Síntesis de novo de glicerolípidos en macrófagos

Los macrófagos son células involucradas en la inmunidad innata y el mantenimiento de la homeostasis tisular. Tanto durante la activación de macrófagos por la exposición a patógenos como en la transición macrófago-célula espumosa en el contexto de la formación de la placa aterogénica se produce un aumento en la cantidad de gotas de lípido intracelulares. Los mecanismos por los cuales se acumulan estos lípidos y la relevancia que éstos poseen para la funcionalidad del macrófago no se conocen por completo. Por lo tanto, el objetivo general de este trabajo fue determinar la contribución de la síntesis de novo de glicerolípidos a la acumulación de gotas de lípido durante procesos de transición de macrófagos y en particular, evaluar el rol que cumple la enzima limitante de este proceso, la glicerol-3-fosfato aciltransferasa (GPAT). Se demostró que la inducción de la síntesis de novo de glicerolípidos (triacilgliceroles y fosfolípidos) contribuye al aumento en la masa de lípidos en la línea celular de macrófagos murinos RAW 264.7 y en macrófagos primarios derivados de médula ósea tratados con KLA (componente activo del LPS bacteriano) o con LDL oxidadas. Particularmente se comprobó que hay un incremento en la actividad GPAT correspondiente a las isoformas que se expresan en retículo endoplásmico GPAT3 y GPAT4. Mediante la utilización de modelos de silenciamiento de estas dos isoformas se demostró que ambas contribuyen a la activación de la síntesis de glicerolípidos observada. En cuanto a la relevancia funcional de estos lípidos, se comprobó que se requiere de la movilización de glicerolípidos mediante la actividad de lipasas para que se produzca el proceso de fagocitosis en forma eficiente. Estos lípidos liberados contribuyen no sólo energéticamente proveyendo de ácidos grasos para la β-oxidación, sino que también son requeridos presumiblemente para la producción de señales que inicien el proceso. La ausencia de GPAT3 o GPAT4 disminuye la eficiencia de la fagocitosis y en particular la carencia de GPAT4 exacerba la liberación de citoquinas pro-inflamatorias, sugiriendo para esta isoforma un rol en la atenuación de las señales infamatorias lo que la posiciona como un potencial blanco terapéutico.Facultad de Ciencias Médica

Análisis comparativo de métodos de evaluación parcial: opción múltiple vs examen oral, en la Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Médicas, UNLP

Las evaluaciones parciales son un punto importante del proceso enseñanza-aprendizaje siempre y cuando las mismas nos permitan evaluar si se alcanzaron los objetivos planteados. Históricamente la cátedra de Bioquímica y Biología Molecular (BBM) evalúa a sus alumnos por medio de dos exámenes parciales (con 3 intentos cada uno) en formato de opción múltiple. Si bien este sistema presenta sus ventajas, como ser una evaluación equivalente en contenidos y presentación para todos los alumnos, y facilidad para la corrección, desde hace años los docentes de la cátedra nos planteamos la necesidad de realizar un cambio en la forma de evaluar. Esta necesidad surge principalmente porque notamos que, por la forma en la que diseñábamos este tipo de evaluación, la mayoría de los alumnos no eran capaces de jerarquizar los contenidos de un tema en estudio, diferenciando los conceptos de los detalles. Esto los llevaba a intentar memorizar la máxima cantidad de información posible, en lugar de comprender, racionalizar y relacionar los conceptos, que les permitieran a futuro aplicar lo aprendido en BBM a otras situaciones fisiológicas o patológicas.Facultad de Ciencias Médica

Análisis crítico de las encuestas oficiales realizadas por la Facultad de Ciencias Médicas a los alumnos de Bioquímica y Biología Molecular al final del ciclo lectivo 2014

Las encuestas son un método de recolección sistemática de información que permite, luego de su análisis, la toma de decisiones. Las encuestas oficiales de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNLP se realizan con el objetivo de “identificar las dificultades en el proceso de enseñanza aprendizaje, que permita establecer pautas de corrección para optimizar el mismo”. Las encuestas contienen un instructivo para los alumnos y en las mismas se evalúa a los docentes, la organización de la cátedra, los aspectos didácticos, la evaluación y sus criterios de corrección y la bibliografía recomendada.Facultad de Ciencias Médica

