológicos del recto de conejos sensibilizados y desafiados con ovoalbúmina (OVA). Treinta conejos neozelandeses se dividideron en 3 grupos (G). G1: control, G2: sensibilizados por vía subcutánea con OVA y G3: sensibilizados con OVA y desafiados por vía oral con OVA. Muestras de recto se procesaron mediante técnica convencionales para microscopía óptica. La histopatología reveló en G3 edema focalizado en las túnicas mucosa y submucosa, linfangiectasias e infiltrado de eosinófilos, mientras que G1 y G2 no exhibieron alteraciones. El conejo constituye un modelo biológico de interés para el estudio de la reacción local de hipersensibilidad. El recto forma parte del sistema inmune común de las mucosas y por su fácil acceso a la biopsia y la simplicidad del estudio histopatológico, permite ser un referente de lo ocurrido en otros sitios del aparato digestivo. Los patrones histopatológicos descriptos, sumados a otros datos clínicos, permiten diagnosticar alergia digestiva y servirían, además, para la detección de alergenos en los alimentos balanceados.Food allergy is a frequent disturbance that may be diagnosed in different animal species. In a previously antigen-sensitized host, a further exposure to the putative antigen results in an altered immune response, able to promote a gastrointestinal anaphylactic reaction characterized by typical clinicopathological changes. The aim of the present work was to describe the histopathological modifications in rectum from ovalbumin (OVA) sensitized and further challenged rabbits. Thirty adult New Zealand rabbits were divided into three groups (G). G1: control. G2: OVA subcutaneously sensitized. G3: OVA sensitized followed by OVA oral challenge. Rectum samples were fixed in formaldehyde, paraffin-embedded and stained with H&E. Histopathological analy- ses from G3 rabbits showed localized oedema in mucosa and submucosa, lymphangiectasis together with eosinophil leukocyte infiltration. G1 and G2 animals remained without changes. The rabbit constitutes a useful animal model for studying the local anaphylactic immune reaction. Furthermore, the rectum belongs to the common immune mucosal system, reflects the immune responses taking place in another mucosal sites, and it is also accessible to biopsy. The allergic pattern of present histopathological findings reinforces the suitability of this model for the detection of food allergy.Facultad de Ciencias Veterinaria

Histopathological changes in rectum from ovalbumin- sensitized and orally challenged rabbits

La alergia digestiva es una entidad frecuente y diagnosticable en distintas especies. Corresponde a respuestas inmunes anómalas en animales previamente sensibilizados, frente al ingreso por vía oral del antígeno y que pueden ser detectadas histopatológicamente. El objetivo fue describir los cambios histopatológicos del recto de conejos sensibilizados y desafiados con ovoalbúmina (OVA). Treinta conejos neozelandeses se dividideron en 3 grupos (G). G1: control, G2: sensibilizados por vía subcutánea con OVA y G3: sensibilizados con OVA y desafiados por vía oral con OVA. Muestras de recto se procesaron mediante técnica convencionales para microscopía óptica. La histopatología reveló en G3 edema focalizado en las túnicas mucosa y submucosa, linfangiectasias e infiltrado de eosinófilos, mientras que G1 y G2 no exhibieron alteraciones. El conejo constituye un modelo biológico de interés para el estudio de la reacción local de hipersensibilidad. El recto forma parte del sistema inmune común de las mucosas y por su fácil acceso a la biopsia y la simplicidad del estudio histopatológico, permite ser un referente de lo ocurrido en otros sitios del aparato digestivo. Los patrones histopatológicos descriptos, sumados a otros datos clínicos, permiten diagnosticar alergia digestiva y servirían, además, para la detección de alergenos en los alimentos balanceados.Food allergy is a frequent disturbance that may be diagnosed in different animal species. In a previously antigen-sensitized host, a further exposure to the putative antigen results in an altered immune response, able to promote a gastrointestinal anaphylactic reaction characterized by typical clinicopathological changes. The aim of the present work was to describe the histopathological modifications in rectum from ovalbumin (OVA) sensitized and further challenged rabbits. Thirty adult New Zealand rabbits were divided into three groups (G). G1: control. G2: OVA subcutaneously sensitized. G3: OVA sensitized followed by OVA oral challenge. Rectum samples were fixed in formaldehyde, paraffin-embedded and stained with H&E. Histopathological analy- ses from G3 rabbits showed localized oedema in mucosa and submucosa, lymphangiectasis together with eosinophil leukocyte infiltration. G1 and G2 animals remained without changes. The rabbit constitutes a useful animal model for studying the local anaphylactic immune reaction. Furthermore, the rectum belongs to the common immune mucosal system, reflects the immune responses taking place in another mucosal sites, and it is also accessible to biopsy. The allergic pattern of present histopathological findings reinforces the suitability of this model for the detection of food allergy.Facultad de Ciencias Veterinaria

