Characterization of the inflammatory reaction induced by Bothrops insularis snake venom: leukocyte influx, release of inflammatory mediators and mechanisms involved in this effects

Este estudo teve por objetivos: i) caracterizar o influxo leucocitário induzido pelo veneno de Bothrops insularis (VBi); ii) avaliar a liberação de PGD2 e PGE2, TXA2 e LTB4 e das quimiocinas MCP-1 e KC induzida pelo VBi; iii) analisar a ação do VBi quanto a expressão protéica das enzimas ciclooxigenases (COX -1 e -2) e iv) avaliar a participação dos metabólitos das COX-1 e -2 e 5-LO no influxo leucocitário. O VBi causou aumento de leucócitos circulantes e do influxo de leucócitos PMN e MN para o local de sua injeção. Ainda, veneno induziu a liberação de PGD2, PGE2, TXA2 e LTB4, da MCP-1, mas não da KC, além da expressão protéica de COX-2. O tratamento dos animais com indometacina, etoricoxibe ou zileuton inibiu o influxo de leucócitos induzido pelo VBi na 12ª h. Em conclusão, o VBi tem capacidade de induzir influxo de leucócitos e liberação de mediadores inflamatórios para o local de sua injeção. O influxo leucocitário relaciona-se aos metabólitos das COX -1 e -2, 5-LO, da MCP-1 e do aumento de leucócitos circulantesIn this study the effects of Bothrops insularis venom (BiV) on the leukocyte influx, on the circulating leukocyte numbers and release of mediators, such as PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 and KC into the local of its injection. Moreover, the role of eicosanoids in the BiV- induced leukocyte influx was assessed by selected pharmacological treatments. PMN were accumulated from 6 up to 24 h and MN cells from 3 up to 72 h when injected into the peritoneal cavity of mice. Moreover, BiV increased blood leukocyte at 3 h after injection and incresed the levels of PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 at distinct periods of time. In addition, BiV induced the protein expression of COX-2 from 1 up to 12 h and the BiV-induced leukocyte influx was reduced by indomethacin or etoricoxib or zileuton at 12 h after injection. In conclusion, BiV is able to induce leukocyte influx and increase of blood leukocyte numbers. Moreover, the ability of BiV to induce expression of COX-2 and release of inflammatory mediators is relevant for the leukocytes influx into the local of its injectio

Effects of prolonged administration of low levels of fumonisin B1 in pigs: evaluation of performance parameters, histology of organs, immune response and residues in biological materials

