Involvement of Bradykinin Receptor 2 in Nerve Growth Factor Neuroprotective Activity

Neurotrophin nerve growth factor (NGF) has been demonstrated to upregulate the gene expression of bradykinin receptor 2 (B2R) on sensory neurons, thus facilitating nociceptive signals. The aim of the present study is to investigate the involvement of B2R in the NGF mechanism of action in nonsensory neurons in vitro by using rat mixed cortical primary cultures (CNs) and mouse hippocampal slices, and in vivo in Alzheimer's disease (AD) transgenic mice (5xFAD) chronically treated with NGF. A significant NGF-mediated upregulation of B2R was demonstrated by microarray, Western blot, and immunofluorescence analysis in CNs, indicating microglial cells as the target of this modulation. The B2R involvement in the NGF mechanism of action was also demonstrated by using a selective B2R antagonist which was able to reverse the neuroprotective effect of NGF in CNs, as revealed by viability assay, and the NGF-induced long-term potentiation (LTP) in hippocampal slices. To confirm in vitro observations, B2R upregulation was observed in 5xFAD mouse brain following chronic intranasal NGF treatment. This study demonstrates for the first time that B2R is a key element in the neuroprotective activity and synaptic plasticity mediated by NGF in brain cells

Toxidade do herbicida 2,4-D sobre germinação de sementes de Beta vulgaris L. (beterraba)

The herbicide 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid) stands out as one of the most sold active ingredients (AI) in Brazil due to its low price. 2,4-D is part of the class of herbicides that play a key role in controlling weeds in agriculture worldwide, it has toxicological classification I and is considered extremely toxic. Beetroot (Beta vulgaris) is a tuberous root originating in the Middle East that has been spreading throughout the world, from the Americas to Europe and Asia to Oceania. It is a functional ingredient in the development of several meals in Brazilian cuisine, and also represents a highly renewable and low-cost source of nutrients. The present work evaluated the effect of the toxicity of the 2,4-D herbicide on the germination of B. vulgaris seeds. The experiment followed a completely randomized design, using a control and three concentrations of the 2,4-D herbicide (0.04; 0.08 and 0.12 mg mL-1). Germinative paper was used as substrate, placed in a germinator box. The count of germinated seeds was performed at 7 and 14 days. Beet germination was compromised, with only the control presenting an effective germination rate. In the germination boxes containing doses-responses of 2,4-D the seeds showed atrophies and fungi, with low development below 10%, only the control showed healthy germination with 65% of germination rate. 2,4 D was shown to be toxic to Beta vulgaris seeds in the usual concentrations in this study.El herbicida 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) se destaca como uno de los ingredientes activos (IA) más vendidos en Brasil por bajo precio. El 2,4-D forma parte de la clase de herbicidas que tiene un papel fundamental en el control de malas hierbas en la agricultura en el mundo, posee clasificación toxicológica I siendo considerado extremadamente tóxico. La remolacha (Beta vulgaris) es una raíz tuberosa originaria de Oriente Medio que se ha extendido por todo el mundo, desde América hasta Europa y Asia hasta Oceanía. Es un ingrediente funcional en el desarrollo de varias comidas en la cocina incluyendo brasiliera, y también representa una fuente de nutrientes altamente renovable y de bajo costo. El presente trabajo evaluó el efecto de la toxicidad del herbicida 2,4-D en la germinación de semillas de B. vulgaris. El experimento siguió delineamiento enteramente casualizado, utilizando un testigo y tres concentraciones del herbicida 2,4-D (0,04; 0,08 y 0,12 mg mL-1). Fue utilizado como sustrato papel germinativo, asignado en caja germinadora. La cuenta de las semillas germinadas, fue realizada a los 7 y 14 días. La germinación de la remolacha fue comprometida, habiendo solo el testigo presentado efectiva tasa de germinación. En las cajas de germinación contend dosis-respuestas de 2,4-D las semillas presentaron atrofias y hongos, con bajo desarrollo inferior al 10%, solo el testigo presentó germinación saludable con 65% de tasa de germinación. El 2,4 D ha demostrado en las concentraciones usuales en este estudio ser tóxico para las semillas de Beta vulgaris.O herbicida 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) destaca-se como um dos ingredientes ativos (IA) mais vendidos no Brasil pelo baixo preço. O 2,4-D faz parte da classe dos herbicidas que tem um papel fundamental no controle de ervas daninhas na agricultura no mundo, possui classificação toxicológica I sendo considerado extremamente tóxico. A beterraba (Beta vulgaris) é uma raiz tuberosa originária do Oriente Médio que vem se espalhando por todo o mundo, das Américas à Europa e Ásia a Oceania. É um ingrediente funcional no desenvolvimento de várias refeições na culinária inclusive brasiliera, e também representa uma fonte de nutrientes altamente renovável e de baixo custo. O presente trabalho avaliou o efeito da toxidade do herbicida 2,4-D na germinação de sementes de B. vulgaris. O experimento seguiu delineamento inteiramente casualisado, utilizando uma testemunha e três concentrações do herbicida 2,4-D (0,04; 0,08 e 0,12 mg mL-1). Foi utilizado como substrato papel germinativo, alocado em caixa germinadora. A contagem das sementes germinadas, foi realizada aos 7 e 14 dias. A germinação da beterraba foi comprometida, tendo apenas a testemunha apresentado efetiva taxa de germinação. Nas caixas de germinação contend doses-respostas de 2,4-D as sementes apresentaram atrofias e fungos, com baixo desenvolvimento inferior a 10%, apenas a testemunha apresentou germinação saudável com 65% de taxa de germinação. O 2,4 D demonstrou nas concentrações usuais nesse estudo ser tóxico para as sementes de Beta vulgaris