Inflammation in rat bone induced by sodium fluoride

El fluoruro de sodio (NaF) y el monofluorofosfato de sodio (MFP) son compuestos que generan fluoruro, siendo capaces de aumentar la diferenciación y proliferación de precursores osteoblásticos. El NaF ha demostrado incrementar la densidad mineral ósea de la cadera y la columna vertebral, aunque todavía existen controversias en relación con la calidad del hueso neoformado. El objetivo del presente trabajo fue evaluar las modificaciones histopatológicas del hueso neoformado y los cambios morfométricos óseos bajo el tratamiento con NaF y MFP. Se utilizaron ratas hembras de 21 días de edad las que se dividieron en 3 grupos (n=8 por grupo): grupo control = 1 ml agua/día; grupo NaF = 80 µmol NaF/día; y grupo MFP = 80 µmol MFP/día. Se obtuvieron las tibias y fémures para los siguientes análisis: 1. Análisis histomorfométrico a nivel del hueso trabecular (volumen óseo trabecular, espesor y ancho trabecular); 2. Análisis morfométrico de hueso cortical (área y ancho cortical, perímetro perióstico y endóstico); 3. Ensayo biomecánico de flexión a tres puntos; 4. Análisis histopatológico. Se halló que a nivel trabecular, tanto el NaF como el MFP mostraron aumento del volumen óseo. A nivel de la diáfisis ningún tratamiento modificó el ancho cortical y la carga de fractura a la flexión en ensayo a tres puntos no evidenció diferencias significativas entre los grupos. El análisis histopatológico de los huesos de ratas tratadas con NaF mostró trabéculas óseas de aspecto predominantemente inmaduro, numerosos osteoblastos activos, osteoclastos con mayor multinucleación y bandas de fibrosis peritrabecular. Los animales tratados con MFP, por su parte, mostraron hueso en formación, de aspecto maduro, con un patrón más organizado. La falta de inflamación fue una característica distintiva respecto de huesos de ratas tratadas con NaF. La presencia de inflamación aguda en hueso de ratas tratadas con NaF podría explicar la falta de éxito en el tratamiento con esta droga.Sodium fluoride (NaF) and sodium monofluorophosphate (MFP) are compounds that generate fluoride, being able to increase differentiation and proliferation of osteoblast. It has been demonstrated that NaF increases bone mineral density at the level of hip and spine, although there are still controversies regarding the quality of bone. The aim of this study was to evaluate the histopathological characteristics of bone tissue and bone morphometric differences under treatment with NaF and MFP. Experiments were carried out in female rats which were divided in 3 groups (n= 8 per group): control group = water 1 ml/day; NaF group = NaF 80 mmol/ day, and MFP group = MFP 80 mmol/day. After that, the tibia and femur were obtained for the following analysis: 1. Histomorphometric analysis of trabecular bone (trabecular bone volume, trabecular thickness and trabecular width) 2. Morphometric analysis of cortical bone (cortical area, cortical width, periosteal and endosteal perimeter); 3. Biomechanical three-point bending test; 4. Histopathological analysis. NaF and MFP showed increased trabecular bone volume. At midshaft level the treatment did not modify the cortical width and the fracture load in a three-point bending test showed no significant differences between groups. Histopathological analysis of the bones of rats treated with NaF showed an immature bone net, numerous active osteoblasts, osteoclasts with greater multinucleation and fibrosis peritrabecular. The animals treated with MFP showed bone with mature appearance and a more organized pattern. The lack of inflammation was a distinctive feature compared with bones of rats treated with NaF. The presence of acute inflammation in bone of rats treated with NaF could explain the lack of therapeutic success with this drug.Fil: Brun, Lucas Ricardo Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Laboratorio de Biología Ósea; ArgentinaFil: Roma, Stella Maris. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Laboratorio de Biología Ósea; ArgentinaFil: Pérez, Fernando. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Escuela de Ciencias Médicas; ArgentinaFil: Rigalli, Alfredo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Laboratorio de Biología Ósea; Argentin

