RELATIONSHIP BETWEEN ROTAVIRUS AND FIMBRIATED ESCHERICHIA COLI IN ENTERIC INFECTIONS OF NEONATAL ALPACAS

El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia y la asociación entre rotavirus y la Escherichia coli fimbriada como agentes patógenos causantes de las infecciones entéricas en condiciones naturales en alpacas neonatas. La detección de rotavirus y de antígenos fimbriales se realizó mediante aglutinación con anticuerpos monoclonales embebidos en látex y la biotipificación se realizó mediante el sistema API 20E. En el 9.3% de las muestras de heces se detectó rotavirus. Se encontró 10 biotipos de E. coli, donde se detectó un 26% de antígeno F41 en alpacas neonatas con infección entérica en contraste con el 48% en los aislamientos de E. coli de alpacas clínicamente sanas. Rotavirus se encuentra en asociación con el 18.8% de los aislamientos de E. coli identificados como biotipos A y C. El 57.8% de aislamientos de E. coli de alpacas neonatas con infección entérica que contienen antígeno fimbrial F41 se encuentran en conjunto con la presencia de rotavirus. Por lo tanto, la asociación entre rotavirus, el biotipo de E. coli y el antígeno fimbrial F41 podría ser la causa de diarrea en el 18.8% del 30-40% de la población de alpacas afectadas.The objective of the present research was to determine the presence and the association between rotavirus, biotype E. coli and fimbriated E. coli in the enteric infections of neonatal alpacas under natural conditions. The detection of rotavirus was carried out by agglutination with monoclonal antibodies, the biotyping of E. coli by API 20E system and the detection of fimbrial antigens by agglutination using monoclonal antibodies. In 15 out of 160 (9.4%) of fecal samples from neonatal alpacas with enteric infection was detected rotavirus. Ten biotypes of E. coli was found and 26% of the E. coli isolates from alpaca neonates with enteric infection had the F41 antigen in contrast with 48% from clinically healthy neonatal alpacas. Rotavirus was found in association with 18.8% of the E. coli isolates identified as biotypes A and C. The 57.8 % of E. coli isolates from neonatal alpacas with enteric infections which contained the fimbrial antigen F41 were found in association with rotavirus. In the present research has been found that under natural conditions, rotavirus is present in conjunction with a different biotype of E. coli and fimbrial antigens F41 in 18.8%; therefore, the association between rotavirus, E. coli biotype and fimbrial antigen F41 may be the cause of diarrhea in 18.8% of 30-40% of neonatal alpacas affected

Estudio electrocardiografía en estación y de cúbito lateral derecho en crías de alpaca (Vicugna pacos)

The aim of the study was to determine the electrocardiographic parameters in both station and right lateral decubitus positions in baby alpacas. The work was done in 30 alpacas (17 males and 13 females) of 60 days old, from the communities alpaqueras Maranganí, Canchis in Cusco. The electrocardiographic values in station and right lateral decubitus were: heart rate 124.83 and 114.16, P wave duration 0.04 and 0.04 s, P wave amplitude 0.180 and 0.173 mV, duration and PQ 0.101 s 0.102, 0.039 and 0.038 QRS duration s, QRS complex 0.643 and 0.557 mV, duration and QT 0.225 0.2370.040 s, T wave amplitude 0.393 and 0.413 mV. The values of ECG parameters showed no significant differences between the two positions. We conclude that is possible to use any positions for the clinic examen in alpacas.El presente estudio tuvo por objetivo determinar los parámetros electrocardiográficos en las posiciones estación y decúbito lateral derecha en crías de alpacas. El trabajo se hizo en 30 alpacas (17 machos y 13 hembras) menores de 60 días de edad, provenientes de las comunidades alpaqueras de Maranganí, Canchis, en Cusco. Los valores electrocardiográficos en estación y en decúbito lateral derecho fueron: Frecuencia cardiaca 124.83 y 114.16, Duración onda P 0.04 y 0.04 s, amplitud onda P 0.180 y 0.173 mV, duración PQ 0.102 y 0.101 s, duración QRS 0.039 y 0.038 s, complejo QRS 0.643 y 0.557 mV, duración QT 0.225 y 0.2370.040 s, amplitud onda T 0.393 y 0.413 mV, los valores no mostraron diferencias significativas al comparalos entre ambas posiciones. Se concluye que en alpacas se puede usar indiferentemente cualquiera de las dos posiciones electrocardiográficas para fines clínico