Toxidade do herbicida 2,4-D sobre germinação de sementes de Lycopersicon esculentum L.

Dichlorophenoxyacetic acid (2.4 - D (C8H6Cl2O3) is a herbicide widely used in the national territory. The World Health Organization (WHO) classifies 2.4-D as low toxic, harmful if ingested or inhaled. Studying the effects of its use in seeds of fruits that are on the table of the Brazilian, contributes in the scope of research and especially agriculture. Tomato seeds (Lycopersicon esculentum) originates from South America, and is grown almost all over the world, has high commercial value and the fruit has gastronomic importance and health benefits generating high consumption. The present work analyzed the effect of herbicide 2,4-D toxicity on the germination of L. esculentum seeds in 7 and 14 days. The experiment followed a completely randomized design, using one control and three concentrations of the herbicide 2.4-D (0.04, 0.08 and 0.12 mg/mL) with four replications. It was used as substrate germitest paper, allocated in gerbox and deposited in germination chamber at the temperature of 25 and 14 days. Data normality (Shapiro-Wilki) was used to choose the appropriate statistical test and better data presentation. The data did not show normality with a p-value lower than 0.05, the Kruskal-Wallis and Dunn posteriori tests were performed. Tomato seeds were completely intolerant to the herbicide. Even at low concentrations, there was no germination, only of the witness. The 2.4 D was fatal for the germination of tomato seeds.El ácido diclorofenóxiacético (2,4 - D (C8H6Cl2O3) es un herbicida utilizado a gran escala en el territorio nacional. La Organización Mundial de la Salud (OMS) clasifica el 2,4-D como poco tóxico, nocivo si se ingiere o se inhala. Estudiar los efectos de su uso en semillas de frutas que están en la mesa del brasileño, contribuye en el ámbito de la investigación y especialmente de la agricultura. Las semillas de tomate (Lycopersicon esculentum) es originario de América del Sur, y se cultiva en casi todo el mundo, tiene alto valor comercial y  importancia gastronómica y beneficios a la salud generando alto consumo. El presente trabajo analizó el efecto de la toxicidad del herbicida 2,4-D en la germinación de semillas de L. esculentum en 7 y 14 días. El experimento siguió delineamiento enteramente casualizado, utilizando un testigo y tres concentraciones del herbicida 2,4-D (0,04; 0,08 y 0,12 mg/ml) con cuatro repeticiones. Fue utilizado como sustrato papel germitest, asignado en caja gerbox y depositadas en cámara de germinación a la temperatura de 25°C, la cuenta de las semillas germinadas fue realizada a los 7 y 14 días. Se ha hecho la normalidad de los datos (Shapiro-Wilki) para la decisión de la prueba estadística adecuada y una mejor presentación de los datos. Los datos no presentaron normalidad con valor de p menor que 0.05, se hizo la prueba de Kruskal-Wallis y posteriori de Dunn. Las semillas de tomate se mostraron totalmente intolerantes al herbicida. Incluso en bajas concentraciones, no hubo germinación, solo del testigo. El 2,4 D se presentó fatal la germinación de semillas de tomate.O ácido diclorofenóxiacético (2,4 - D (C8H6Cl2O3) é um herbicida utilizado em larga escala no território nacional. A Organização Mundial de Saúde (OMS) classifica o 2,4-D como pouco tóxico, nocivo se ingerido ou inalado. Estudar os efeitos do seu uso em sementes de frutos que estão na mesa do brasileiro, contribui no âmbito da pesquisa e especialmente da agricultura. As sementes de tomate (Lycopersicon esculentum) é originário da América do Sul, e é cultivado em quase todo o mundo, tem alto valor comercial e possui importância gastronômica e benefícios a saúde gerando alto consumo. O presente trabalho analisou o efeito da toxidade do herbicida 2,4-D na germinação de sementes de L. esculentum em 7 e 14 dias. O experimento seguiu delineamento inteiramente casualisado, utilizando uma testemunha e três concentrações do herbicida 2,4-D (0,04; 0,08 e 0,12 mg/mL) com quatro repetições. Foi utilizado como substrato papel germitest, alocado em caixa gerbox e depositadas em câmara de germinação na temperatura de 25°C, a contagem das sementes germinadas foi realizada aos 7 e 14 dias. Foi feita a normalidade dos dados(Shapiro-Wilki) para a escolha do teste estatísticos adequado e melhor apresentação dos dados. Os dados não apresentaram normalidade com valor de p menor que 0.05, foi feito o teste de Kruskal-Wallis e posteriori de Dunn. As sementes de tomate mostraram-se totalmente intolerante ao herbicida. Mesmo em baixas concentrações, não houve germinação, apenas da testemunha. O 2,4 D apresentou-se fatal a germinação de sementes de tomate

