Proteomic analysis of the amastigote populations of Trypanosoma cruzi sensitive and resistant benznidazole

Submitted by Repositório Arca ([email protected]) on 2019-05-07T13:26:26Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) maira_mazzoni.pdf: 2285267 bytes, checksum: 05d8110665091fa3444c908d8f71b60e (MD5)Approved for entry into archive by Nuzia Santos ([email protected]) on 2019-07-30T18:47:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 maira_mazzoni.pdf: 2285267 bytes, checksum: 05d8110665091fa3444c908d8f71b60e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)Made available in DSpace on 2019-07-30T18:47:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 maira_mazzoni.pdf: 2285267 bytes, checksum: 05d8110665091fa3444c908d8f71b60e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.A Doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, afeta cerca de 8 - 11 milhões de indivíduos na América Latina. Há 30 anos, o tratamento da DC é feito pelos nitroderivados 2-nitroimidazol (benzonidazol) e 5-nitrofurano (nifurtimox). No entanto, tais drogas apresentam consideráveis efeitos colaterais e baixa eficácia de cura, especialmente na fase crônica da doença. Além disso, a resistência natural e cruzada aos nitroderivados foi descrita para algumas cepas do. parasito, o que aumenta a falha terapêutica e limita as opções de tratamento. A análise proteômica, ideal para o estudo de mudanças globais na expressão de genes em tripanossomatídeos, pode auxiliar na busca de alvos bioquímicos para serem utilizados em novas abordagens quimioterápicas. O presente estudo teve como objetivo identificar proteínas diferencialmente expressas na forma amastigota de duas populações de T. cruzi com resistência selecionada in vivo ao benzonidazol, a população resistente, BZR, e seu par sensível, BZS. Para tal, formas tripomastigotas das populações BZR e BZS de T. cruzi foram mantidas em cultura de células Vero e transformadas em amastigotas após 18h de exposição ao pH 5,0. Os extratos de proteína total obtidos foram separados por eletroforese. bidimensional. Na primeira dimensão, as proteínas foram separadas de acordo com o seu ponto isoelétrico em fitas de gradiente de pH imobilizado de 17cm nas faixas de pH 3-10NL e pH 4-7. Na segunda dimensão, as proteínas foram separadas por peso molecular em gel de poliacrilamida 12% (SDS-PAGE) e corados por Coomasie Blue G-250. As imagens dos géis foram digitalizadas em um densitômetro GS-800 (Bio-Rad) e analisadas através do programa PDQuest 7.3.0 (Bio-Rad). Cerca de 300. e 225 spots dos géis nas faixas de pH 3-10NL e pH 4-7, respectivamente, foram analisados. Os spots selecionados através de análise qualitativa ou quantitativa como diferencialmente ou exclusivamente expressos em uma das populações foram identificados por espectrometria de massa (MS) do tipo Maldi-ToF-ToF. Dos 114 spots submetidos a MS, 107 (94%) foram identificados, correspondendo a 63. proteínas diferentes. Dentre as proteínas identificadas estão aquelas envolvidas com a atenuação dos efeitos gerados pelo metabolismo de drogas, como algumas enzimas da via antioxidante, e outros alvos potenciais de drogas

Genotyping and Descriptive Proteomics of a Potential Zoonotic Canine Strain of Giardia duodenalis, Infective to Mice

