Effects of lowered temperatures and media on short-term preservation of zebu (Bos indicus) preantral ovarian follicles

The maintenance of follicle quality during the transportation of ovaries is essential for the successful cryopreservation and in vitro development of preantral follicles. The objective of this study was to evaluate the effect of cooling ovarian tissue on the conservation of zebu cow preantral follicles. Ovarian pieces were immersed in saline or coconut water (CW) solutions and maintained at 4 or 20 °C for 6, 12, or 18 h. Preantral follicles were evaluated by histology and transmission electron microscopy. Storage of ovarian pieces at 20 °C for 12 or 18 h significantly reduced the percentage of morphologically normal follicles compared to controls. In contrast, conservation at 4 °C for up to 18 h and at 20 °C for up to 6 h kept the percentage of normal follicles similar to controls. However, the type of solution that the ovaries were immersed in had little effect on the results. Decreased cellular metabolism probably accounted for better preservation of preantral follicles at 4 °C. In conclusion, zebu cow ovaries were successfully stored at 4 °C for up to 18 h with no morphological damage to preantral follicles. However, at 20 °C, ovaries could only be stored for 6 h

Effects of freeze-drying on cytology, ultrastructure, DNA fragmentation, and fertilizing ability of bovine sperm

Freeze-drying sperm is an alternative to cryopreservation. Although sperm from various species has been freeze-dried, there are few reports for bovine sperm. The primary objective of this study was to evaluate the protective effect of various freeze-drying media on the structural and functional components of bovine sperm. The media tested were composed of TCM 199 with Hanks salts supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) and TCM 199 with Hanks salts supplemented with 10% FCS and 0.2 M trehalose and EGTA solution. The efficiency of each medium on the preservation of freeze-dried sperm structures was evaluated with conventional and electron microscopy, DNA integrity was analyzed by a TUNEL assay, and fertilizing ability of lyophilized sperm was determined with ICSI. Although the plasma membrane was damaged in all media tested, mitochondria were similarly preserved in all freeze-drying treatments. The acrosome was best preserved in the media that contained trehalose (other treatments also conserved this structure). In contrast, media containing EGTA or trehalose most effectively preserved the nuclei in freeze-dried sperm, with only 2 and 5%, respectively, of cells with fragmented DNA. Furthermore, sperm conserved with these media also had higher (P < 0.05) rates of sperm head decondensation (32.5 and 27.5%), pronucleus formation (37.5 and 45.0%) and blastocyst formation (19.4 and 18.3%) than medium supplemented with FCS (15.0, 20.0 and 10.2%, respectively). In conclusion, media with EGTA and trehalose adequately protected bovine sperm during freeze-drying by preserving the viability of their nuclei

Effect of different cryoprotectants on the structural preservation of follicles in frozen zebu bovine (Bos indicus) ovarian tissue

Cryopreservation of ovarian tissue is a new and promising technique for germ-line storage. The objective of this study was to evaluate the effect of four cryoprotectants (at two concentrations each) on the preservation of zebu bovine preantral follicles after ovarian cryostorage. Strips of ovarian cortex were cryopreserved using glycerol (GLY; 10 or 20%), ethylene glycol (EG), propanediol (PROH) or dimethylsulphoxide (DMSO; 1.5 or 3 M). In addition, a toxicity test was performed for each cryoprotectant by exposing the ovarian tissue to them without freezing. Tissues were analyzed by histology and transmission electron microscopy. Ovarian tissue frozen in either concentration of DMSO or PROH or in 10% GLY retained a higher percentage of morphologically normal follicles (73–88%) than tissue frozen in 20% GLY or in either concentration of EG (16–52%). In the toxicity test, exposure of tissues to DMSO, PROH or GLY resulted in higher percentages of normal follicles (80–97%) than exposure to EG (49%). Electron microscopy revealed damage to the ultrastructure of follicles frozen in 10% GLY, while follicles cryopreserved in DMSO and PROH at either concentration exhibited normal ultrastructure. In conclusion, DMSO and PROH were the most effective cryoprotectants for zebu ovarian tissue, preserving the structural integrity of somatic and reproductive cells within the ovary

The embryo splitting as an alternative to improve gestation indices from embryo transfer in horses

