Challenges in Clinico-Genetic Correlations in Parkinson’s disease (PD): The Role of Copy Number Variants (CNV)

Parkinson’s disease (PD) represents the second most common neurodegenerative disease and remains incurable. Mutations in multiple genes have been linked to monogenic PD (gPD); these monogenic forms, however, represent a small number of cases while in most instances PD appears as idiopathic (iPD). These findings raise the question of whether genetic and idiopathic parkinsonisms constitute the same disease. Nevertheless, monogenic-PD phenotypes and iPD both fulfill MDS criteria for PD, and show evidence of alpha-synuclein aggregates in both conditions. Distinct genetic loci in rare Mendelian forms have been identified as causal mutations, others as possible disease-causing genes, and genome-wide association studies have reported several risk loci, many of them located in the genes associated with the dominant mutations. Not only single-nucleotide polymorphisms (SNPs), but other kinds of DNA molecular defects as well have been spotted as significant disease-causing mutations, including large chromosomal structural rearrangements and copy number variations (CNVs). As their size varies, and detection methodologies have different sensitivity and resolution, CNVs pose a special challenge in genetic studies, and there currently is a debate on the pathogenetic or susceptibility impact of specific CNVs on PD. In this review, through multiple instances of experimental evidence, we analyze the impact on histopathology of the different mutational mechanisms involved in the genesis and etiology of PD. We believe that increasing our knowledge about the changes and implications at tissue level produced by each of those mechanisms will allow to develop much more suitable and personalized potential therapeutic strategies, biomarker identification, as well as disease modeling, agreeing with the precision medicine concept.Fil: Gatto, Emilia Mabel. Instituto de Neurociencias Buenos Aires S. A.; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de San Martín; ArgentinaFil: González Rojas, Natalia. Instituto de Neurociencias Buenos Aires S. A.; ArgentinaFil: Cesarini, Martin Emiliano. Instituto de Neurociencias Buenos Aires S. A.; ArgentinaFil: Etcheverry, José Luis. Instituto de Neurociencias Buenos Aires S. A.; ArgentinaFil: Perandones, Claudia. Dirección Nacional de Instituto de Investigación.Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Dr. Carlos G. Malbrán"; Argentin

Enhanced gold nanoparticle-tumor cell recognition by albumin multilayer coating

Background: In a biological environment, nanoparticles are rapidly coated with serum proteins, which affects the NPs transport through biological medium, cellular uptake and response, all of which can impair therapeutic efficiency. Reduction of non-specific adsorption of proteins is mandatory to overcome this drawback. Aim: We propose to use albumin to prepare a multilayer coating of NPs to reduce the non-specific protein interactions in biological media. Materials & methods: Biohybrid NPs (bioHNPs) prepared by coating gold NPs with a multilayer of albumin and finally decorated with Bombesin-related peptides (BD-bioHNPs). Results: BioHNPs/biological media interaction was characterized by physicochemical and biological techniques under near-physiological conditions. A significant reduction of the Corona effect and enhanced in vitro uptake to PC-3 cells was demonstrated for BD-bioHNPs. Conclusion: This methodology to prepare decorated bioHNPs allows the preparation of ‘stealth’ NPs with improved cell targeting and the ability to avoid non-specific interactions with the biological media.Fil: Achilli, Estefanía Edith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; ArgentinaFil: Flores, Constanza Yanel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentina. Universidad Nacional Arturo Jauretche; ArgentinaFil: Temprana, Carlos Facundo. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Alonso, Silvia del Valle. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Neuroingeniería; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Grasselli, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentin

Parkinson’s Disease in a Patient with 22q11.2 Deletion Syndrome: The Relevance of Detecting Mosaicisms by Means of Cell-By-Cell Evaluation Techniques

We report the case of a male patient from an Ashkenazi Jewish ethnic group with a history of midline defects (congenital heart disease, high-arched palate and bifid uvula). At the age of 46 years, he came to our center complaining of resting tremor, and a neurological examination concluded Parkinson?s disease. As a part of his approach, genetic evaluation was performed. Fluorescence in-situ hybridization (FISH) confirmed a mosaicism of a 22q deletion in 24% of the analyzed blood cells. Also, immunohistochemical studies were performed on samples from the minor salivary glands using a SNCA antibody. Intense SNCA immunoreactive profiles were obtained for cells from the salivary glands of the patient. This is, to our knowledge, the first description of the association of amosaicism of a 22q11.2 microdeletion syndrome with Parkinson?s disease. Our findings suggest that, before excluding the involvement of the 22q11.2 deletion in the etiology of early-onset PD cases, the spectrum of evaluations should be extended to include more sensitive FISH analysis and immunohistochemical studies. The pathogenesis of early-onset PD in patients with 22q11.2 deletion syndrome remains unknown but, if elucidated, it may contribute to understanding the etiology of PD and ultimately to preventionand treatment strategies.Fil: Perandones, Claudia. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Farini, Veronica Lujan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología. Centro de Estudios en Salud y Medio Ambiente; ArgentinaFil: Pellene, L. A. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Sáenz Farret, Michel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Cuevas, S. M. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Micheli, Federico. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología. Centro de Estudios en Salud y Medio Ambiente; Argentin

