Extração e caracterização de uma substância antimicrobiana produzida por bacillus amyloliquefaciens

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias.Extraiu-se uma substância antimicrobiana de uma cultura 18-24 h de Bacillus amyloliquefaciens em Caldo Triptona de Soja suplementado com Extrato de Levedura a 0,6% (TSB-YE - OXOID) por precipitação com 20% de saturação de sulfato de amônio, ressuspensão em tampão fosfato pH 7,2, diálise em membrana 3,5kD (Spectra/Por) e esterilização por filtração (membrana 0,22mm - Millipore). Esta substância foi caracterizada segundo sua sensibilidade a temperatura (50, 75 e 100°C) e pH (2,0 a 9,0). Para determinação de sua natureza química empregaram-se as enzimas (Sigma) protease de S. griseus (P6911), protease de A. saitoi (P2143), a-quimotripsina (C4129) e pepsina (P6887) a 50mg/mL e a a-amilase Termamyl 120 L (Novo Nordisk) a 1% v/v. Para verificação da manutenção da atividade após tais ensaios, o extrato foi aplicado em poços preparados em placas de Ágar Triptona de Soja suplementado com Extrato de Levedura a 0,6% (TSA-YE - OXOID) pré-semeadas com 0,1 mL de uma cultura 105 UFC/mL de Listeria monocytogenes. Determinou-se sua concentração mínima inibitória (CMI) sobre uma cultura 104 UFC/mL de L. monocytogenes e seu peso molecular por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Como resultado dos testes de caracterização, a substância apresentou-se estável a 50°C, perdendo sua atividade gradualmente a 75°C e rapidamente a 100°C. Também foi estável em valores de pH de 2,0 a 9,0. Perdeu parcialmente sua atividade quando tratada com as enzimas protease de S.griseus, protease de A. saitoi e a-amilase, indicando uma estrutura glicoproteica. A CMI foi 25% v/v e a substância agiu de forma bacteriostática. A eletroforese indicou um peso molecular inferior a 6.500 Daltons

Insights into In Vivo Activities of Lantibiotics from Gallidermin and Epidermin Mode-of-Action Studies

The activity of lanthionine-containing peptide antibiotics (lantibiotics) is based on different killing mechanisms which may be combined in one molecule. The prototype lantibiotic nisin inhibits peptidoglycan synthesis and forms pores through specific interaction with the cell wall precursor lipid II. Gallidermin and epidermin possess the same putative lipid II binding motif as nisin; however, both peptides are considerably shorter (22 amino acids, compared to 34 in nisin). We demonstrate that in model membranes, lipid II-mediated pore formation by gallidermin depends on membrane thickness. With intact cells, pore formation was less pronounced than for nisin and occurred only in some strains. In Lactococcus lactis subsp. cremoris HP, gallidermin was not able to release K(+), and a mutant peptide, [A12L]gallidermin, in which the ability to form pores was disrupted, was as potent as wild-type gallidermin, indicating that pore formation does not contribute to killing. In contrast, nisin rapidly formed pores in the L. lactis strain; however, it was approximately 10-fold less effective in killing. The superior activity of gallidermin in a cell wall biosynthesis assay may help to explain this high potency. Generally, it appears that the multiple activities of lantibiotics combine differently for individual target strains

<b>BACTERIOCINAS: MECANISMO DE AÇÃO E USO NA CONSERVAÇÃO DE ALIMENTOS</b>

<p align="justify">Alguns microrganismos possuem a capacidade de produzir substâncias que podem influenciar no desenvolvimento de outros microrganismos. Desde os anos 50 é relatada a habilidade de várias espécies de bactérias do gênero Bacillus de produzir substâncias com atividade antimicrobiana, dentre essas são relatadas a subtilisina, as proteases e as termolisinas. Em se tratando de antimicrobianos a maior ênfase é dada as bacteriocinas. Essas são definidas como peptídios antimicrobianos que destroem ou inibem o crescimento de outras bactérias taxonomicamente relacionadas com a cepa produtora. Muitas bactérias ácido-láticas produzem uma grande diversidade de bacteriocinas, sendo a nisina a única bacteriocina reconhecida pelo FDA (Food and Drug Administration) e usada como conservador alimentar. Muitas bacteriocinas têm sido caracterizadas bioquimicamente e geneticamente. Embora sejam conhecidas, a função estrutural, a biossíntese e modo de ação de algumas bacteriocinas, muitos aspectos desses compostos ainda permanecem desconhecidos. Esse artigo descreve uma revisão sobre síntese, estrutura e mecanismo de ação de bacteriocinas bem como suas aplicações em alimentos. Alguns dados de toxicidade também são relatados. PALAVRAS-CHAVE: Antimicrobianos; bacteriocinas; conservação de alimentos.</p&gt

Most relevant strains used in this study.

<p>Most relevant strains used in this study.</p