A fumonisina B1 (FB1) é um metabólito secundário produzido principalmente por Fusarium verticilioides em diversos tipos de alimentos, principalmente o milho, o qual constitui a base para composição de rações para várias espécies de animais domésticos. A FB1 é particularmente tóxica para suínos, cujas manifestações clínicas são evidentes em animais expostos a altas concentrações de FB1 na ração (em geral, acima de 30 mg/kg). No entanto, são escassos os estudos sobre os efeitos da FB1 em suínos alimentados com rações contendo baixas concentrações de fumonisinas, as quais são mais prováveis de serem encontradas em condições de campo. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos da exposição de suínos a baixos níveis de FB1 na ração, durante 28 dias, sobre o ganho de peso, consumo de ração, peso relativo de órgãos e aspectos histológicos do baço, fígado, pulmões, rins, coração e esôfago, a resposta imune e a determinação do resíduo de FB1 em materiais biológicos como plasma, urina e fezes. Vinte e quatro suínos foram distribuídos em 4 grupos experimentais e alimentados com rações contendo 0 mg (controle), 3,0 mg, 6,0 mg ou 9,0 mg FB1/kg de ração. As diferentes dietas não afetaram (P>0,05) o ganho de peso e nem o peso relativo dos órgãos analisados. Não foram constatadas lesões macroscópicas ou histopatológicas no esôfago, rins, coração e fígado. No entanto, foram observadas lesões histopatológicas nos pulmões de todos os suínos alimentados com rações contaminadas com fumonisinas, indicando que nenhum dos níveis de FB1 usados no experimento poderia ser considerado como seguro para suínos. Ainda, a FB1 não alterou as concentrações de imunoglobulinas totais, por outro lado, diminuiu a resposta imunológica dos suínos vacinados com Stellamune®, como também reduziu a expressão de citocinas pro-inflamatórias. As concentrações plasmáticas de FB1 residual encontradas permaneceram constantes ao longo dos 28 dias de exposição, nos suínos que se alimentaram com 3,0 mg FB1/kg de ração. Por outro lado, os níveis de FB1 no plasma variaram de 400,3 ± 19,6 pg/mL a 260,6 ± 61,6 pg/mL nos animais expostos a 6,0 mg FB1/kg de ração, e de 1127 ± 494,5 pg/mL a 460,7 ± 69,5 pg/mL nos animais expostos a 9,0 mg FB1/kg de ração, entre os dias 7 e 28 dias de exposição, respectivamente. Em relação aos níveis residuais de FB1 eliminados na urina, embora com variações ao longo dos 28 dias de exposição, foram encontrados níveis que variaram de 28,53 ± 17,9 ng/mL a 16,1 ± 22 ng/ml na urina dos suínos expostos com 3,0 mg FB1/kg de ração, de 47,4 ± 26,4 ng/mL a 24,12 ± 26 ng/mL nos suínos expostos a 6,0 mg FB1/kg de ração e de 75,05 ± 55,2 ng/mL a 18,9 ± 4,4 ng/mL nos suínos expostos a 9,0 mg FB1/kg de ração. Os níveis de FB1 residual eliminados nas fezes permaneceram constantes nos animais expostos com 3,0 mg FB1/kg de ração entre 2,26 ± 1,6 mg/kg e 3,25 ± 2,26 mg/kg, variando de 5,18 ± 1,6 mg/kg a 10,6 ± 2,3 mg/kg, e de 8,16 ± 6,8 mg/kg a 13,8 ± 4,8 mg/kg, nos suínos expostos a 6,0 mg FB1/kg de ração e 9,0 mg FB1/kg de ração, respectivamente. Os resíduos de FB1 encontrados nas fezes decaíram a partir de 21 dias de exposição a FB1 em suínos expostos a 6,0 mg FB1/kg de ração, porém, estes níveis permaneceram constantes entre o dia 21 e 28 em suínos expostos 9,0 mg FB1/kg de ração, indicando uma baixa absorção da toxina em todos os tratamentos. As correlações entre a FB1 eliminada nas fezes (mg/kg) e os níveis de FB1 ingeridos por suínos (mg FB1/animal) foram significativas (P 0.05) weight gain or the relative weight of the analyzed organs. Macroscopic and microscopic lesions were not observed in the esophagus, liver, kidneys and heart. However, histopathological lesions were observed in the lungs of all pigs fed diets contaminated with fumonisin, indicating that none of FB1 levels used in the experiment could be considered as safe for pigs. Furthermore, the dietary FB1 did not alter the concentrations of total immunoglobulins, although it decreased the immune response of pigs vaccinated with Stellamune® and also reduced the expression of pro-inflammatory cytokines. The FB1 concentrations in plasma of pigs fed 3.0 mg FB1/kg diet remained constant over the 28 days of exposure. Moreover, FB1 plasma levels ranged from 400.3 ± 19.6 pg/ mL to 260.6 ± 61.6 pg/mL in animals exposed to 6.0 mg FB1/kg of diet and 1,127 ± 494.5 pg/mL to 460.7 ± 69.5 pg/mL in animals exposed to 9.0 mg FB1/kg diet, between 7 and 28 days of exposure, respectively. In relation to residual FB1 eliminated in urine, although a variation over the 28 days of exposure was observed, the levels ranged from 17.9 ± 28.53 ng/mL to 16.1 ± 22 ng/mL in urine of pigs exposed with 3.0 mg FB1/kg, 47.4 ± 26.4 ng/mL to 24.12 ± 26 ng/mL in pigs exposed to 6.0 mg FB1/kg, and 75.05 ± 55.2 ng/mL to 18.9 ± 4.4 ng/mL in pigs exposed to 9.0 mg FB1/kg of feed. Residual FB1 levels eliminated in the feces remained constant in animals exposed to 3.0 mg FB1/kg diet, with values of 2.26 ± 1.6 mg/g to 3.25 ± 2.26 mg/kg; in pigs fed 6.0 or 9.0 mg FB1/kg feed, the levels found in feces were 5.18 ± 1.6 mg/kg to 10.6 ± 2.3 mg/kg and 8.16 ± 6.8 mg/kg to 13.8 ± 4.8 mg/kg, respectively. The FB1 residues found in feces decreased from 21 days in pigs exposed to 6.0 mg FB1/kg of feed; however, these levels remained constant between 21 and 28 in pigs exposed to 9.0 mg FB1/kg of feed, indicating a low absorption of toxin in all treatments. Significant (P<0,.05) correlations were found between the FB1 excreted in feces (mg/kg) and the FB1 ingested (mg FB1/animal). The correlations between the ingested FB1 in the different treatments and the residual FB1 levels in urine or plasma were also significant (P<0.05) on days 7 and 28 of intoxication, respectively. Thus the quantification of FB1 in urine or plasm is suitable as biomarker of ingestion of low levels of FB1 at the beginning (7 days) or at the end (28 days) of the intoxication period, respectively. Further studies are needed on the mechanisms of toxic action of FB1 in pigs especially under conditions of prolonged exposure to low levels of contamination in the feed

Inhibition of Carrageenan-Induced Acute Inflammation in Mice by Oral Administration of Anthocyanin Mixture from Wild Mulberry and Cyanidin-3-Glucoside