Mucosal alcian blue positive mast cells in cecum from normal and splenectomized rabbits sensitized and challenged with ova

La sensibilización por vía intraperitoneal produce síntesis de IgE que se une a mastocitos. Los mastocitos mucosos, cuya proliferación depende de linfoquinas de células T, permanecen sensibilizados hasta 12 semanas. Un segundo contacto con el antígeno libera mediadores de hipersensibilidad local. La esplenectomía disminuye las inmunoglobulinas circulantes y modifica la respuesta inmunitaria. Por la cecotrofia, llegan al ciego moléculas en diferentes etapas de degradación, posibilitando el contacto de antígenos con la barrera mucosa. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la cantidad de mastocitos mucosos detectables con azul alciano (AB) en el ciego de conejo normales y esplenectomizados, sensibilizados con Ovoalbúmina (OVA) y desafiados por vía oral. Conejos neozelandeses se dividieron en Grupo 1 (n=10) control no sensibilizado, Grupo 2 (n=10) sensibilizado intraperitonealmente en dos oportunidades con 2 ml de una solución de 70 µg de OVA y 30 mg de hidróxido de aluminio (ALUM)/ml, Grupo 3 (n=10) esplenectomizados y sensibilizados como el grupo 2. Los títulos de IgE específica anti-OVA fueron determinados por el test de anafilaxia cutánea pasiva. Los conejos de los grupos 2 y 3 fueron desafiados, previo ayuno de 24 horas, por instilación con sonda intragástrica, con 150 mg de OVA en 20 ml de PBS. Muestras de ciego, obtenidas 24 horas post desafío y fijadas en Carnoy se colorearon con AB pH < 1. Los mastocitos AB + se contaron en 20 campos en cada animal a 400X. El grupo 1 mostró 1,33 + 0,82 mastocitos por campo. El grupo 2: 12,88 + 2,17 (p< 0,05) y el grupo 3: 11,67 + 2,37 (p< 0,05). Los resultados muestran un marcado incremento de mastocitos mucosos en animales sensibilizados y desafiados que indicaría liberación de factores mediadores determinantes del reclutamiento mastocitario y que la esplenectomía no afectó el incremento mastocitario a nivel del ciego, con un comportamiento similar al del grupo no esplenectomizado.The intraperitoneal sensitization induces IgE synthesis which binds to mast cells. Mucosal mast cells proliferation depends on lymphokines from T cells and remains sensitized up to 12 weeks after contact with antigen. A second interaction with antigen produces the delivery of mediators which generate a local anaphylactic reaction. Splenectomy in rabbits determines a significant decrease in seric immunoglobulins as well as modification in the immune response. Cecotrophy is a particular mechanism of rabbit digestive physiology which allows the entire antigenic molecules to be in close contact with cecal mucosal barrier. The aim of the present work was to evaluate the number of Alcian Blue (AB)-positive mast cells in cecum form both normal and splenectomized rabbits, sensitized with OVA and oral challenge. New Zealand rabbits were divided into 3 groups: Group 1 (n=10) not sensitized control. Group 2 (n=10) was twice sensitized intraperitoneally with 2 ml of a 70 micrograms OVA and 30 mg aluminium hydroxide (ALUM)/ml PBS solution. Group 3 (n=10) was splenectomized and sensibitized as group 2. Anti-OVA IgE titers were determinate by Passive Cutaneous Anaphylaxis Test (PCA). Rabbits from groups 2 and 3 were challenged with 150 mg OVA in 20 ml PBS by instillation with an intragastric canula. Samples form cecum were fixed in Carnoy and stained with AB pH<1 24 hours after challenge. AB- positive mast cells were counted in 20 fields per animal at X400. Group 1 showed 1.33 + 0.82 mast cell per field; group 2: 12.88 + 2.17 (p<0.05); Group 3: 11.67 + 2.37 (p<0.05). Results showed, firstly, an important increase in the number of mucosal mast cell in sensibitized and challenged groups which indicates the delivery of chemoatractants for recruitment of mast cell and secondly, that splenectomy induces no modifications in such mast cell increase, as seen in the not-splenectomized group.Facultad de Ciencias Veterinaria