Simple gene transfer technique based on I-SceI meganuclease and cytoplasmic injection in IVF bovine embryos

Although transgenic methods in mammals are inefficient, an easy and highly efficient transgenesis systemusing I-SceI meganuclease (intron-encoded endonuclease fromS. cerevisiae)was recently described in Xenopus. The method consisted of injection into fertilized eggs of an I-SceI reaction mixture with a plasmid DNA carrying the transgene, flanked by the meganuclease recognition sites (pIS). In the present study, the effects of I-SceI on gene transfer were tested apparently for the first time in mammals, in particular, in cattle. Various conditions were evaluated, including three concentrations of the plasmid pIS Pax6egfp, carrying I-SceI recognition sites flanking egfp under Pax6 promoter and two injection times (before IVM and after IVF) of pIS CAGegfp, carrying I-SceI sites fanking egfp under CAG promoter. In addition, the quantity of transgenewasmeasured using quantitative polymerase chain reaction, and presence of transgene signals was evaluated using fluorescence in situ hybridization analysis. Transgene expression rateswere higher (P< 0.05) for groups treated after IVF (79.1%, 91/115 and 63.0%, 75/ 119) than before IVM (32.6%, 31/95 and 34.7%, 33/95), with and without I-SceI, respectively. Interestingly, injectionwith pIS plus I-SceI after IVF increased frequency (P<0.05) of nonmosaic transgene-expressing embryos (58.3%, 42/72 vs. 29.7%, 25/84) for pIS plus I-SceI and pIS alone. Based on fluorescence in situ hybridization analysis, injectionwith I-SceI increased (P<0.05) the proportion of embryos with transgene signals in all blastomeres compared with pIS alone (44.0%,11/25 vs. 6.9%, 2/29) for pIS plus I-SceI and pIS alone. In addition, transgene copy number was numerically higher for the group treated with pIS plus I-SceI compared with pIS alone. In conclusion, I-SceI gene transfer increased transgene signals in bovine embryos.Fil: Bevacqua, Romina Jimena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Canel, Natalia Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Hiriart, María Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; ArgentinaFil: Sipowicz, P.. Universidad Nacional de San Martín. Laboratorio de Neuro y Citogenética Molecular; ArgentinaFil: Rozenblum, G. T.. Universidad Maimónides. Area de Investigaciones Biomédicas y Biotecnológicas. Centro de Estudios Biomédicos, Biotecnológicos, Ambientales y de Diagnóstico; ArgentinaFil: Vitullo, Alfredo Daniel. Universidad Maimónides. Area de Investigaciones Biomédicas y Biotecnológicas. Centro de Estudios Biomédicos, Biotecnológicos, Ambientales y de Diagnóstico; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Universidad Nacional de San Martín. Laboratorio de Neuro y Citogenética Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Fernández y Martín, Rafael. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Salamone, Daniel Felipe. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; Argentin

Hypothesis: Somatic Mosaicism and Parkinson Disease

Letter to the EditorFil: Perandones, Carlos Edgardo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Pellene, L. A. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Giugni, J. C.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Calvo, D. S.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Raina, G. B.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Cuevas, S. M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Mata, I. F.. University of Washington; Estados UnidosFil: Zabetian, C. P.. University of Washington; Estados UnidosFil: Caputo, Mariela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Servicio de Huellas Digitales Genéticas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Corach, Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Servicio de Huellas Digitales Genéticas; ArgentinaFil: Micheli, Federico. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Servicio de Huellas Digitales Genéticas; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; Argentin

Challenges in electrochemical aptasensors and current sensing architectures using flat gold surfaces

In recent years, reagentless aptamer biosensors, named aptasensors, have shown significant advancements. Particularly, electrochemical aptasensors could change the field of biosensors in this era, where digitalization seems to be a common goal of many fields. Biomedical devices are integrating electronic technologies for detecting pathogens, biomolecules, small molecules, and ions, and the physical-chemical properties of nucleic acid aptamers makes them very interesting for these devices. Aptamers can be easily synthesized and functionalized with functional groups for immobilization and with redox chemical groups that allow for the conversion of molecular interactions into electrical signals. Furthermore, non-labeled aptamers have also been utilized. This review presents the current challenges involved in aptasensor architectures based on gold electrodes as transducers.Fil: Rozenblum, Tomas Guido. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Argentina de la Empresa; ArgentinaFil: Pollitzer, Iván Gustavo. Aplife Biotech S. A.; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología. Laboratorio de Neuroingeniería; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Sperm genome cloning used in biparental bovine embryo reconstruction

