Colagenous matrix during bone regeneration

A Engenharia de Tecidos é um dos campos mais pesquisados na ciência atual, onde há a utilização de matrizes (scaffolds) que simulam uma matriz extracelular, funcionando como arcabouço para a adesão e proliferação de células tronco. Procura-se nesse estudo, verificar a expressão da porção colagenosa em situações de regeneração de perdas ósseas, utilizando se scaffolds de PLGA com ou sem células tronco e estabelecer um protocolo preciso e eficaz de quantificação do tecido colagenoso através de um método histológico. Neste estudo foram utilizados ratos (n=9) Wistar machos, com 60 dias, e confeccionado cirurgicamente um defeito ósseo crítico (8mm) na calota craniana. Foram divididos em três grupos experimentais: Grupo 1- inserido somente scaffold, grupo 2 - inserido scaffold acompanhado de células tronco indiferenciadas provenientes da polpa de dentes decíduos e o grupo 3 - inserido scaffold acompanhado de células tronco diferenciadas em meio osteogênico. Aos 60 dias pós cirúrgicos, os ratos foram sacrificados e suas calotas cranianas contendo o defeito removidas para processamento histológico. Foi realizada a coloração de Tricrômico de Masson, onde as fibras colágenas se coram em azul, e as amostras analisadas através do software Photfiltre e ImageJ que calculou a porcentagem média de colágeno (total e compacto) nas áreas do defeito ósseo criado. A análise dos resultados indicou uma maior produção de colágeno total (88%) no grupo 3 (scaffold + células tronco diferenciadas), uma produção intermediária (49,9%) no grupo 1 (scaffold) e uma produção menor (20,6%) de colágeno no grupo 2 (scaffold + células tronco indiferenciadas), sendo estas diferenças estatisticamente significantes (p<0,05). O grupo 3 apresentou maior formação de colágeno compacto em relação aos grupos 1 e grupo 2 (p<0,05), sendo que estes não apresentaram difereça estatística significante entre si. O estudo concluiu que a utilização do scaffold acompanhado de células tronco diferenciadas em meio osteogênico promove uma produção maior de fibras colágenas que serão utilizadas no processo de regeneração óssea e que o método de análise criado para a análise e quantificação das fibras colágenas se mostrou eficaz e preciso, proporcionando resultados metodologicamente padronizados.Tissue engineering is one of the most researched fields in modern science, where artificial matrices (scaffolds) are used to simulate the extracellular matrix. These scaffolds work as a site for the adhesion and proliferation of stem cells. The objective of this study was to evaluate the expression of the collagen tissue in situations of bone regeneration, utilizing scaffolds with or without stem cells, and create an efficient and precise protocol for the quantification of the collagen fibers through an histological method. In this study, 60 days old male Wistar mice (n=9) were utilized and an 8mm critical-size bone defect was surgically made. The mice were divided into three experimental groups: Group 1 – inserted only scaffold, group 2 – inserted scaffold with undifferentiated stem cells removed from the pulp of deciduous teeth, group 3 – inserted scaffold with stem cells differentiated into an osteogenic medium. Sixty days after surgery, the mice were killed and its calvaria containing the defect removed for histological processing. The samples were colored through Masson stain and a consistent methodology was established to quantify the collagen fibers (total and compacted) through the software Photofiltre and ImageJ in the created critical-size bone defects. The analysis showed a significantly higher production of collagen in group 3 (scaffold + differentiated SC), group 1 showed an intermediate production, and group 2 (scaffold + undifferentiated SC) showed a smaller production of collagen, with statistical difference amongst all groups (p<0,05). Group 3 showed a significantly higher (p<0,05) presence of compacted collagen compared to groups 1 and 2, which did not show statistical difference between them. The study concluded that the utilization of scaffolds with pre-differentiated stem cells promotes a higher production of collagen fibers (which will be utilized further on to bone regeneration), and that the created protocol for collagen fiber quantification was precise and efficient, producing methodologically standardized results

Determinação de valores normativos para testes quantitativos sensoriais mecânicos na região orofacial

