Isolating and identifying proteins binding to a specific plasmodium falciparum calmodulin gene promotor sequence

This study continues the search for Plasmodium falciparum transcriptional machinery by isolating DNA binding pro­teins that could contribute towards discovering new therapeutic targets. The calmodulin gene was thus used as the model, using a 149 bp DNA fragment (PÆ’CAM149) specific for the 5' non-translated region. Partially purified proteins derived from total parasite nuclear extract were used to scale the PÆ’CAM149-biotina-streptavidin-magnesphere DNA affinity microsystem previously developed for capturing those proteins specifically binding to the DNA PÆ’CAM149 sequence. The scaling allowed the protein to be recycled three times through chromatographic matrix and determine which proteins remained bound to the system, indicating specific interaction with the calmodulin gene (PÆ’CAM149) promoter sequence. It also enabled obtaining the quantity of protein necessary for sequencing. Other assays allowed binding activity to be tracked by using eukaryotic transcription factor consensus sequences (CREB, OCT1, MIG, GATA), leading to selecting a 54 kDa protein whose possible identity corresponds to the E4BP4 transcription factor or related sequences. Problems regarding quantity were overcome in this work. Binding specificity was ascertained and it was determined that the 54 kDa protein had an intrinsic modification impeding its amino terminal being sequenced. These assays showed that CREB, or related transcription factors, form part of the parasite's transcriptional machinery. Key words: malaria; Plasmodium falciparum; machinery; transcription; transcription factorsEn este trabajo se sigue la búsqueda de la maquinaria transcripcional de Plasmodium falciparum, aislando proteínas de unión a DNA, que podrían contribuir en un futuro a encontrar nuevos blancos terapéuticos. Con este fin se tomó como modelo el gen de calmodulina, utilizando específicamente un fragmento de DNA de 149 pb (PfCAM149) de la región 5' no traducida. Proteínas parcialmente purificadas provenientes del extracto nuclear total del parásito, se usaron para escalar el microsistema de afinidad DNA PfCAM149-biotina- estreptavidina- magnesferas, previamente desarrollado, para capturar aquellas proteínas de unión específica a la secuencia de DNA PfCAM149. El escalamiento permitió reci-clar tres veces la proteína a través de la matriz cromatográfica y determinar cuáles proteínas permanecían unidas al sistema, indicando interacción específica a la secuencia del promotor del gen de calmodulina (PfCAM149); además, condujo a obtener la cantidad de proteína necesaria para secuenciación. Por otra parte, se realizaron ensayos para rastrear la actividad de unión con secuencias consenso para factores de transcripción eucariotes (CREB, OCT1, MIG y GATA), que permitieron elegir una proteína de 54 kDa, cuya posible identidad corresponde al factor de transcripción E4BP4 o secuencias relacionadas. Con este trabajo se superaron problemas de cantidad, se comprobó la especificidad de la unión y se determinó que la proteína de 54 kDa tenía una modificación intrínseca que impidió la secuenciación de su extremo aminoterminal. Los ensayos realizados evidencian que el factor de trascripción CREB, o factores de trans­cripción relacionados forman parte de la maquinaria transcripcional del parásito. Palabras claves: malaria; Plasmodium falciparum; maquinaria; transcripción; factores de transcripción

Aislamiento e identificación de proteínas de unión a una secuencia específica del promotor del gen calmodulina de Plasmodium falciparum