Impacto de la modalidad de examen parcial sobre el desempeño en el examen final en la Cátedra de Bioquímica y Biología molecular, Facultad de Ciencias Médicas, UNLP

Bioquímica y Biología Molecular es una materia de segundo año, del ciclo básico de la carrera de Medicina. Para regularizarla los alumnos deben aprobar dos exámenes parciales y un examen final sumativo e integrador. El examen final se realiza de manera oral, siendo cada alumno evaluado, en principio, por dos docentes en base a los contenidos del programa. Al momento de realizar la evaluación final los docentes notábamos un alto nivel de fallas y desconocimiento de conceptos básicos, dificultades en la expresión oral y en la identificación de conceptos. Esto nos llevó en el año 2015 a modificar la forma de realizar las evaluaciones parciales, cambiando de examen de opciones múltiples a modalidad oral, con el objetivo de enseñar a los alumnos a jerarquizar y racionalizar los conceptos de la materia, y no solo aprender sus contenidos.Facultad de Ciencias Médica

Triacylglycerol synthesis directed by glycerol-3-phosphate acyltransferases −3 and −4 is required for lipid droplet formation and the modulation of the inflammatory response during macrophage to foam cell transition

Background and aims: The transition of macrophage to foam cells is a major hallmark of early stage atherosclerotic lesions. This process is characterized by the accumulation of large cytoplasmic lipid droplets containing large quantities of cholesterol esters (CE), triacylglycerol (TAG) and phospholipid (PL). Although cholesterol and CE metabolism during foam cell formation has been broadly studied, little is known about the role of the glycerolipids (TAG and PL) in this context. Here we studied the contribution of glycerolipid synthesis to lipid accumulation, focusing specifically on the first and rate-limiting enzyme of the pathway: glycerol-3-phosphate acyltransferase (GPAT). Methods: We used RAW 264.7 cells and bone marrow derived macrophages (BMDM) treated with oxidized LDL (oxLDL). Results: We showed that TAG synthesis is induced during the macrophage to foam cell transition. The expression and activity of GPAT3 and GPAT4 also increased during this process, and these two isoforms were required for the accumulation of cell TAG and PL. Compared to cells from wildtype mice after macrophage to foam cell transition, Gpat4−/− BMDM released more pro-inflammatory cytokines and chemokines, suggesting that the activity of GPAT4 could be associated with a decrease in the inflammatory response, probably by sequestering signaling precursors into lipid droplets. Conclusions: Our results provide evidence that TAG synthesis directed by GPAT3 and GPAT4 is required for lipid droplet formation and the modulation of the inflammatory response during the macrophage-foam cell transition.Fil: Quiroga, Ivana Yoseli. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Pellon Maison, Magali. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Gonzalez, Marina Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; ArgentinaFil: Coleman, Rosalind A.. University of North Carolina; Estados UnidosFil: Gonzalez Baro, Maria del Rosario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner"; Argentin

El silenciamiento de GPAT2 en células MDA-MB-231 afecta el remodelado del ácido araquidónico

La síntesis de novo de glicerolípidos en células de mamífero comienza con la acilación del glicerol-3-fosfato. Este paso esta catalizado por la glicerol-3-fosfato aciltransferasa (GPAT); hasta el momento se han clonado cuatro genes que codifican GPATs. La GPAT2, se clonó por homología de secuencia con GPAT1, sin embrago hemos demostrado que presenta características que la distinguen notablemente de las otras GPATs: se comporta como un antígeno cáncer/ testículo (expresión selectiva en testículo y en tumores de distintas localizaciones), presenta una expresión transitoria en un estadío particular de la meiosis y promueve el fenotipo tumoral incrementando la proliferación y supervivencia celular. Si bien los mecanismos mediante los cuales GPAT2 ejerce su rol funcional, tanto en condiciones fisiológicas como patológicas, no se han dilucidado, nuestros resultados previos indican que juega un rol relevante en el metabolismo del ácido araquidónico.Facultad de Ciencias Médica

El silenciamiento de GPAT2 en células MDA-MB-231 afecta el remodelado del ácido araquidónico

