Effet de l'isradipine sur le I Na(tr), le I Ca(T), et les activités calciques spontanées des cellules ventriculaires des embryons de poulet âgés de trois et dix jours, obtenu par la méthode de patch clamp et de fluorescence

Certaines cellules ventriculaires isolées des embryons de poulet âgés de trois et dix jours montrent des activités calciques spontanées. Ces augmentations calciques transitoires spontanées peuvent être classifiées selon trois types de fréquence. Ces trois types de fréquence sont dits fréquence lente de longue durée (FLD), fréquence lente (FL) et fréquence rapide (FR). Ils sont classifiés selon la durée de l'augmentation transitoire spontanée. Par contre, au niveau des cellules ventriculaires des embryons de poulet de dix jours, un type de fréquence dit FL n'est pas rencontré seul, il coexiste avec le type FLD. Peu importe le type de fréquence, le PN200-110 bloque ces activités calciques spontanées chez les deux types de préparation. Cet antagoniste des canaux calciques, le PN200- 110, est beaucoup plus efficace chez les embryons de poulet âgés de trois jours. Celui-ci bloque à une concentration de 10-10M au niveau des embryons de poulet âgés de trois jours et à une concentration de 10-9M. Un second antagoniste des canaux calciques, la nifédipine, utilisée à une concentration très élevée de 10-6M et 10-5M, n'affecte que les activités calciques des cellules ventriculaires des embryons de poulet âgés de trois jours. Au niveau des courants macroscopiques, le PN200-110, à une concentration près de 10-10M bloque le INa(tr) insensible à la TTX et au Mn2+ des cellules ventriculaires isolées des embryons de poulet âgés de trois jours. Le PN200-110 agit de façon similaire pour le ICa(T) des cellules ventriculaires isolées des embryons de poulet de dix jours. Ces résultats obtenus par la méthode de microfluorométrie et de patch clamp suggèrent que l'oscillation peut être due indirectment au INa(tr) chez les embryons de poulet âgés de trois jours et directement au ICa(T) chez les embryons de poulet âgés de dix jours

Mutagenic Analysis of a Conserved Region of Domain III in the Cry1Ac Toxin of Bacillus thuringiensis

We used site-directed mutagenesis to probe the function of four alternating arginines located at amino acid positions 525, 527, 529, and 531 in a highly conserved region of domain III in the Cry1Ac toxin of Bacillus thuringiensis. We created 10 mutants: eight single mutants, with each arginine replaced by either glycine (G) or aspartic acid (D), and two double mutants (R525G/R527G and R529G/R531G). In lawn assays of the 10 mutants with a cultured Choristoneura fumiferana insect cell line (Cf1), replacement of a single arginine by either glycine or aspartic acid at position 525 or 529 decreased toxicity 4- to 12-fold relative to native Cry1Ac toxin, whereas replacement at position 527 or 531 decreased toxicity only 3-fold. The reduction in toxicity seen with double mutants was 8-fold for R525G/R527G and 25-fold for R529G/R531G. Five of the mutants (R525G, R525D, R527G, R529D, and R525G/R527G) were tested in bioassays with Plutella xylostella larvae and ion channel formation in planar lipid bilayers. In the bioassays, R525D, R529D, and R525G/R527G showed reduced toxicity. In planar lipid bilayers, the conductance and the selectivity of the mutants were similar to those of native Cry1Ac. Toxins with alteration at position 527 or 529 tended to remain in their subconducting states rather than the maximally conducting state. Our results suggest that the primary role of this conserved region is to maintain both the structural integrity of the native toxin and the full functionality of the formed membrane pore

Microvascular rarefaction and impaired angiogenesis precede elevation of blood pressure and vascular dysfunction in rats exposed to neonatal hyperoxic stress

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