HISTOLOGICAL DESCRIPTION OF THE HAIR FOLLICLE IN THE YOUNG ALPACA

El presente estudio tuvo el propósito de caracterizar la distribución y asociación de los folículos que conforman la piel de la alpaca. Se tomaron muestras de piel de 42 crías de alpacas Suri y Huacaya, de ambos sexos, y diversos colores de manto. Las muestras se colectaron con sacabocado de la zona del costillar medio y fueron procesadas mediante técnicas histológicas estándares, utilizando la coloración H y E. Los folículos pilosos se encuentran formando nidos foliculares, distribuidos como grupos foliculares compuestos (GFC) y grupos foliculares simples (GFS). Los primeros se encuentran conformados por folículos primarios rodeados de folículos secundarios, mientras que los GFS solo están conformados por folículos secundarios. Además, los folículos primarios pueden ser solitarios, denominados folículo primario extra grupo folicular (FPEGF) o formando parte de un grupo folicular compuesto denominado folículo primario intra grupo folicular (FPIGF). Los grupos foliculares están conformados uno o más folículos primarios y un número variable de folículos secundarios; sin embargo, en las alpacas Suri se observa un trío folicular primario, caracterizado por presentar un folículo primario central y dos laterales. Las características de asociación y distribución de los folículos, así como de su citoarquitectura permiten establecer la presencia del denominado “Complejo Folicular Piloso” en la piel de las alpacas.The present study was carried out to characterize the distribution and an association of hair follicles of alpaca skin. Samples were collected from 42 young Suri and Huacaya alpacas, of both sexes and with various hair colours. Samples were collected by punch skin biopsy in the middle costal zone and processed for histological study using H-E staining. Hair follicles formed follicular nests distributed as a compound follicle group (CFG) and simple follicle group (SFG). The first was composed of primary follicles surrounded by secondary follicles, while that latter was only composed of secondary follicles. Furthermore, primary follicles can be solitary and named Extra Primary Follicle Follicular Group (EPFFG) or forming compound follicle groups named Internal Primary Follicle Follicular Group (IPFFG). Follicular groups are formed by one or more primary follicles and a variable number of secondary follicles; however, in the Suri alpaca, was observed groups of three primary follicles, one larger and central and two smaller at each side. The characteristics of association and distribution of follicles and the cytoarchitecture allowed pointing out the presence of a Hair Follicular Complex in the alpaca skin

DETECCIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA PESTIVIRUS EN RUMIANTES DE UNA COMUNIDAD CAMPESINA DE LA PROVINCIA DE CANCHIS, CUSCO

El presente estudio tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia de los pestivirus de la enfermedad de la diarrea viral bovina (DVB) y enfermedad de la frontera (EF) en rumiantes de la comunidad de Silly, provincia de Canchis, Cusco, a través de la detección de anticuerpos en el suero sanguíneo de alpacas (n=200), bovinos (n=38) y ovinos (n=45) hembras adultas, mediante la prueba de virus-neutralización. El 11.5 ± 4.4% (23/200) y el 9.5 ± 4.1% (19/200) de las alpacas presentaron anticuerpos neutralizantes contra los virus DVB y EF. El 73.7 ± 13.9% (28/38) y 76.3 ± 13.5% (29/38) de los bovinos y el 13.3 ± 9.9% (6/45) y 15.5 ± 10.6% (7/45) de los ovinos presentaron anticuerpos contra la DVB y EF, respectivamente. Estos resultados confirman la presencia de la infección pestiviral en rumiantes bajo un sistema de crianza mixto en una comunidad campesina del Cusco.The seroprevalence of bovine viral diarrhoea virus (BVDV) and border disease virus (BDV) in serum samples of alpacas (n=200), bovine (n=38) and ovine (n=45) of a rural community of Cusco, Perú was carried out by virus-neutralization test. The 11.5 ± 4.4% (23/200) and 9.5 ± 4.1% (19/200) of alpacas had neutralizing antibodies against BVD and BD virus. The 73.7 ± 13.9% (28/38) and 76.3 ± 13.5% (29/38) of bovine and the 13.3 ± 9.9% (6/45) and 15.5 ± 10.6% (7/45) of ovine had antibodies to BVDV and BDV respectively. These results confirm the presence of pestiviral infection in ruminants of a mixed breeding system in a rural community

Effect of retinoic acid on expression of receptor ccr9 and alpha 4 beta 7 integrin in alpaca blood leukocytes (Vicugna pacos)