A transferência de embriões (TE) já vem sendo utilizada em eqüinos há pelo menos duas décadas, sempre a partir de ovulação simples. Para aumentar a eficiência reprodutiva, este estudo avaliou a bipartição embrionária como uma alternativa para melhorar os índices de gestação na transferência de embriões em eqüinos. Foram utilizadas 21 éguas de diferentes padrões raciais, com idade variando entre 4 e 15 anos de idade, pesando entre 270 a 480kg. A partir da identificação do cio (rufiação), os animais foram monitorados através de exames ultra-sonográficos trans-retais até o momento da ovulação, sendo as receptoras, uma vez ao dia e as doadoras três vezes ao dia. As receptoras utilizadas ovularam um dia antes ou até três dias depois das doadoras. As doadoras foram coletadas entre 144 e 156 horas após a ovulação (D0). Foram recuperados 20 embriões (mórulas) em 29 coletas (68,96%), sendo que 10 embriões foram transferidos inteiros (T1), e 10 embriões foram bipartidos (T2), originando 20 hemi-embriões e transferidos para 20 receptoras. Não houve diferença na taxa de prenhez entre os grupos, T1, 70% (7/10), e T2, 50% (10/20) (P>0,05). Em relação ao número inicial de embriões em cada grupo (10), houve diferença na taxa de prenhez entre os grupos, T1, 70% (7/10) e T2, 100% (10/10) (P0.05). Looking at the original number of embryos, there was a significant difference in pregnancy rate (70% vs 100% for T1 and T2 respectively P<0.05). These results show the possibility of increasing the number of gestations using embryo splitting and transfer in horses per embryo collected. This technique may improve pregnancy indices for ET in horses

Poliploidia em Bovinos da Raça Simental (Bos Taurus Taurus) e Nelore (Bos Taurus Indicus)

Resumo: fenômeno da poliploidia, em bovinos, encontra-se pouco esclarescido, uma vez que os trabalhos na literatura científica que discutem a poliploidia serem escassos e pouco específicos, referentes aos possíveis fatores que levaram a ocorrência de células poliplóides. Palavras-chave: Cromossomos. Citogenética. Biotecnologia

Zebu (Bos indicus) ovarian preantral follicles : morphological characterization and development of an efficient isolation method

Preantral follicles are a major source of oocytes, and their utilization as an important tool to store large number of female gametes for future use in reproductive programs has been investigated. The increasing importance of studies in this subject, together with the important role of Zebu cattle in the economy of tropical and subtropical countries as well as their well-known differences from European cattle, led to this research. The present study aims to determine the best size interval for sectioning ovarian tissue to isolate preantral follicles from Zebu cows using a tissue chopper and to evaluate the follicular quality after isolation. Furthermore, it aims to provide information about the Zebu cow preantral follicle population and use this data (as a control) to evaluate the effectiveness of the tested isolation method. Testing eight different tissue sectioning size intervals, it was possible to conclude that the 125-pm-section interval is shown to be better than the intervals of 25, 50, 175 and 200 pm to isolate preantral follicles from Zebu cow ovaries. The 125- pm interval allowed the recovery of 26,050±1611 (meaniS.E.M.) preantral follicles per one-half ovary, while the number of preantral follicles in situ estimated by evaluation of histological sections was 35,28812342 per one-half ovary. Thus, the mean (iS.E.M.) recovery rate (=[number of preantral follicles isolated/number of preantral follicles in situ in the same ovary] x 100) was 74.3±4.3%. The morphometrical analysis showed that Bos indicus preantral follicles are similar to B. taurus preantral follicles based on previous reports. In conclusion, this study showed that a simple, mechanical method can be used effectively to isolate a large number of intact preantral follicles from Zebu cow ovaries, with a high recovery rate

INFLUÊNCIA DA ALTA INGESTÃO DE MATÉRIA SECA NA RESPOSTA SUPEROVULATÓRIA EM VACAS MESTIÇAS

Objetivou-se avaliar o efeito da alta ingestão de matéria seca (AIMS) sobre a resposta superovulatória de vacas mestiças Nelore x Simental. Quatorze vacas não lactantes, com escore de condição corporal (ECC) igual a 4,0 (escala de 1 a 5), foram divididas aleatoriamente em dois grupos (Manutenção=M ou alta ingestão de matéria seca=AIMS). De sete dias antes do início da superovulação (SOV) até o final das aplicações de FSH, as vacas do grupo AIMS receberam dieta com 180% da manutenção. O grupo M recebeu dieta de manutenção. Sete dias após a IA, os embriões foram colhidos e avaliados. Quarenta dias após, inverteram-se os tratamentos e realizou-se uma nova SOV. Para comparação entre os grupos, utilizou-se o teste t pareado. Os resultados estão apresentados em média ± erro-padrão. O número de folículos recrutados detectados por ultrassonografia (19,6±1,8 e 16,4±2,0) e ovulados (15,0±1,6 e 13,0±1,6) não diferiu entre os grupos M e AIMS, respectivamente (P>0,10). Entretanto, os números de estruturas totais (14,1±2,3 e 9,5±1,5) e embriões viáveis (10,1±2,1 e 6,7±1,5) colhidos foram maiores no grupo M (

INFLUÊNCIA DE SISTEMAS DE REFRIGERAÇÃO SOBRE A QUALIDADE DO SÊMEN OVINO CRIOPRESERVADO EM PALHETAS

Avaliaram-se diferentes sistemas de refrigeração do sêmen ovino, através da aferição e comparação das curvas obtidas e seus efeitos sobre a qualidade do sêmen criopreservado. Ao final da refrigeração, os parâmetros espermáticos motilidade, vigor, defeitos morfológicos, viabilidade e estado acrossomal foram analisados. Para a avaliação pós-descongelação mais dois testes foram acrescentados: avaliação da integridade de membrana plasmática (IMP) e teste de exaustão com quatro horas de incubação a +37ºC.  A refrigeração foi realizada em refrigerador doméstico e num balcão horizontal. Para controlar a queda de temperatura desses equipamentos, colocaram-se as palhetas entre bolsas plásticas contendo água aquecida a +32ºC, constituindo quatro sistemas: RS (refrigerador sem bolsa), RC (refrigerador com bolsa), BS (balcão sem bolsa) e BC (balcão com bolsa), os quais resultaram em quatro taxas de refrigeração: -1,4ºC/min, -0,4ºC/min, -2,9ºC/min e -0,45ºC/min, para RS, RC, BS e BC, respectivamente. Após a refrigeração, observou-se diferença na motilidade espermática (P<0,05), em que BS apresentou menor média. O sistema BS obteve a menor média de vivos íntegros e também a maior de mortos íntegros ao final da refrigeração, diferindo de RC e BC. Quanto aos defeitos morfológicos pós-refrigeração, BS apresentou maior média (P<0,05), ao passo que RC e BC apresentaram as menores médias. Não foram observadas diferenças significativas entre os tratamentos na descongelação e ao final do teste de exaustão. Concluiu-se que as diferentes taxas de refrigeração afetaram o sêmen no final da fase de refrigeração, mas não após a descongelação. PALAVRAS-CHAVES: Congelação, ovino, protocolos-refrigeração, sêmen

Ovarian function of Nelore heifers fed a diet supplemented with rumen-protected fat

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da suplementação alimentar com gordura protegida ruminal sobre as estruturas ovarianas e sobre a concentração sérica de progesterona, em novilhas Nelore mantidas em pasto. Quarenta novilhas foram divididas em dois grupos: um suplementado com gordura protegida Megalac-E (G); e outro sem suplementação de gordura (C). O grupos foram avaliados em delineamento "crossover". Utilizaram-se dietas isoenergéticas e isoproteicas. Após 15 dias de suplementação, os animais foram submetidos a um protocolo hormonal, para avaliação da influência da suplementação com gordura no metabolismo da progesterona. Para isto, em um dia aleatório do ciclo (D0), inseriu-se um implante intravaginal de liberação de progesterona (CIDR), e aplicou-se prostaglandina F2á (PGF2á, i.m.). No D7, o implante foi retirado, e outra aplicação de PGF2á foi realizada. No D18, foi feita uma nova aplicação de PGF2á e, então, foram observados diariamente os exames ultrassonográficos ovarianos e a ocorrência de estro. Para o ensaio com progesterona, colheu-se sangue 4 dias após a inserção do implante e, novamente, 7 e 14 dias após a ovulação. A concentração de progesterona sérica no D4 foi maior no grupo G. Não houve diferença nas concentrações séricas de progesterona 7 e 14 dias após a ovulação, nem no diâmetro do folículo ovulatório, nem no volume luteal. A suplementação com Megalac-E altera o metabolismo de progesterona, mas não altera a função ovariana em novilhas zebuínas em pasto.The objective of this work was to evaluate the effect of rumen-protected fat supplementation on ovarian structures and on serum progesterone concentration in Nelore heifers kept in pasture. Forty heifers were divided into two groups: one supplemented with rumen-protected fat Megalac-E (F); and another without fat supplement (C). The groups were evaluated in a crossover design. The diets were isocaloric and isoproteic. After 15 days of supplementation, the animals were submitted to a hormonal protocol to evaluate the influence of fat supplementation on progesterone metabolism. For this, on a random day of the cycle (D0), the heifers received an intravaginal progesterone-releasing device (CIDR) and an injection of prostaglandin F2á (PGF2á, im). On D7, CIDR was removed and another injection of PGF2á was performed. On D18, a new treatment with PGF2á was done and, then, daily observations of estrus and ovarian ultrasound exams were carried out. For progesterone assay, blood samples were collected 4 days after CIDR insertion, and 7 and 14 days following ovulation. Serum progesterone concentration on D4 was higher for Group F. There was no difference between groups for serum progesterone concentration at 7 or 14 days following ovulation, neither in the ovulatory follicle, nor in the corpus luteum volume. Supplementation with Megalac-E alters progesterone metabolism, but does not affect ovarian function in zebu heifers kept in pasture