Human adipose-derived mesenchymal stem/stromal cells handling protocols. Lipid droplets and proteins double-staining

Human Adipose-derived mesenchymal stem/stromal cells (hASCs) are of great interest because of their potential for therapeutic approaches. The method described here covers every single step necessary for hASCs isolation from subcutaneous abdominal adipose tissue, multicolor phenotyping by flow cytometry, and quantitative determination of adipogenic differentiation status by means of lipid droplets (LDs) accumulation, and Western blot analysis. Moreover, to simultaneously analyze both LDs accumulation and cellular proteins localization by fluorescence microscopy, we combined Oil Red O (ORO) staining with immunofluorescence detection. For LDs quantification we wrote a program for automatic ORO-stained digital image processing implemented in Octave, a freely available software package. Our method is based on the use of the traditional low cost neutral lipids dye ORO, which can be imaged both by bright-field and fluorescence microscopy. The utilization of ORO instead of other more expensive lipid-specific dyes, together with the fact that the whole method has been designed employing cost-effective culture reagents (standard culture medium and serum), makes it affordable for tight-budget research laboratories. These may be replaced, if necessary or desired, by defined xeno-free reagents for clinical research and applications.Fil: Gojanovich, Aldana Daniela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; ArgentinaFil: Gimenez, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentina. Universidad Juan Agustín Maza, Facultad de de Ciencias Veterinarias y Ambientales; ArgentinaFil: Masone, Diego Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentina. Universidad Nacional de Cuyo; ArgentinaFil: Rodríguez, Tania Melina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: Dewey, Ricardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: Delgui, Laura Ruth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentina. Universidad Nacional de Cuyo; ArgentinaFil: Bustos, Diego Martin. Universidad Nacional de Cuyo; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; ArgentinaFil: Uhart, Marina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; Argentin

Rheumatoid arthritis and TGF β

La artritis reumatoidea (AR) es una enfermedad autoinmune caracterizada por la inflamación crónica de las articulaciones con su consiguiente deterioro estructural. Las diversas poblaciones de glóbulos blancos, incluyendo monocitos/macrófagos, células dendríticas, neutrófilos y linfocitos, contribuyen al daño estructural de las articulaciones. Existen evidencias que la citoquina pleiotrópica TGF-ß y sus receptores actúan como un potente regulador de los eventos inflamatorios, en el tejido sinovial de AR. De modo adicional, los niveles aumentados de TGF-ß1 encontrados en el microambiente sinovial de pacientes con AR, además de producir inflamación, parecen afectar el potencial regenerativo de las células madre mesenquimales presentes en el líquido sinovial. En la presente revisión queda en evidencia que a pesar de que son necesarios estudios adicionales, la modulación de TGF-ß y sus receptores en pacientes con AR, podría ofrecer una alternativa terapéutica para el tratamiento de esta enfermedad.Rheumatoid Arthritis (RA) is an autoimmune disease characterized by chronic inflammation of the joints with structural deterioration. Different subpopulations of white blood cells, including monocytes/ macrophages, dendritic cells, neutrophils and lymphocytes, directly contribute to the damage of the articulations. Evidences indicate that the pleiotropic cytokine TGF-ß and its receptors act as a potent regulator of inflammation in RA synovial tissue. In addition to the increased inflammation, high levels of TGF-ß1 in the RA synovial microenvironment, seem to affect the regenerative potential of Synovial Fluid Mesenchymal Stem Cells (SF-MSCs). Although further in depth studies must be performed, in this review, evidences are given that modulation of TGF-ß and receptors in RA patients could offer an alternative therapeutic strategy for the treatment of the disease.Fil: Dewey, Ricardo. Laboratorio de Terapia Genica y Celulas Madre, Instituto de Investigaciones Biotecnologicas-Instituto Teconogico de Chascomus; ArgentinaFil: Velazco Zamora, Jose Luis. Servicio de Reumatología, Instituto Medico CER, Quilmes; ArgentinaFil: Carrea, Alejandra. Laboratorio de Terapia Genica y Celulas Madre, Instituto de Investigaciones Biotecnologicas-Instituto Teconogico de Chascomus; ArgentinaFil: T. A. Rodríquez. Laboratorio de Terapia Genica y Celulas Madre, Instituto de Investigaciones Biotecnologicas-Instituto Teconogico de Chascomus; ArgentinaFil: Perone, Marcelo Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Velazco Zamora, Jorge. Servicio de Reumatologia, Instituto Medico CER, Quilmes; Argentin