Anthocyanins are flavonoids which demonstrated biological activities in in vivo and in vitro models. Here in the anti-inflammatory properties of an anthocyanin-enriched fraction (AF) extracted from wild mulberry and the cyanidin-3-glucoside (C3G), the most abundant anthocyanin in diet, were studied in two acute inflammation experimental models, in the peritonitis and in the paw oedema assays, both of which were induced by carrageenan (cg) in mice. In each trial, AF and C3G (4 mg/100 g/animal) were orally administered in two distinct protocols: 30 min before and 1 h after cg stimulus. The administration of both AF and C3G suppresses the paw oedema in both administration times (P<0.05). In the peritonitis, AF and C3G reduced the polymorphonuclear leukocytes (PMN) influx in the peritoneal exudates when administered 1 h after cg injection. AF was more efficient reducing the PMN when administered 30 min before cg. Both AF and C3G were found to suppress mRNA as well as protein levels of COX-2 upregulated by cg in both protocols, but the inhibitory effect on PGE2 production in the peritoneal exudates was observed when administered 30 min before cg (P<0.05). Our findings suggest that AF and C3G minimize acute inflammation and they present positive contributions as dietary supplements

Relação entre níveis de fumonisina B1 e ácido fólico em farinha de milho e a concentração de ácido fólico no soro humano

RESUMO: Neste trabalho foram determinados os níveis de ácido fólico e de fumonisina B1 (FB1) em farinha de milho consumida por 24 voluntários residentes em um campus universitário no estado de São Paulo, bem como sua relação com as concentrações de ácido fólico sérico nos indivíduos. As análises de ácido fólico e de FB1 em farinha de milho foram realizadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), enquanto a determinação de ácido fólico sérico foi feita por kit de imunoensaio. Detectou-se a FB1 em 100% das amostras de farinha de milho, em níveis que variaram de 142 a 3.037 µg kg-1 (média: 738 ± 591 µg kg-1). As concentrações de ácido fólico nas amostras de farinha de milho ficaram entre < 0,3 µg kg-1 (limite de quantificação) e 1.705 µg kg-1, com média de 713 ± 435 µg kg-1, o que representa 47% do limite mínimo exigido pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) para farinhas de milho comercialmente disponíveis. Nas amostras de soro humano, os níveis de ácido fólico variaram de 6,7 a 24,0 ng mL-1 (média: 13,4 ± 5,4 ng mL-1). Não houve correlação (p < 0,05) entre os níveis de ácido fólico no soro dos indivíduos e as concentrações de FB1 ou ácido fólico nas amostras de farinha de milho. Outros estudos são necessários para estimar a ingestão total de FB1 por meio da dieta para averiguar os efeitos das fumonisinas sobre a absorção de ácido fólico nos indivíduos avaliados

A catalytically-inactive snake venom Lys49 phospholipase A2 homolog induces expression of cyclooxygenase-2 and production of prostaglandins through selected signaling pathways in macrophages

The effects of a snakevenom Lys-49phospholipaseA2 (PLA2) homolog named MT-II,devoid of enzymatic activity, on the biosynthesis of prostaglandins and protein expression of cyclooxygenase-2(COX-2) and signaling pathways involved were evaluated in mouse macrophages in culture and in peritoneal cells ex vivo. Stimulation of macrophages wit hMT-II leads to production of prostaglandin D2 (PGD2) and prostaglandin E2 (PGE2) and protein expression of COX-2 and microsomal prostaglandin E synthase-1 (mPGES-1). Inhibition of cytosolic PLA2 (cPLA2), but not Ca2+ independent PLA2 (iPLA2) reduced release of PGD2 and PGE2 and expression of COX-2induced by MT-II. Inhibition of nuclear factor kB (NF-kB) significantly reduced MT-II-induced PGE2, but not PGD2 production and COX-2 expression. Inhibitors of either proteinkinase C (PKC), proteintyrosinekinase (PTK),or extracellular signal-regulated kinase(ERK) pathways abrogated MT-II-induced NF-kB activation and reduced COX-2 expression and PGE2 release, whereas the p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) inhibit or reduced MT-II-induced COX-2 expression and PGD2 production.Inhibition of phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) pathway abrogated MT-II-induced NF-kB activation,but affected neither prostaglandins production nor COX-2expression.MT-II-induced production of PGD2 and PGE2 and COX-2 expression were also observed in vivo after intraperitoneal injection into mice. Collectively,our data demonstrate that a catalytically-inactivePLA2 homolog is capable of inducing prostaglandins biosynthesis and COX-2expression in macrophages in both in vitro and in vivo models,indicating that the enzymatic activity of PLA2 is not necessary to trigger these effects. MT-II-activated NF-kB, cPLA2 and distinct protein kinases are the principal steps involved in these cellular events.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo/[02/13863-2]/FAPESP/BrasilFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo/[07/03336-9]/FAPESP/BrasilInstituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Toxinas/[2008/57898-0]/INCT-TOX/BrasilConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico/[306099/2008-0]/CNPq/BrasilFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo/[07/03337-5]/FAPESP/BrasilFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo/[06/58341-4]/FAPESP/BrasilFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo/[10/07630-1]/FAPESP/BrasilUCR::Vicerrectoría de Investigación::Unidades de Investigación::Ciencias de la Salud::Instituto Clodomiro Picado (ICP