Modern concepts for the treatment of pain patients are based on the hypothesis that different clinical signs and symptoms reflect different underlying pathophysiological mechanisms of pain generation. To analyze these mechanisms, in 2006, the DFNS (German Research Network on Neuropathic Pain) developed a standardized protocol of quantitative sensory testing (QST) for a quantitative evaluation of pain generating mechanisms, creating reference values for hand, foot and face (masseter muscle) sites. However, there is a lack of orofacial reference values for the temporalis muscle and maxillary gingiva. This study aimed to determine reference values for QST protocol in the orofacial region and evaluate the effectiveness of two test stimuli during conditioned pain modulation (CPM) test. Sixty participants (30 men/30 women) were examined through the tests of mechanical detection (MDT), mechanical pain (MPT), wind-up ratio (WUR), pressure pain threshold (PPT) and conditioned pain modulation (CPM), to determine reference values in healthy subjects. Individuals were examined in a single session by a trained examiner under the protocol developed by the DFNS (2006). The CPM statistical evaluation was done by a multi-way analysis of variance (ANOVA) within the factors site (2 levels), time (2 levels), and sex (2 levels); comparing the absolute values of MPT and PPT. QST reference values comparison was made by a multi-way withinsubjects ANOVA performed considering the factors site (3 levels), side (2 levels) and sex (2 levels) (&#x3B1;=5%). MDT and MPT showed main effects of site (p<0.001), where the maxillary gingiva presented the highest thresholds for MDT and lowest MPT thresholds. In addition, PPT values of the anterior temporalis were lower than the hand (p<0.001). PPT (p<0.001) showed main effects of sex, where men presented higher thresholds. WUR did not show any main effects of sex, site or side. Both CPM test-stimulus (PPT and MPT) were capable of producing significantly higher thresholds during conditioning stimulus when compared to baseline thresholds (p<0.001). Temporalis CPM respondents were significantly higher (p=0.002) than hand respondents for both QSTs. The study concluded that orofacial QST profile of healthy participants could be influenced by the test site and sex. The CPM does not differ considering PPT and MPT as test stimuli, but the test site can influence its effects.Um novo conceito de tratamento de síndromes dolorosas baseada em mecanismos de dor é baseado na hipótese de que diferentes sinais clínicos refletem alterações em diversos mecanismos de geração de dor. Para analisar estes mecanismos, em 2006, o DFNS (German Research Network on Neuropathic Pain) criou um protocolo padronizado de testes quantitativos sensoriais (QST) para uma avaliação quantitativa de mecanismos de geração de dor, criando valores de referência para mão, pé e face (músculo masseter). No entanto, ainda há falta de valores de referência para alguns testes quantitativos em diversas importantes regiões orofaciais como o músculo temporal anterior e a mucosa oral. Este estudo buscou determinar valores normativos dos QSTs nessas regiões e avaliou a eficácia de um estímulo condicionante (CPM) na percepção da dor por meio de dois estímulos teste (PPT e MPT). 60 sujeitos saudáveis (30 homens/30 mulheres) foram examinados com os testes de sensibilidade tátil (MDT), limiar de dor mecânico (MPT), somação temporal (WUR), limiar de dor à pressão (PPT) e condicionamento modulatório da dor (CPM), afim de determinar valores normativos na população. Os pacientes foram examinados em sessão única por um único examinador treinado sob o protocolo desenvolvido pelo DFNS. Para avaliação estatística dos dados da CPM uma análise de variância (ANOVA) foi utilizada comparando os fatores sítio (2 níveis), tempo (2 níveis) e sexo (2 níveis) entre os dois estímulos teste (MPT e PPT). Os valores de referência para QST foram comparados por uma ANOVA multi-vias considerando os fatores sítio (3 níveis), lado (2 níveis), e sexo (2 níveis) (&#x3B1;=5%). MDT e MPT mostraram efeitos principais de sítio (p<0,001), em que a mucosa apresentou os maiores limiares para MDT e menos limiares para MPT, quando comparada à mão e temporal anterior. PPT demonstrou efeitos principais de sítio e sexo. Limiares de dor à pressão do músculo temporal foram menores comparados com a mão (p<0,001) e homens apresentaram maiores limiares que as mulheres em todos os sítios. O teste WUR não apresentou nenhum efeito de sexo, sítio ou lado examinado. Os dois estímulos teste da CPM (MPT e PPT) foram capazes de produzir maiores limiares quando comparados aos estímulos não condicionados (p<0,001). Um maior número significativo de sujeitos respondeu positivamente a estimulação CPM no músculo temporal (p=0,002) para ambos estímulos teste. O estudo concluiu que o perfil sensorial avaliados por meio de QSTs pode ser influenciado pela região de exame e sexo. O efeito da CPM foi igualmente positivo para ambos estímulos teste. No entanto, seu grau de resposta depende da região avaliada