Avaliação de estresse oxidativo no plasma de bovinos leiteiros com mastite

A mastite bovina está associada a uma resposta antibacteriana endógena mediada pela produção de espécies reativas. Contudo, o excesso de reações oxidativas pode desencadear apoptose celular agravando o quadro clínico dos animais. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a resposta redox no plasma de vacas leiteiras com e sem mastite submetidas ou não ao tratamento com antibioticoterapia. As vacas foram divididas em Grupo Controle (G1), vacas sem mastite; grupo G2, vacas com mastite sem tratamento com antimicrobianos; grupo G3, vacas com mastite tratadas com antibiótico. As amostras sanguíneas foram coletadas após a primeira ordenha da manhã. Foram analisados a existência de lipoperoxidação (LPO) e os níveis de proteínas carboniladas (PCs), de glutationa reduzida (GSH), de ácido ascórbico (ASA) e de ácido úrico (AU). Os animais do G3 apresentaram aumento na LPO e das PCs. Em todos os grupos, os níveis de GSH permaneceram inalterados. Os valores plasmáticos de ASA e de AU mostraram-se diminuídos nos animais dos grupos G2 e G3. Os resultados demonstraram que o tratamento com antimicrobianos parece agravar os danos oxidativos presentes na mastite bovina, reforçando a importância da busca por alternativas terapêuticas a fim de minimizar esse efeito

The TLQP-21 Peptide Activates the G-Protein-Coupled Receptor C3aR1 via a Folding-upon-Binding Mechanism

TLQP-21, a VGF-encoded peptide is emerging as a novel target for obesity-associated disorders. TLQP-21 is found in the sympathetic nerve terminals in the adipose tissue and targets the G-protein-coupled-receptor (GPCR) Complement-3a-Receptor1 (C3aR1). So far, the mechanisms of TLQP-21-induced receptor activation remained unexplored. Here, we report that TLQP-21 is intrinsically disordered and undergoes a disorder-to-order transition, adopting an α-helical conformation, upon targeting cells expressing the C3aR1. We determined that the hot spots for TLQP-21 are located at the C-terminus, with mutations in the last four amino acids progressively reducing the bioactivity and, a single site mutation (R21A) or C-terminal amidation abolishing its function completely. Interestingly, the human TLQP-21 sequence carrying a S20A substitution activates the human C3aR1 receptor with lower potency compared to the rodent sequence. These studies reveal the mechanism of action of TLQP-21 and provide molecular templates for designing agonists and antagonists to modulate C3aR1 functions

Molecular cloning and characterization of the human VGF promoter region

The VGF gene encodes a secretory protein that is expressed in a cell type-restricted pattern in neuroendocrine cells and is up-regulated by nerve growth factor (NGF) in the rat pheochromocytoma PC12 cell line. Here we report the isolation and characterization of the 5'-terminal region of the human VGF gene. In addition to a TATA box and a CCAAT box located at canonical distances from the transcription start site, the human VGF promoter contains several consensus sequences for different transcription factors, including a cyclic AMP response element and an AP-I element, several GC boxes, and sequences homologous to other neuronal promoters. Transient transfection analysis demonstrates that 2.3 kb of the 5'-flanking sequence acts as a tissue-specific promoter, efficiently used only by neuronal cells that express endogenous VGF. Deletion analysis reveals that a positive regulatory region is located between nucleotides -458 to -204. Negative cis-acting elements that repress promoter activity in cell lines that do not normally express VGF are located between nucleotides -2,305 and -573 and between -458 and -204. The 5'-flanking region of the human VGF gene confers responsiveness to NGF, cyclic AMP, and phorbol ester treatment