La síntesis de novo de glicerolípidos en células de mamífero comienza con la acilación del glicerol-3-fosfato. Este paso esta catalizado por la glicerol-3-fosfato aciltransferasa (GPAT); hasta el momento se han clonado cuatro genes que codifican GPATs. La GPAT2, se clonó por homología de secuencia con GPAT1, sin embrago hemos demostrado que presenta características que la distinguen notablemente de las otras GPATs: se comporta como un antígeno cáncer/ testículo (expresión selectiva en testículo y en tumores de distintas localizaciones), presenta una expresión transitoria en un estadío particular de la meiosis y promueve el fenotipo tumoral incrementando la proliferación y supervivencia celular. Si bien los mecanismos mediante los cuales GPAT2 ejerce su rol funcional, tanto en condiciones fisiológicas como patológicas, no se han dilucidado, nuestros resultados previos indican que juega un rol relevante en el metabolismo del ácido araquidónico.Facultad de Ciencias Médica

El silenciamiento de GPAT2 en células MDA-MB-231 afecta el remodelado del ácido araquidónico

La síntesis de novo de glicerolípidos en células de mamífero comienza con la acilación del glicerol-3-fosfato. Este paso esta catalizado por la glicerol-3-fosfato aciltransferasa (GPAT); hasta el momento se han clonado cuatro genes que codifican GPATs. La GPAT2, se clonó por homología de secuencia con GPAT1, sin embrago hemos demostrado que presenta características que la distinguen notablemente de las otras GPATs: se comporta como un antígeno cáncer/ testículo (expresión selectiva en testículo y en tumores de distintas localizaciones), presenta una expresión transitoria en un estadío particular de la meiosis y promueve el fenotipo tumoral incrementando la proliferación y supervivencia celular. Si bien los mecanismos mediante los cuales GPAT2 ejerce su rol funcional, tanto en condiciones fisiológicas como patológicas, no se han dilucidado, nuestros resultados previos indican que juega un rol relevante en el metabolismo del ácido araquidónico.Facultad de Ciencias Médica

La síntesis de novo de glicerolípidos aumenta durante la diferenciación de macrófagos en concordancia con el incremento de la expresión de GPAT3

La diabetes tipo 2 y la obesidad se caracterizan por un desbalance en el metabolismo energético que ocasiona un exceso en los depósitos de triacilgliceroles (TAG) en el hígado. En este sistema, dos enzimas mitocondriales poseen un papel fundamental: la glicerol-3-fosfato aciltransferasa (GPAT), que cataliza el primer paso de la síntesis de novo de glicerolípidos celulares, y la carnitina aciltransferasa 1a (CPT1a), cuya función es ingresar acil-CoAs a la mitocondria para su posterior oxidación. Ambas enzimas representan los pasos limitantes de cada vía y están regulados en forma recíproca. Con el objetivo de evaluar si estas enzimas mitocondriales también juegan un papel importante en otro modelo de acumulación de TAG, evaluamos sus niveles de expresión en dos líneas celulares: las RAW 264 derivadas de macrófagos de ratón y las THP1 de monocitos humanos.Facultad de Ciencias Médica

La síntesis de novo de glicerolípidos aumenta durante la diferenciación de macrófagos en concordancia con el incremento de la expresión de GPAT3

La diabetes tipo 2 y la obesidad se caracterizan por un desbalance en el metabolismo energético que ocasiona un exceso en los depósitos de triacilgliceroles (TAG) en el hígado. En este sistema, dos enzimas mitocondriales poseen un papel fundamental: la glicerol-3-fosfato aciltransferasa (GPAT), que cataliza el primer paso de la síntesis de novo de glicerolípidos celulares, y la carnitina aciltransferasa 1a (CPT1a), cuya función es ingresar acil-CoAs a la mitocondria para su posterior oxidación. Ambas enzimas representan los pasos limitantes de cada vía y están regulados en forma recíproca. Con el objetivo de evaluar si estas enzimas mitocondriales también juegan un papel importante en otro modelo de acumulación de TAG, evaluamos sus niveles de expresión en dos líneas celulares: las RAW 264 derivadas de macrófagos de ratón y las THP1 de monocitos humanos.Facultad de Ciencias Médica