Colagenous matrix during bone regeneration

A Engenharia de Tecidos é um dos campos mais pesquisados na ciência atual, onde há a utilização de matrizes (scaffolds) que simulam uma matriz extracelular, funcionando como arcabouço para a adesão e proliferação de células tronco. Procura-se nesse estudo, verificar a expressão da porção colagenosa em situações de regeneração de perdas ósseas, utilizando se scaffolds de PLGA com ou sem células tronco e estabelecer um protocolo preciso e eficaz de quantificação do tecido colagenoso através de um método histológico. Neste estudo foram utilizados ratos (n=9) Wistar machos, com 60 dias, e confeccionado cirurgicamente um defeito ósseo crítico (8mm) na calota craniana. Foram divididos em três grupos experimentais: Grupo 1- inserido somente scaffold, grupo 2 - inserido scaffold acompanhado de células tronco indiferenciadas provenientes da polpa de dentes decíduos e o grupo 3 - inserido scaffold acompanhado de células tronco diferenciadas em meio osteogênico. Aos 60 dias pós cirúrgicos, os ratos foram sacrificados e suas calotas cranianas contendo o defeito removidas para processamento histológico. Foi realizada a coloração de Tricrômico de Masson, onde as fibras colágenas se coram em azul, e as amostras analisadas através do software Photfiltre e ImageJ que calculou a porcentagem média de colágeno (total e compacto) nas áreas do defeito ósseo criado. A análise dos resultados indicou uma maior produção de colágeno total (88%) no grupo 3 (scaffold + células tronco diferenciadas), uma produção intermediária (49,9%) no grupo 1 (scaffold) e uma produção menor (20,6%) de colágeno no grupo 2 (scaffold + células tronco indiferenciadas), sendo estas diferenças estatisticamente significantes (p<0,05). O grupo 3 apresentou maior formação de colágeno compacto em relação aos grupos 1 e grupo 2 (p<0,05), sendo que estes não apresentaram difereça estatística significante entre si. O estudo concluiu que a utilização do scaffold acompanhado de células tronco diferenciadas em meio osteogênico promove uma produção maior de fibras colágenas que serão utilizadas no processo de regeneração óssea e que o método de análise criado para a análise e quantificação das fibras colágenas se mostrou eficaz e preciso, proporcionando resultados metodologicamente padronizados.Tissue engineering is one of the most researched fields in modern science, where artificial matrices (scaffolds) are used to simulate the extracellular matrix. These scaffolds work as a site for the adhesion and proliferation of stem cells. The objective of this study was to evaluate the expression of the collagen tissue in situations of bone regeneration, utilizing scaffolds with or without stem cells, and create an efficient and precise protocol for the quantification of the collagen fibers through an histological method. In this study, 60 days old male Wistar mice (n=9) were utilized and an 8mm critical-size bone defect was surgically made. The mice were divided into three experimental groups: Group 1 – inserted only scaffold, group 2 – inserted scaffold with undifferentiated stem cells removed from the pulp of deciduous teeth, group 3 – inserted scaffold with stem cells differentiated into an osteogenic medium. Sixty days after surgery, the mice were killed and its calvaria containing the defect removed for histological processing. The samples were colored through Masson stain and a consistent methodology was established to quantify the collagen fibers (total and compacted) through the software Photofiltre and ImageJ in the created critical-size bone defects. The analysis showed a significantly higher production of collagen in group 3 (scaffold + differentiated SC), group 1 showed an intermediate production, and group 2 (scaffold + undifferentiated SC) showed a smaller production of collagen, with statistical difference amongst all groups (p<0,05). Group 3 showed a significantly higher (p<0,05) presence of compacted collagen compared to groups 1 and 2, which did not show statistical difference between them. The study concluded that the utilization of scaffolds with pre-differentiated stem cells promotes a higher production of collagen fibers (which will be utilized further on to bone regeneration), and that the created protocol for collagen fiber quantification was precise and efficient, producing methodologically standardized results

Avaliação do perfil psicossocial, somatosensorial e comportamental de pacientes com dor crônica temporomandibular