Enteroendocrine cells in cecum and appendix from rabbit

Las células enteroendócrinas (CEE) del intestino son células relacionadas con la motilidad, secreción y absorción de nutrientes. Su rol relacionado a la función inmunológica está siendo estudiado recientemente. El ciego es el órgano fundamental de la cecotrofia. Constituye una cuba de fermentación equivalente al rumen de los poligástricos. El apéndice es continuación del ciego y es un órgano linfático de gran importancia en el conejo. La presencia en ambos de bacterias y nutrientes en distintas etapas de digestión implica la potencial acción antigénica de las mismas, por lo que ambos órganos resultan un modelo de interés para el análisis de la reacción local de hipersensibilidad. La necesidad de contar con valores de normalidad y las pocas referencias bibliográficas sobre estas células en ciego y apéndice de conejos normales, nos llevó a estudiar la localización, cuantificaci ón y distribución de las mismas en estos órganos. Muestras de ciego y apéndice de 10 conejos neozelandeses adultos en condiciones standard de criadero, fijadas en formol buffer al 10%, incluidas en parafina, se marcaron con anticuerpo monoclonal anti-Cromogranina A. En cada órgano se contaron 400 campos refiriéndose las células enteroendócrinas en relación a 100 enterocitos. En ciego, se consideró epitelio superficial y cripta. En apéndice, epitelio superficial, cripta superficial y cripta profunda. En ciego, el epitelio superficial mostró 1.6 CEE /100 enterocitos, mientras que las criptas 3.0 CEE/100 enterocitos. En apéndice, el epitelio superficial presentó 5.2 enteroendócrinas/ 100 enterocitos, en criptas superficiales 8.5 CEE /100 y en las profundas 4.9 CEE/100. Los resultados nos permiten establecer que la cantidad de células enteroendócrinas es mayor en apéndice que en ciego y que se distribuyen en forma desigual en epitelio superficial y en criptas. Las diferencias cuantitativas entre los órganos y su distribución avalan una relación histofisiológica de estas células con el tejido linfático de la barrera mucosa intestinal.Gut intraepithelial enteroendocrine cells (EEC) are related to motility, secretion and absorption of nutrients. Recently, their role in the immune response is being studied. Cecotrophy is a particular mechanism of rabbit digestive physiology which allows the entire antigenic molecules to get in close contact with cecal mucosal barrier. Appendix constitutes an important lymphatic organ in rabbit. Cecum and appendix present many bacteria and nutrients in different grades of digestion being potential antigens. The lack of references about EEC in rabbit lead us to study the localization and to quantify their distribution in both organs. Samples from cecum and appendix from 10 adults newzealand rabbits were fixed in 10% buffered formaldehyde, embedded in paraffin and stained with Chromogranin A for neuroendocrine cells. Enteroendocrine cells in 400 High power field were counted in each organ, referred as enteroendocrine cells per 100 enterocytes. In cecum surface epithelium and crypt were considered, meanwhile in appendix, surface epithelium, superficial and deep crypts. In cecum surface epithelium showed 1.6 enteroendocrine cells per 100 enterocytes while in crypts 3.0/100. In appendix surface epithelium presented 5.2 enteroendocrine cells per 100 enterocytes, in superficial crypts 8.5/100 and in deep crypts 4.9/100. Results allow us to conclude that enteroendocrine cells in appendix are more frequent than in cecum and they also have a different distribution in superficial epithelium and crypts. The differences in the number and distribution in both organs may indicate a histophysiological relation between these cells and the lymphatic tissue from the intestinal mucosal barrier.Facultad de Ciencias Veterinaria

Mucosal alcian blue positive mast cells in cecum from normal and splenectomized rabbits sensitized and challenged with ova

La sensibilización por vía intraperitoneal produce síntesis de IgE que se une a mastocitos. Los mastocitos mucosos, cuya proliferación depende de linfoquinas de células T, permanecen sensibilizados hasta 12 semanas. Un segundo contacto con el antígeno libera mediadores de hipersensibilidad local. La esplenectomía disminuye las inmunoglobulinas circulantes y modifica la respuesta inmunitaria. Por la cecotrofia, llegan al ciego moléculas en diferentes etapas de degradación, posibilitando el contacto de antígenos con la barrera mucosa. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la cantidad de mastocitos mucosos detectables con azul alciano (AB) en el ciego de conejo normales y esplenectomizados, sensibilizados con Ovoalbúmina (OVA) y desafiados por vía oral. Conejos neozelandeses se dividieron en Grupo 1 (n=10) control no sensibilizado, Grupo 2 (n=10) sensibilizado intraperitonealmente en dos oportunidades con 2 ml de una solución de 70 µg de OVA y 30 mg de hidróxido de aluminio (ALUM)/ml, Grupo 3 (n=10) esplenectomizados y sensibilizados como el grupo 2. Los títulos de IgE específica anti-OVA fueron determinados por el test de anafilaxia cutánea pasiva. Los conejos de los grupos 2 y 3 fueron desafiados, previo ayuno de 24 horas, por instilación con sonda intragástrica, con 150 mg de OVA en 20 ml de PBS. Muestras de ciego, obtenidas 24 horas post desafío y fijadas en Carnoy se colorearon con AB pH < 1. Los mastocitos AB + se contaron en 20 campos en cada animal a 400X. El grupo 1 mostró 1,33 + 0,82 mastocitos por campo. El grupo 2: 12,88 + 2,17 (p< 0,05) y el grupo 3: 11,67 + 2,37 (p< 0,05). Los resultados muestran un marcado incremento de mastocitos mucosos en animales sensibilizados y desafiados que indicaría liberación de factores mediadores determinantes del reclutamiento mastocitario y que la esplenectomía no afectó el incremento mastocitario a nivel del ciego, con un comportamiento similar al del grupo no esplenectomizado.The intraperitoneal sensitization induces IgE synthesis which binds to mast cells. Mucosal mast cells proliferation depends on lymphokines from T cells and remains sensitized up to 12 weeks after contact with antigen. A second interaction with antigen produces the delivery of mediators which generate a local anaphylactic reaction. Splenectomy in rabbits determines a significant decrease in seric immunoglobulins as well as modification in the immune response. Cecotrophy is a particular mechanism of rabbit digestive physiology which allows the entire antigenic molecules to be in close contact with cecal mucosal barrier. The aim of the present work was to evaluate the number of Alcian Blue (AB)-positive mast cells in cecum form both normal and splenectomized rabbits, sensitized with OVA and oral challenge. New Zealand rabbits were divided into 3 groups: Group 1 (n=10) not sensitized control. Group 2 (n=10) was twice sensitized intraperitoneally with 2 ml of a 70 micrograms OVA and 30 mg aluminium hydroxide (ALUM)/ml PBS solution. Group 3 (n=10) was splenectomized and sensibitized as group 2. Anti-OVA IgE titers were determinate by Passive Cutaneous Anaphylaxis Test (PCA). Rabbits from groups 2 and 3 were challenged with 150 mg OVA in 20 ml PBS by instillation with an intragastric canula. Samples form cecum were fixed in Carnoy and stained with AB pH<1 24 hours after challenge. AB- positive mast cells were counted in 20 fields per animal at X400. Group 1 showed 1.33 + 0.82 mast cell per field; group 2: 12.88 + 2.17 (p<0.05); Group 3: 11.67 + 2.37 (p<0.05). Results showed, firstly, an important increase in the number of mucosal mast cell in sensibitized and challenged groups which indicates the delivery of chemoatractants for recruitment of mast cell and secondly, that splenectomy induces no modifications in such mast cell increase, as seen in the not-splenectomized group.Facultad de Ciencias Veterinaria