En este trabajo se sigue la búsqueda de la maquinaria transcripcional de Plasmodium falciparum, aislando proteínas de unión a DNA, que podrían contribuir en un futuro a encontrar nuevos blancos terapéuticos. Con este fin se tomó como modelo el gen de calmodulina, utilizando específicamente un fragmento de DNA de 149 pb (PfCAM149) de la región 5' no traducida. Proteínas parcialmente purificadas provenientes del extracto nuclear total del parásito, se usaron para escalar el microsistema de afinidad DNA PfCAM149-biotina- estreptavidina- magnesferas, previamente desarrollado, para capturar aquellas proteínas de unión específica a la secuencia de DNA PfCAM149. El escalamiento permitió reci-clar tres veces la proteína a través de la matriz cromatográfica y determinar cuáles proteínas permanecían unidas al sistema, indicando interacción específica a la secuencia del promotor del gen de calmodulina (PfCAM149); además, condujo a obtener la cantidad de proteína necesaria para secuenciación. Por otra parte, se realizaron ensayos para rastrear la actividad de unión con secuencias consenso para factores de transcripción eucariotes (CREB, OCT1, MIG y GATA), que permitieron elegir una proteína de 54 kDa, cuya posible identidad corresponde al factor de transcripción E4BP4 o secuencias relacionadas. Con este trabajo se superaron problemas de cantidad, se comprobó la especificidad de la unión y se determinó que la proteína de 54 kDa tenía una modificación intrínseca que impidió la secuenciación de su extremo aminoterminal. Los ensayos realizados evidencian que el factor de trascripción CREB, o factores de trans­cripción relacionados forman parte de la maquinaria transcripcional del parásito. Palabras claves: malaria; Plasmodium falciparum; maquinaria; transcripción; factores de transcripción

Aislamiento e identificación de proteínas de unión a una secuencia específica del promotor del gen calmodulina de Plasmodium falciparum

En este trabajo se sigue la búsqueda de la maquinaria transcripcional de Plasmodium falciparum, aislando proteínas de unión a DNA, que podrían contribuir en un futuro a encontrar nuevos blancos terapéuticos. Con este fin se tomó como modelo el gen de calmodulina, utilizando específicamente un fragmento de DNA de 149 pb (PfCAM149) de la región 5' no traducida. Proteínas parcialmente purificadas provenientes del extracto nuclear total del parásito, se usaron para escalar el microsistema de afinidad DNA PfCAM149-biotina- estreptavidina- magnesferas, previamente desarrollado, para capturar aquellas proteínas de unión específica a la secuencia de DNA PfCAM149. El escalamiento permitió reci-clar tres veces la proteína a través de la matriz cromatográfica y determinar cuáles proteínas permanecían unidas al sistema, indicando interacción específica a la secuencia del promotor del gen de calmodulina (PfCAM149); además, condujo a obtener la cantidad de proteína necesaria para secuenciación. Por otra parte, se realizaron ensayos para rastrear la actividad de unión con secuencias consenso para factores de transcripción eucariotes (CREB, OCT1, MIG y GATA), que permitieron elegir una proteína de 54 kDa, cuya posible identidad corresponde al factor de transcripción E4BP4 o secuencias relacionadas. Con este trabajo se superaron problemas de cantidad, se comprobó la especificidad de la unión y se determinó que la proteína de 54 kDa tenía una modificación intrínseca que impidió la secuenciación de su extremo aminoterminal. Los ensayos realizados evidencian que el factor de trascripción CREB, o factores de trans­cripción relacionados forman parte de la maquinaria transcripcional del parásito. Palabras claves: malaria; Plasmodium falciparum; maquinaria; transcripción; factores de transcripción

Factores que pueden influir en el rendimiento académico de estudiantes de Bioquímica que ingresan en el programa de Medicina de la Universidad del Rosario-Colombia