Several factors have been evaluated to characterize patterns of normality in healthy individuals and relevant variations in patients with chronic temporomandibular disorders (TMD), for a more accurate diagnosis and personalized treatment. Some variables that have been associated with this type of analysis are psychosocial questionnaires, psychophysical tests, endogenous pain modulation capacity, and the practice of physical activity. The objective of this study is to investigate the inhibitory effects of endogenous pain modulation in healthy subjects and a population with chronic TMD pain and its relationship with associated factors such as psychosocial and somatosensory profiles, as well as physical activity levels. 311 healthy individuals and 68 chronic TMD pain patients aged between 18 and 50 years were included in this study. Questionnaires were applied for psychosocial assessment and provided information on state-trait anxiety (STAI), pain catastrophizing (PCS), quality of sleep (PITTSBURGH), level of physical activity (IPAQ), lifestyle quality (FLC). The somatosensory evaluation was performed on the anterior temporalis muscle of the dominant side of the healthy individuals, and on the side of the reported pain for the chronic TMD pain patients. The following somatosensory test were performed: mechanical pain threshold (MPT), temporal summation (WUR), pressure pain threshold (PPT), and the conditioned pain modulation test (CPM). The Chi-square test was used to identify possible associations between the categorical variables of the study (on a nominal or ordinal scale), comparisons among categories of Physical activity level were made by the Kruskal-Wallis test, followed by Mann-Whitney with Bonferroni correction. A logistic regression was made to evaluate the binary categories of presence of chronic pain and pain modulation capability (assuming a -10% cutoff). All statistical inferences were performed considering a significance level of 5%. Chronic TMD pain patients presented higher values for anxiety traits (p=0,008), catastrophizing (p<0,001) and Pittsburgh scores (p=0,002) as well as lower mechanical (p=0,012) and pressure pain thresholds (p<0,001), and reported a lower lifestyle quality (p<0,001) than healthy individuals. Somatosensory evaluation revealed lower pain thresholds (MPT, PPT) for individuals with chronic pain. Similar values for pain modulation were found when comparing healthy and chronic TMD pain patients and different levels of physical activity did not seem to alter pain modulation levels, but may seem to have a positive effect on anxiety levels, sleep quality, and lifestyle quality. Higher levels of anxiety, catastrophizing, and worse sleep and lifestyle quality were associated with the chronic pain group. Somatosensory evaluation revealed lower pain thresholds for individuals with chronic pain.Vários fatores têm sido avaliados para caracterizar padrões de normalidade em indivíduos saudáveis e variações relevantes em pacientes com disfunção temporomandibular crônica (DTM), para que possa ser realizado um diagnóstico mais preciso e um tratamento personalizado. Algumas variáveis que têm sido associadas a esse tipo de análise são questionários psicossociais, testes psicofísicos, capacidade endógena de modulação da dor e prática de atividade física. O objetivo deste estudo é investigar os efeitos inibitórios da modulação endógena de dor em indivíduos saudáveis e comparar à uma população com dor crônica temporomandibular. Também serão avaliadas suas relações com fatores associados, como perfis psicossociais e somatossensoriais, bem como níveis de atividade física. 311 indivíduos saudáveis e 68 pacientes com dor crônica temporomandibular com idades entre 18 e 50 anos foram incluídos neste estudo. Questionários foram aplicados para avaliação psicossocial e forneceram informações sobre ansiedade traço-estado (IDATE), catastrofização da dor, qualidade do sono (PITTSBURGH), nível de atividade física (IPAQ), qualidade do estilo de vida. A avaliação somatossensorial foi realizada no músculo temporal anterior do lado dominante dos indivíduos saudáveis e no lado da dor relatada para os pacientes com dor crônica de DTM. Os seguintes testes somatossensoriais foram realizados: limiar de dor mecânica (MPT), somação temporal (WUR), limiar de dor à pressão (LDP) e teste de modulação condicionada da dor (CPM). O teste Qui-quadrado foi utilizado para identificar possíveis associações entre as variáveis categóricas do estudo. As comparações entre as categorias do nível de atividade física foram feitas pelo teste de Kruskal-Wallis, seguido de Mann-Whitney com correção de Bonferroni. Uma regressão logística foi feita para avaliar as categorias binárias de presença de dor crônica e capacidade de modulação da dor (assumindo um ponto de corte de -10%). Todas as inferências estatísticas foram realizadas considerando um nível de significância de 5%. Pacientes com dor crônica temporomandibular apresentaram maiores valores para traços de ansiedade (p=0,008), catastrofização (p<0,001) e escores de Pittsburgh (p=0,002), bem como menores limiares de dor mecânica (p=0,012) e a pressão (p<0,001), também relatando uma qualidade de estilo de vida inferior (p<0,001). A avaliação somatossensorial revelou limiares de dor mais baixos (MPT, PPT) para indivíduos com dor crônica. Valores semelhantes para a modulação da dor foram encontrados ao comparar pacientes saudáveis e com dor crônica temporomandibular. Ao analisar a frequência de atividade física dos indivíduos, se observou que diferentes níveis de atividade física não parecem alterar os níveis de modulação da dor, mas podem parecer ter um efeito positivo nos níveis de ansiedade, qualidade do sono e qualidade do estilo de vida. Níveis mais elevados de ansiedade, catastrofização e pior qualidade de sono e estilo de vida foram associados ao grupo de dor crônica. A avaliação somatossensorial revelou limiares de dor mais baixos para indivíduos com dor crônica