Submitted by Sandra Infurna ([email protected]) on 2017-03-02T18:57:50Z No. of bitstreams: 1 alex_chapeaurouge_etal_IOC_2016.pdf: 1813108 bytes, checksum: d2d4db74321df407e1868919c06835d6 (MD5)Approved for entry into archive by Sandra Infurna ([email protected]) on 2017-03-02T19:11:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alex_chapeaurouge_etal_IOC_2016.pdf: 1813108 bytes, checksum: d2d4db74321df407e1868919c06835d6 (MD5)Made available in DSpace on 2017-03-02T19:11:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alex_chapeaurouge_etal_IOC_2016.pdf: 1813108 bytes, checksum: d2d4db74321df407e1868919c06835d6 (MD5) Previous issue date: 2016Universidade Federal de Minas Gerais. Faculdade de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. Belo Horizonte, MG, Brasil.Universidade Federal de Minas Gerais. Faculdade de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. Belo Horizonte, MG, Brasil.Universidade Federal de Minas Gerais. Faculdade de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. Belo Horizonte, MG, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.Universidade Federal de Minas Gerais. Faculdade de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. Belo Horizonte, MG, Brasil.Universidade Federal de Minas Gerais. Faculdade de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. Belo Horizonte, MG, Brasil.Universidade Federal de Minas Gerais. Faculdade de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. Belo Horizonte, MG, Brasil.Universidade de Campinas. Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética. Campinas, SP, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Toxinologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Toxinologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Universidade Federal de Minas Gerais. Departamento de Biologia Geral. Belo Horizonte, MG, Brasil.Universidade Federal de Minas Gerais. Departamento de Parasitologia. Belo Horizonte, MG, Brasil.Universidade Federal de Minas Gerais. Faculdade de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. Belo Horizonte, MG, Brasil.Georgetown University. Biology Department. Washington, USA.Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.Universidade Federal de Minas Gerais. Faculdade de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas. Belo Horizonte, MG, Brasil.The zoonotic potential of giardiasis, as proposed by WHO since the late 70's, has been largely confirmed in this century. The genetic assemblages A and B of Giardia duodenalis are frequently isolated from human and canine hosts. Most of the assemblage A strains are not infective to adult mice, which can limit the range of studies regarding to biology of G. duodenalis, including virulence factors and the interaction with host immune system. This study aimed to determine the infectivity in mice of an assemblage A Giardia duodenalis strain (BHFC1) isolated from a dog and to classify the strain in sub-assemblages (AI, AII, AIII) through the phylogenetic analysis of beta-giardin (bg), triose phosphate isomerase (tpi) and glutamate dehydrogenase (gdh) genes. In addition, the proteomic profile of soluble and insoluble protein fractions of trophozoites was analyzed by 2D-electrophoresis. Accordingly, trophozoites of BHFC1 were highly infective to Swiss mice. The phylogenetic analysis of tpi and gdh revealed that BHFC1 clustered to sub-assemblage AI. The proteomic map of soluble and insoluble protein fractions led to the identification of 187 proteins of G. duodenalis, 27 of them corresponding to hypothetical proteins. Considering both soluble and soluble fractions, the vast majority of the identified proteins (n = 82) were classified as metabolic proteins, mainly associated with carbon and lipid metabolism, including 53 proteins with catalytic activity. Some of the identified proteins correspond to antigens while others can be correlated with virulence. Besides a significant complementation to the proteomic data of G. duodenalis, these data provide an important source of information for future studies on various aspects of the biology of this parasite, such as virulence factors and host and pathogen interactions

Number of trophozoites or cysts recovered from Swiss mice gut after infection with <i>G</i>. <i>duodenalis</i> strains BHCF1 and Portland-1.

<p>Mice were inoculated with 1 x 10⁶ trophozoites through intra-gastric route. Parasites were recovered from gut and counted in Neubauer chamber. Numbers correspond to average and standard deviation of parasite counting’s obtained for each group, from three independent experiments, with minimal number of 3 mice per group, in each experiment.</p

2D protein map showing the spots of the soluble protein fraction (Proteins 1 to 429) and the numerical distribution of localized proteins.

<p>The protein identification correspondent to each number is shown in <a href="http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0164946#pone.0164946.s003" target="_blank">S3 Table</a>.</p

2D protein map showing the spots of the insoluble fraction (Proteins 430 to 903) and the numerical distribution of localized proteins.

<p>The protein identification correspondent to each number is shown in <a href="http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0164946#pone.0164946.s003" target="_blank">S3 Table</a>.</p

Classification of the identified proteins by molecular function (A), biological process (B) and protein class (C).

<p>This classification is suggested by gene ontology and Panther^® and provides a general characterization of a group of proteins. The numbers presented in each graph correspond to the number of proteins.</p

Presence of transmembrane domains and signal peptide for the annoted proteins identified in insoluble and soluble protein fractions.

<p>Presence of transmembrane domains and signal peptide for the annoted proteins identified in insoluble and soluble protein fractions.</p

Consensus phylogenetic relationships of <i>G</i>. <i>duodenalis</i> with Bayesian posterior probabilities using a Markov chain Monte Carlo sampling technique, for <i>bg</i>, <i>tpi</i>, <i>and gdh</i> gene sequences of <i>G</i>. <i>duodenalis</i>.

<p>Markov chains were run for 6,000,000 iterations and the trees were sampled every 100 iterations. The GTR model was used with gamma correction. Sequences from <i>Giardia muris</i>, <i>Giardia microti and Giardia ardeae</i> were employed as outgroups.</p