The generation of androgenetic haploid embryos enables several haploid blastomeres to be obtained as identical copies of a single spermatozoon genome. In the present study, we compared the developmental ability of bovine androgenetic haploid embryos constructed by different methods, namely IVF and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) before and after oocyte enucleation. Once obtained, the blastomeres of these androgenetic haploid embryos were used as male genome donors to reconstruct biparental embryos by fusion with matured oocytes. To verify the cytoplasmic contribution of androgenetic haploid blastomeres, we used spermatozoa incubated previously with exogenous DNA that coded for a green fluorescent protein gene (pCX-EGFP) and the enhanced green fluorescent protein (EGFP)-positive androgenetic haploid blastomeres generated were fused with mature oocytes. Of the reconstructed embryos reaching the cleavage and blastocyst stages, 85.1% and 9.0%, respectively, expressed EGFP (P . 0.05). EGFP expression was observed in 100% of reconstructed embryos, with 91.2% exhibiting homogenic expression. To confirm sperm genome incorporation, androgenetic haploid blastomeres generated by ICSI prior to enucleation and using Y chromosome sexed spermatozoa were used for biparental embryo reconstruction. Incorporation of the Y chromosome was confirmed by polymerase chain reaction and fluorescence in situ hybridisation analysis. In conclusion, the results of the present study prove that it is possible to use sperm genome replicates to reconstruct biparental bovine embryos and that it is a highly efficient technique to generate homogeneous transgene-expressing embryos.Fil: Vichera, Gabriel Damian. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Olivera, Ramiro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; ArgentinaFil: Sipowicz, Pablo. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología. Centro de Estudios en Salud y Medio Ambiente. Laboratorio de Neuro y Citogenética Molecular; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología. Centro de Estudios en Salud y Medio Ambiente. Laboratorio de Neuro y Citogenética Molecular; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Salamone, Daniel Felipe. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Disposable micropipette tip for purifying DNA fragments

A novel functional micropipette tip for DNA purification, called DNAtip, is described based on a novel coating process. The functional layer is prepared by an internal coating with silica particles supported into a polyvinyl alcohol (PVA) film. The coating layer is stabilized by simultaneous radiation-induced crosslinking to avoid its dissolution. Three types of silica particles of different diameters: micron, sub-micron, and nano sizes are studied. In addition, pH of the coating solution and concentration of the silica particles were optimized. Tips coated with fumed silica showed the highest absorption capacity of a plasmid DNA with an acceptable purity. Different linear dsDNA fragments were used for evaluating the absorption capacity and size discrimination of fragments. The recovery in the range of 700 ng and 200 ng per tip was measured for dsDNA fragments in the range of 400 bp to 2 kbp and 50 bp to 500 bp respectively. DNA PCR fragments contaminated with BSA were successfully purified with sufficient quality to be sequenced or enzymatically digested. This disposable tip device, useful for plasmids or DNA fragments purification, is a novel lab-on-a-tip device, which can effectively improve automate genetic engineering procedures.Fil: Sánchez, Mirna L.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; ArgentinaFil: Gimenez, Claudia Yanet. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; ArgentinaFil: Martínez, Leandro Julián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Tecnologías Emergentes y Ciencias Aplicadas. - Universidad Nacional de San Martin. Instituto de Tecnologías Emergentes y Ciencias Aplicadas; ArgentinaFil: Grasselli, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB | Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Grupo Vinculado al IMBICE - Grupo de Biología Estructural y Biotecnología - Universidad Nacional de Quilmes - GBEyB; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentin

One step histological detection and staining of the pten tumor suppressor protein by a single strand dna

Antibodies are the most used technological tool in histochemistry. However, even with monoclonal antibodies, their standardization is difficult due to variation of biological systems as well as to variability due to the affinity and amplification of the signal arising from secondary peroxidase detection systems. In this article we combined two synthetic molecules to facilitate the standardization of a detection protocol of protein markers in histological sections. The first molecule was an aptamer, a 50-base single-stranded DNA fragment, which recognizes a PTEN tumor suppressor. The second molecule used was also another single stranded 18-base aptamer DNA fragment, which forms a quadruplex structure guanine box. This G-quadruplex recognizes and attaches a molecule of hemin, increasing the catalytic capacity for the hydrogen peroxide. Our results show how the correct structural design of DNA combining an aptamer together with the peroxidase-like DNAzyme allows to detect proteins in histological sections. This tool offers the standardization of the detection of prognostic markers in cancer, in quality and quantity, due to its synthetic nature and its 1:1 antigen:enzyme ratio. This is the first time that reproducible results have been presented in histological sections staining a cancer marker using a single-stranded DNA molecule with dual function.Fil: Longinotti, María Gloria. Instituto Nacional de Tecnología Industrial; ArgentinaFil: Ybarra, Gabriel Omar. Instituto Nacional de Tecnología Industrial; ArgentinaFil: Vighi, Susana. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Perandones, Claudia. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; ArgentinaFil: Montserrat, Javier Marcelo. Universidad Nacional de General Sarmiento. Instituto de Ciencias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Yakisich, Juan Sebastian. Hampton University; Estados UnidosFil: Grasselli, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular; ArgentinaFil: Radrizzani Helguera, Martin. Universidad Nacional de San Martín. Escuela de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin