Application of microextraction in the electrophoretic analysis of urine for homocysteine thiolactone content

Trwające do dziś badania nad zaburzeniami metabolizmu tiolaktonu homocysteiny (HTL) wskazują, że obecność HTL w organizmie człowieka w dużych stężeniach może sygnalizować wysokie ryzyko wystąpienia chorób układu krążenia oraz nerwowego. Wysoka ilość HTL w organizmie człowieka może mieć kilka przyczyn. Pierwszą z nich jest genetycznie uwarunkowany niedobór enzymów mających zdolność metabolizowania prekursora HTL, którym jest homocysteina. Kolejnymi przyczynami są prowadzenie nieodpowiedniego stylu życia oraz błędy w żywieniu poprzez niedostateczne dostarczanie odpowiednich witamin do organizmu. Głównym materiałem diagnostycznym, wykorzystywanym do śledzenia zawartości HTL w organizmie człowieka jest mocz. W moczu stężenie tego związku może wahać się od 10 - 500 nmol/L, dlatego ważne jest, aby opracowywać metody analityczne zdolne do badania poziomu tego związku w szerokim zakresie. Większość znanych procedur wykorzystuje techniki chromatograficzne, często w połączeniu z wyrafinowanymi sposobami detekcji. W literaturze opisana jest tylko jedna metoda, która wykorzystuje technikę elektroforezy kapilarnej (CE) do oznaczania HTL w moczu. Małe zainteresowanie techniką CE wynika zapewne z niskiej czułości stężeniowej w przypadku detekcji UV-Vis. W celu polepszenia czułości przeprowadza się zatężanie analitu technikami elektroforetycznymi realizowanymi w układzie pomiarowym CE lub wykorzystuje techniki mikroekstrakcyjne, w tym mikroekstrakcję do pojedynczej kropli (SDME). Wyróżnia się ona dużą wydajnością i stosunkowo prostym wykonaniem, jest łatwa w automatyzacji oraz charakteryzuje się wysokim współczynnikiem wzbogacenia

Simultaneous Determination of Ciprofloxacin and Ofloxacin in Animal Tissues with the Use of Capillary Electrophoresis with Transient Pseudo-Isotachophoresis

We have developed a precise and accurate method for the determination of ciprofloxacin and ofloxacin in meat tissues. Our method utilizes capillary electrophoresis with a transient pseudoisotachophoresis mechanism and liquid–liquid extraction during sample preparation. For our experiment, a meat tissue sample was homogenized in pH 7.00 phosphate buffer at a ratio of 1:10 (tissue mass: buffer volume; g/mL). The extraction of each sample was carried out twice for 15 min with 600 µL of a mixture of dichloromethane and acetonitrile at a 2:1 volume ratio. We then conducted the electrophoretic separation at a voltage of 16 kV and a temperature of 25 ◦C using a background electrolyte of 0.1 mol/L phosphate–borate (pH 8.40). We used the UV detection at 288 nm. The experimentally determined LOQs for ciprofloxacin and ofloxacin were 0.27 ppm (0.8 nmol/g tissue) and 0.11 ppm (0.3 nmol/g tissue), respectively. The calibration curves exhibited linearity over the tested concentration range of 2 to 10 nmol/g tissue for both analytes. The relative standard deviation of the determination did not exceed 15%, and the recovery was in the range of 85–115%. We used the method to analyze various meat tissues for their ciprofloxacin and ofloxacin contents

The Use of Single Drop Microextraction and Field Amplified Sample Injection for CZE Determination of Homocysteine Thiolactone in Urine

Two cheap, simple and reproducible methods for the electrophoretic determination of homocysteine thiolactone (HTL) in human urine have been developed and validated. The first method utilizes off-line single drop microextraction (SDME), whereas the second one uses off-line SDME in combination with field amplified sample injection (FASI). The off-line SDME protocol consists of the following steps: urine dilution with 0.2 mol/L, pH 8.2 phosphate buffer (1:2, v/v), chloroform addition, drop formation and extraction of HTL. The pre-concentration of HTL inside a separation capillary was performed by FASI. For sample separation, the 0.1 mol/L pH 4.75 phosphate buffer served as the background electrolyte, and HTL was detected at 240 nm. A standard fused-silica capillary (effective length 55.5 cm, 75 μm id) and a separation voltage of 21 kV (~99 μA) were used. Electrophoretic separation was completed within 7 min, whereas the LOD and LOQ for HTL were 0.04 and 0.1 μmol/L urine, respectively. The calibration curve in urine was linear in the range of 0.1–0.5 μmol/L, with R2 = 0.9991. The relative standard deviation of the points of the calibration curve varied from 2.4% to 14.9%. The intra- and inter-day precision and recovery were 6.4–10.2% (average 6.0% and 6.7%) and 94.9–102.7% (average 99.7% and 99.5%), respectively. The analytical procedure was successfully applied to the analysis of spiked urine samples obtained from apparently healthy volunteers