Enteroendocrine cells in cecum and appendix from rabbit

Las células enteroendócrinas (CEE) del intestino son células relacionadas con la motilidad, secreción y absorción de nutrientes. Su rol relacionado a la función inmunológica está siendo estudiado recientemente. El ciego es el órgano fundamental de la cecotrofia. Constituye una cuba de fermentación equivalente al rumen de los poligástricos. El apéndice es continuación del ciego y es un órgano linfático de gran importancia en el conejo. La presencia en ambos de bacterias y nutrientes en distintas etapas de digestión implica la potencial acción antigénica de las mismas, por lo que ambos órganos resultan un modelo de interés para el análisis de la reacción local de hipersensibilidad. La necesidad de contar con valores de normalidad y las pocas referencias bibliográficas sobre estas células en ciego y apéndice de conejos normales, nos llevó a estudiar la localización, cuantificaci ón y distribución de las mismas en estos órganos. Muestras de ciego y apéndice de 10 conejos neozelandeses adultos en condiciones standard de criadero, fijadas en formol buffer al 10%, incluidas en parafina, se marcaron con anticuerpo monoclonal anti-Cromogranina A. En cada órgano se contaron 400 campos refiriéndose las células enteroendócrinas en relación a 100 enterocitos. En ciego, se consideró epitelio superficial y cripta. En apéndice, epitelio superficial, cripta superficial y cripta profunda. En ciego, el epitelio superficial mostró 1.6 CEE /100 enterocitos, mientras que las criptas 3.0 CEE/100 enterocitos. En apéndice, el epitelio superficial presentó 5.2 enteroendócrinas/ 100 enterocitos, en criptas superficiales 8.5 CEE /100 y en las profundas 4.9 CEE/100. Los resultados nos permiten establecer que la cantidad de células enteroendócrinas es mayor en apéndice que en ciego y que se distribuyen en forma desigual en epitelio superficial y en criptas. Las diferencias cuantitativas entre los órganos y su distribución avalan una relación histofisiológica de estas células con el tejido linfático de la barrera mucosa intestinal.Gut intraepithelial enteroendocrine cells (EEC) are related to motility, secretion and absorption of nutrients. Recently, their role in the immune response is being studied. Cecotrophy is a particular mechanism of rabbit digestive physiology which allows the entire antigenic molecules to get in close contact with cecal mucosal barrier. Appendix constitutes an important lymphatic organ in rabbit. Cecum and appendix present many bacteria and nutrients in different grades of digestion being potential antigens. The lack of references about EEC in rabbit lead us to study the localization and to quantify their distribution in both organs. Samples from cecum and appendix from 10 adults newzealand rabbits were fixed in 10% buffered formaldehyde, embedded in paraffin and stained with Chromogranin A for neuroendocrine cells. Enteroendocrine cells in 400 High power field were counted in each organ, referred as enteroendocrine cells per 100 enterocytes. In cecum surface epithelium and crypt were considered, meanwhile in appendix, surface epithelium, superficial and deep crypts. In cecum surface epithelium showed 1.6 enteroendocrine cells per 100 enterocytes while in crypts 3.0/100. In appendix surface epithelium presented 5.2 enteroendocrine cells per 100 enterocytes, in superficial crypts 8.5/100 and in deep crypts 4.9/100. Results allow us to conclude that enteroendocrine cells in appendix are more frequent than in cecum and they also have a different distribution in superficial epithelium and crypts. The differences in the number and distribution in both organs may indicate a histophysiological relation between these cells and the lymphatic tissue from the intestinal mucosal barrier.Facultad de Ciencias Veterinaria