Introducción. El análisis del rendimiento académico de los estudiantes que ingresan a una institución de educación superior, así como los factores que pueden estar influyendo en él, genera respuestas a los interrogantes que corrientemente se hacen las personas involucradas en los procesos educativos y permite proponer soluciones para mejorar el desempeño de los estudiantes universitarios. Sujetos y métodos. Se determinó la asociación entre el rendimiento académico de los estudiantes en el primer nivel de Bioquí- mica, con los factores de tipo académico y demográfico; se utilizaron dos métodos de análisis: el primero, numérico, de acuerdo con los promedios de las notas parciales y finales; el segundo, categorizado como éxito (≥ 3,0) o fracaso (< 3,0), de acuerdo con el promedio de la nota definitiva de la asignatura. Resultados. Se encontró una asociación positiva y estadísticamente significativa entre los resultados de las pruebas de estado generales y específicas (ciencias naturales y matemáticas), el estatus de becario institucional y el ingreso directo a la carrera sin realizar cursos preuniversitarios, con el rendimiento académico en Bioquímica. Factores como el colegio en el cual realizaron la educación secundaria y la ciudad de procedencia no afectaron significativamente el rendimiento en ninguno de los análisis aplicados. Conclusiones. El rendimiento académico en Bioquímica se ve afectado directamente por factores que involucran las competencias individuales de los estudiantes, pero no por factores demográficos.Introduction. The analysis of the students’ academic achievement in a higher education institution together with the different factors that affect the student’s performance generates answers to the questions that the people involved in the teaching process commonly ask themselves. This analysis is therefore, an excellent way to find and propose solutions in order to improve the student’s performance. Subjects and methods. The association between the students’ academic performance and the academic and demographic factors was determined in the first level of Biochemistry. Two methodologies were used for this purpose. The first one, a numerical analysis based on the partial and final grades, and a second categorical method based on the final success (? 3.0) or failure (3.0) on the subject. Results. A positive and statistically significant correlation was found when the academic performance in Biochemistry, the general and specific results of the state test (natural sciences and mathematics), the institutional scholarship status and entering the Medicine program without pre-university courses was analyzed. Factors, such as coming from different schools and the city of origin, do not affect significantly the performance in any of the analyses. Conclusions. Academic performance in Biochemistry is directly affected by factors involving the individual student’s skills while the demographical factors are not involved

Factores que pueden influir en el rendimiento académico de estudiantes de Bioquímica que ingresan en el programa de Medicina de la Universidad del Rosario-Colombia

Introducción. El análisis del rendimiento académico de los estudiantes que ingresan a una institución de educación superior, así como los factores que pueden estar influyendo en él, genera respuestas a los interrogantes que corrientemente se hacen las personas involucradas en los procesos educativos y permite proponer soluciones para mejorar el desempeño de los estudiantes universitarios. Sujetos y métodos. Se determinó la asociación entre el rendimiento académico de los estudiantes en el primer nivel de Bioquí- mica, con los factores de tipo académico y demográfico; se utilizaron dos métodos de análisis: el primero, numérico, de acuerdo con los promedios de las notas parciales y finales; el segundo, categorizado como éxito (≥ 3,0) o fracaso (< 3,0), de acuerdo con el promedio de la nota definitiva de la asignatura. Resultados. Se encontró una asociación positiva y estadísticamente significativa entre los resultados de las pruebas de estado generales y específicas (ciencias naturales y matemáticas), el estatus de becario institucional y el ingreso directo a la carrera sin realizar cursos preuniversitarios, con el rendimiento académico en Bioquímica. Factores como el colegio en el cual realizaron la educación secundaria y la ciudad de procedencia no afectaron significativamente el rendimiento en ninguno de los análisis aplicados. Conclusiones. El rendimiento académico en Bioquímica se ve afectado directamente por factores que involucran las competencias individuales de los estudiantes, pero no por factores demográficos.Introduction. The analysis of the students’ academic achievement in a higher education institution together with the different factors that affect the student’s performance generates answers to the questions that the people involved in the teaching process commonly ask themselves. This analysis is therefore, an excellent way to find and propose solutions in order to improve the student’s performance. Subjects and methods. The association between the students’ academic performance and the academic and demographic factors was determined in the first level of Biochemistry. Two methodologies were used for this purpose. The first one, a numerical analysis based on the partial and final grades, and a second categorical method based on the final success (? 3.0) or failure (3.0) on the subject. Results. A positive and statistically significant correlation was found when the academic performance in Biochemistry, the general and specific results of the state test (natural sciences and mathematics), the institutional scholarship status and entering the Medicine program without pre-university courses was analyzed. Factors, such as coming from different schools and the city of origin, do not affect significantly the performance in any of the analyses. Conclusions. Academic performance in Biochemistry is directly affected by factors involving the individual student’s skills while the demographical factors are not involved