Influence of awake bruxism behaviors on fatigue of the masticatory muscles in healthy young adults

Abstract The present cross-sectional study aimed to analyze the relationship between awake bruxism and fatigue of masticatory muscles in healthy young adults. For this purpose, 121 graduate students participated in this study. Frequency of awake bruxism was collected for 7 consecutive days by ecological momentary assessment (EMA) using an online survey (mentimeter). Muscle fatigue was tested one day after EMA assessment, which consisted of voluntarily and continuously clenching at 30% (kgf/cm2) of maximum bite force (MBF) until exhaustion. The percentage of change in MBF after the clenching task, as compared to the MBF before the clenching task was measured. The average frequency of awake bruxism was 45.5% during 7 days. Sustained clenching resulted in a significant reduction in MBF values in the total sample (p < 0.05). Nevertheless, no significant correlation was found between frequency of awake bruxism behaviors and percent of change in MBF and endurance time during the fatigue test. Therefore, it can be concluded that young healthy adults present a relatively high frequency of awake bruxism behaviors that do not seem to impact the degree of masticatory muscle fatigue

MULTIVARIATE STATISTICAL ANALYSIS AND USE OF GEOGRAPHIC INFORMATION SYSTEMS IN RAW WATER QUALITY ASSESSMENT

This study aimed to apply a methodology for evaluating raw water quality and its relationship with land uses and occupations through multivariate statistical analysis and Geographic Information System. Hydrogenic potential, water temperature, dissolved oxygen, biochemical oxygen demand, chemical oxygen demand, total nitrogen, total phosphorus, and E. coli were monitored from August 2012 until March 2013. The geoprocessing tool enabled delimiting the contribution areas of each sampling site, as well as the individual identification of land use of each area. Principal Component Analysis resulted in: domestic sewage, domestic sewage/agriculture, and industrial discharge. Significant correlations were identified between the variable urban area and hydrogenionic potential (ρ = 0.446; p = 0.049), dissolved oxygen (ρ = -0.625; p = 0.003), total nitrogen (ρ = 0.649; p = 0.002), and E. coli (ρ = 0.932; p < 0.001). The methodology enabled to identify the contribution of land use factors as to water quality

Functionalized Surfaces as a Tool for Virus Sensing: A Demonstration of Human mastadenovirus Detection in Environmental Waters

The main goal of this study was to apply magnetic bead surface functionalization in the form of immunomagnetic separation (IMS) combined with real-time polymerase chain reaction (qPCR) (IMS-qPCR) to detect Human mastadenovirus species C (HAdV-C) and F (HAdV-F) in water samples. The technique efficiency was compared to a nonfunctionalized method (ultracentrifugation) followed by laboratory detection. Tests were carried out to standardize IMS parameters followed by tests on 15 water samples concentrated by IMS and ultracentrifugation. Microscopic analyses detected a successful beads&ndash;antibody attachment. HAdV was detected up to dilutions of 10&minus;6 by IMS-qPCR, and samples concentrated by IMS were able to infect cell cultures. In water samples, HAdV-C was detected in 60% (monoclonal) and 47% (polyclonal) by IMS-qPCR, while 13% of samples concentrated by ultracentrifugation gave a positive result. HAdV-F was positive in 27% of samples by IMS-qPCR (polyclonal) and ultracentrifugation and 20% by IMS-qPCR (monoclonal). The rate of detection varied from 4.55 &times; 102 to 5.83 &times; 106 genomic copies/L for IMS-qPCR and from 2.00 &times; 102 to 2.11 &times; 103 GC/L for ultracentrifugation. IMS showed to be a more effective concentration technique for HAdV than ultracentrifugation, improving the assessment of infectious HAdV in water resources