Chimeric TβRII-SE/Fc overexpression by a lentiviral vector exerts strong antitumoral activity on colorectal cancer-derived cell lines in vitro and on xenografts

The TGF signaling pathway is a key regulator of cancer progression. In this work, we report for the first time the antitumor activity of TβRII-SE/Fc, a novel peptibody whose targeting domain is comprised of the soluble endogenous isoform of the human TGF-β type II receptor (TβRII-SE). Overexpression of TβRIISE/Fc reduces in vitro cell proliferation and migration while inducing cell cycle arrest and apoptosis in human colorectal cancer-derived cell lines. Moreover, TβRII-SE/Fc overexpression reduces tumorigenicity in BALB/c nude athymic mice. Our results revealed that TRII-SE/Fc-expressing tumors were significantly reduced in size or were even incapable of developing. We also demonstrated that the novel peptibody has the ability to inhibit the canonical TGF-β and BMP signaling pathways while identifying SMAD-dependent and independent proteins involved in tumor progression that are modulated by TβRII-SE/Fc. These findings provide insights into the underlying mechanism responsible for the antitumor activity of TβRII-SE/Fc. Although more studies are required to demonstrate the effectiveness and safety of the novel peptibody as a new therapeutic for the treatment of cancer, our initial in vitro and in vivo results in human colorectal tumor-derived cell lines are highly encouraging. Our results may serve as the foundation for further research and development of a novel biopharmaceutical for oncology.Fil: Romo, Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Rodríguez, Tania Melina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Yu, Guo. Shanghai Jiao Tong University; ChinaFil: Dewey, Ricardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Effect of TGF-b1 stimulation on the secretome of human adipose-derived mesenchymal stromal cells

Adipose tissue is an attractive source of mesenchymal stromal cells (MSCs) owing to the relative ease of obtaining large volumes with more MSC abundance compared with other sources. Increasing evidence supports the fact that trophic factors secreted by MSCs play a pivotal therapeutic role. Several strategies in regenerative medicine use MSCs, mainly exploiting their immunosuppressive effect and homing capacity to sites of damage. Transforming growth factor-b1 (TGF-b1) is a pleiotropic cytokine that, depending on the cell niche, can display either anti-inflammatory or proinflammatory effects. TGF-b1 expression increases in various tissues with damage, especially when accompanied by inflammation. Thus, we analyzed the effect of TGF-b1 on the secretion by adipose-derived mesenchymal stromal cells (ASCs) of a panel of 80 cytokines/chemokines using an antibody array. To avoid a possible effect of fetal bovine serum (FBS) on ASCs secretion, we performed our analysis by culturing cells in FBS-free conditions, only supplemented with 0.1% of bovine serum albumin. We report the cytokine profile secreted by ASCs. We also found that TGF-b1 exposure modulates 8 chemokines and 18 cytokines, including TGF-b1 and -b2, and other important cytokines involved in immunosuppression, allergic responses, and bone resorption.Fil: Rodríguez, Tania Melina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas - Instituto Tecnológico Chascomús. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas (sede Chascomús); Argentina. Universidad Nacional de San Martín; ArgentinaFil: Saldias. Alejandro. Hospital Italiano de Buenos Aires; ArgentinaFil: Irigo, Marcelo. Hospital Italiano de Buenos Aires; ArgentinaFil: Velasco Zamora, Jorge. Fundación Articular; ArgentinaFil: Perone, Marcelo Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Dewey, Ricardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas - Instituto Tecnológico Chascomús. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas (sede Chascomús); Argentina. Universidad Nacional de San Martín; Argentin

VPS32, a member of the ESCRT complex, modulates adherence to host cells in the parasite Trichomonas vaginalis by affecting biogenesis and cargo sorting of released extracellular vesicles

Trichomonas vaginalis is a common sexually transmitted extracellular parasite that adheres to epithelial cells in the human urogenital tract. Extracellular vesicles (EVs) have been described as important players in the pathogenesis of this parasite as they deliver proteins and RNA into host cells and modulate parasite adherence. EVs are heterogeneous membrane vesicles released from virtually all cell types that collectively represent a new dimension of intercellular communication. The Endosomal Sorting Complex Required for Transport (ESCRT) machinery contributes to several key mechanisms in which it reshapes membranes. Based on this, some components of the ESCRT have been implicated in EVs biogenesis in other cells. Here, we demonstrated that VPS32, a member of ESCRTIII complex, contribute to the biogenesis and cargo sorting of extracellular vesicles in the parasite T. vaginalis. Moreover, we observe that parasites overexpressing VPS32 have a striking increase in adherence to host cells compared to control parasites; demonstrating a key role for this protein in mediating host: parasite interactions. These results provide valuable information on the molecular mechanisms involved in extracellular vesicles biogenesis, cargo-sorting, and parasite pathogenesis.Fil: Salas, Nehuen. Universidad Nacional de San Martin. Instituto Tecnologico de Chascomus. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - la Plata. Instituto Tecnologico de Chascomus.; ArgentinaFil: Cóceres, Verónica Mabel. Universidad Nacional de San Martin. Instituto Tecnologico de Chascomus. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - la Plata. Instituto Tecnologico de Chascomus.; ArgentinaFil: Dos Santos Melo, Tuanne. Departamento de Microbiologia, Instituto Aggeu Magalhãe; BrasilFil: Pereira Neves, Antonio. Instituto Aggeu Magalhães; BrasilFil: Maguire, Vanina Giselle. Universidad Nacional de San Martin. Instituto Tecnologico de Chascomus. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - la Plata. Instituto Tecnologico de Chascomus.; ArgentinaFil: Rodríguez, Tania Melina. Universidad Nacional de San Martin. Instituto Tecnologico de Chascomus. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - la Plata. Instituto Tecnologico de Chascomus.; ArgentinaFil: Sabatke, Bruna. Laboratorio de Biologia Molecular E Sistémica de Tripan; BrasilFil: Ramirez, Marcel I.. Laboratorio de Biologia Molecular E Sistémica de Tripan; BrasilFil: Sha, Jihui. University of California; Estados UnidosFil: Wohlschlegel, James A.. University of California; Estados UnidosFil: de Miguel, Natalia. Universidad Nacional de San Martin. Instituto Tecnologico de Chascomus. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - la Plata. Instituto Tecnologico de Chascomus.; Argentin

A Novel Splice Variant of Human TGF-β Type II Receptor Encodes a Soluble Protein and Its Fc-Tagged Version Prevents Liver Fibrosis in vivo

We describe, for the first time, a new splice variant of the human TGF-β type II receptor (TβRII). The new transcript lacks 149 nucleotides, resulting in a frameshift and the emergence of an early stop codon, rendering a truncated mature protein of 57 amino acids. The predicted protein, lacking the transmembrane domain and with a distinctive 13 amino acid stretch at its C-terminus, was named TβRII-Soluble Endogenous (TβRII-SE). Binding predictions indicate that the novel 13 amino acid stretch interacts with all three TGF-β cognate ligands and generates a more extensive protein-protein interface than TβRII. TβRII-SE and human IgG1 Fc-domain, were fused in frame in a lentiviral vector (Lv) for further characterization. With this vector, we transduced 293T cells and purified TβRII-SE/Fc by A/G protein chromatography from conditioned medium. Immunoblotting revealed homogeneous bands of approximately 37 kDa (reduced) and 75 kDa (non-reduced), indicating that TβRII-SE/Fc is secreted as a disulphide-linked homodimer. Moreover, high affinity binding of TβRII-SE to the three TGF-β isoforms was confirmed by Surface Plasmon Resonance (SPR) analysis. Also, intrahepatic delivery of Lv.TβRII-SE/Fc in a carbon tetrachloride-induced liver fibrosis model revealed amelioration of liver injury and fibrosis. Our results indicate that TβRII-SE is a novel member of the TGF-β signaling pathway with distinctive characteristics. This novel protein offers an alternative for the prevention and treatment of pathologies caused by the overproduction of TGF-β ligands.Fil: Bertolio, Marcela Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: la Colla, Anabela Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ingeniería. Departamento de Ingeniería Química. Grupo de Ingeniería Bioquímica; ArgentinaFil: Carrea, Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: Romo, Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: Canziani, Gabriela Alicia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); Argentina. Drexel University; Estados UnidosFil: Echarte, Stella Maris. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ingeniería. Departamento de Ingeniería Química. Grupo de Ingeniería Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; ArgentinaFil: Campisano, Sabrina Edith. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ingeniería. Departamento de Ingeniería Química. Grupo de Ingeniería Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; ArgentinaFil: Barletta Roldan, Patricio German. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Monzon, Alexander. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentina. Università di Padova; Italia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rodríguez, Tania Melina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); ArgentinaFil: Chisari, Andrea Nancy. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ingeniería. Departamento de Ingeniería Química. Grupo de Ingeniería Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; ArgentinaFil: Dewey, Ricardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); Argentin