Estrategias pedagógicas como herramienta educativa : "La tutoría y el proceso formativo de los estudiantes"

Una larga tradición, que aún persiste, considera la enseñanza como una demostración de los conocimientos que maneja el profesor, y el aprendizaje como la adquisición de una gran cantidad de información para memorizar por parte del estudiante (Lujan, 2006). Contrario a lo anterior, el profesor debería asumir un papel más dirigido hacia la organización de la información y hacia el diseño y práctica de estrategias didácticas que permitieran una mayor participación, independencia y responsabilidad por parte del estudiante (Joel, 2006) -- Introducció

Estrategias pedagógicas como herramienta educativa : "La tutoría y el proceso formativo de los estudiantes"

Una larga tradición, que aún persiste, considera la enseñanza como una demostración de los conocimientos que maneja el profesor, y el aprendizaje como la adquisición de una gran cantidad de información para memorizar por parte del estudiante (Lujan, 2006). Contrario a lo anterior, el profesor debería asumir un papel más dirigido hacia la organización de la información y hacia el diseño y práctica de estrategias didácticas que permitieran una mayor participación, independencia y responsabilidad por parte del estudiante (Joel, 2006) -- Introducció

Study of the proteins regulated by calcium and calmodulinduting the asexual cell cycle of Plasmodium falciparum

IP 2104-04-170-95Incluye anexos.ARTICULO(S) EN REVISTA: Increase of Calcium independent transglutaminese activity in the erythrocyte during;the infection with plasmodium falciparum / Moises Wasserman. ...[et al.].'-- en: memorias Instituto Oswaldo;Cruz, Rio de Janeiro. -- Vol. 94, no. 1 (Jan.- Feb. 1999);p.95-100. -- Isolation and identification of;actin-binding proteins in plasmodium falciparum by affinity chromatography/ Claudia Forero, Moises Wasserman.; En: Memorias Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro. --Vol.95, no. 3(May.- Jun. 2000); p. 329-337. --;Intraerythocytic calcium chelators inhibit the invasion ofplasmodium falciparum / Moises Wasserman,;Jacqueline Chaparro. -- En: Parasitol Res. -- Vol. 82 (1996);p.102-107.'-- evaluacion de Metodos para La;separacion eficiente de leucocitos / Johanna castro, MariaOrfaRojas, Moises Wasserman. -- En: Biomedica. --;Vol. 16 (19996); p. 98-104. -- Preparacion de columnas deafinidad con actina-F y actina-G para la obtencion;de proteinas de union a actina en Plasmodium falciparum /Claudia Forero,Moises Wasserman. -- En: Biomedica.; Vol. 17 (1997); p. 205-212. -- Evaluacion de dos metodos parala separacion de RNA mensajero de Plasmodium;'-- Expresion del gen asociado con La resistencia multiplea medicamentos (pmfdr1) en cepas colombianas de;Plasmodium falciparum / Eliana P. Calvo. ... [et al.]. --En:Biomedica. -- Vol. 19, no. 3 (1999); p. 198-206.;falciparum / Heidy Guerrero, Maria Orfa Rojas, Moises Wasserman.'-- en: Biomedica. -- Vol. 18, no. 1 (1998);p. 55-65. -- Adecuacion de una prueba radiometrica para ladeteccion de resistencia multiple de Plasmodium;'-- Deteccion y Expresion de una proteina de union a calmudulinaen Plasmodium falsiparum / Angela P. Guerra.;... [et al.]. -- En: Biomedica. -- Vol. 21 (2001); p. 1-11.;falsiparum a medicamentos / Jacqueline Chaparrao, Moises Wasserman. -- En:Biomedica. -- Vol. 19, no. 1;(1999); p. 25-34. -- Comparacion de tecnicas in vitro paradetectar resistencia de Plasmodium falciparum a;medicamentos / Jacqueline Chaparro, Moises Wasserman. -- En: Biomedica. --Vol. 19, no. 2 (1999); p. 103-114