Las células T efectoras (CD4+ y CD8+) y de memoria pueden migrar a la mayoría de los tejidos extra-linfoides en el cuerpo, pero requieren la expresión de receptores de alojamiento (homing) específicos en las células T, la integrina A4B7 y el receptor de quimiocina CCR9. Los linfocitos circulantes CD4+ o CD8+ carecen de receptores CCR9 y A4B7; sin embargo, expresan este tipo de receptores al alcanzar la mucosa intestinal. El objetivo del estudio fue determinar el efecto del ácido retinoico sobre la expresión de los receptores CCR9 y la integrina A4B7análisis in vitro de muestra de sangre circulante de alpaca. Los leucocitos obtenidos se colocaron en placas de cultivo celular en medio esencial mínimo (MEM) suplementados e inoculados con ácido retinoico a concentraciones de 10, 50 y 100 ug/ml disuelto en DMSO. Se empleó un control a base de suero fisiológico. Las placas de cultivo celular fueron incubadas por 12, 24 y 48 h a 37 ºC con CO2 al 5%. Se realizó las PCR en Tiempo Real de los ARNm del receptor CCR9 y la integrina A4B7 y la cuantificación relativa con el método 2-ÄÄCt. Las máximas expresiones para CCR9 se dieron a las 48 h para las concentraciones de 10 y 100 ug/ml de ácido retinoico y DMSO, y a las 24 h para la concentración de 50 ug/ml. El control presentó expresiones mucho más elevadas en comparación con las dosis de ácido retinoico y DMSO. No hubo expresión para la integrina A4B7.Effector T cells (CD4+ and CD8+) and memory cells can migrate to most extra lymphoid tissues in the body, but require the expression of specific homing receptors in T cells, α4β7 integrin and receptor chemokine CCR9. CD4+ or CD8+ circulating lymphocytes lack CCR9 and α4β7 receptors; however, these receptors are expressed upon reaching the intestinal mucosa. The aim of the study was to determine the effect of retinoic acid on the expression of CCR9 receptors and α4β7 integrin on alpaca lymphocytes (Vicugna pacos). An in vitro analysis of circulating alpaca blood sample was performed. The obtained leukocytes were placed in cell culture plates in minimal essential medium (MEM) supplemented with retinoic acid at concentrations of 10, 50 and 100 ìg/ml dissolved in DMSO. A control based on physiological serum was used. Cell culture plates were incubated for 12, 24 and 48 h at 37 °C with 5% CO2. Real-time PCR of the CCR9 receptor mRNA and α4β7 integrin and relative quantification with the 2-ΔΔCt method were performed. The maximum expressions for CCR9 were given at 48 h for concentrations of 10 and 100 μg/ml of retinoic acid and DMSO, and at 24 h for the concentration of 50 μg/ml. The control had much higher expressions compared to the doses of retinoic acid and DMSO. There was no expression for the α4β7 integrin

Expression and quantification of RORγt and interleukin-17 in intestinal mucosa of newborn alpaca (Vicugna pacos)

El objetivo del estudio fue determinar los niveles relativos de expresión de ARN mensajeros de RORγt e IL-17 en mucosa intestinal de crías de alpacas clínicamente sanas. Se formaron tres grupos etarios conformados por alpacas de 2 a 7 días (grupo 1, n=5), 8 a 20 días (grupo 2, n=6) y 26 a 47 días (grupo 3, n=6), sin distinción de sexo o raza. Se tomaron muestras del segmento medio del yeyuno, se extrajo el ARN total y se empleó la técnica RT-PCR con cebadores. La expresión relativa de ARNm de RORγt e IL-17 fue determinada por el método 2-∆∆Ct usando como calibradores dos crías neonatas y empleándose como control endógeno a GAPDH. La cinética de expresión de RORγt mostró una tendencia constante durante la primera y tercera semana de vida, alcanzando su máxima expresión en los animales de 2 a 7 días de edad, a diferencia de IL-17 cuya expresión fue progresiva con la edad, evidenciándose una elevada estimulación y expresión desde los primeros días de edad.The aim of the study was to determine the relative levels of expression of messenger RNAs of RORγt and IL-17 in intestinal mucosa of clinically healthy newborn alpacas. Three age groups were formed: 2 to 7 days (group 1, n=5), 8 to 20 days (group 2, n=6) and 26 to 47 days (group 3, n=6), regardless sex or breed. Samples were taken from the middle segment of the jejunum. The total RNA was extracted, and the RT-PCR technique was used with specific primers. The relative expression of mRNA of RORγt and IL-17 was determined by the 2-ΔΔCt method using two neonatal pups as calibrators and using GAPDH as an endogenous control. The kinetics of expression of RORγt showed a constant trend during the first and third week of life, reaching its maximum expression in animals from 2 to 7 days of age, unlike IL-17 whose expression was progressive with age, evidencing a high stimulation and expression from the first days of age

SEROPREVALENCE OF ANTIBODIES AGAINST Toxoplasma gondii IN ALPACAS OF A BREEDING CENTRE IN CUSCO, PERU

El objetivo del presente estudio fue determinar la seroprevalencia de anticuerpos anti-Toxoplasma gondii en alpacas de un centro de crianza de la provincia de Canchis, Cusco, Perú, mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI), empleando un punto de corte de 1:200. Se recolectaron 318 muestras de sangre de alpacas hembras de1 a 13 años de edad. La seroprevalencia fue de 25.8 ± 4.8% (82/318). De los 82 sueros positivos, el 62.2% presentó títulos de 1:200. Los resultados obtenidos ratifican la presencia de anticuerpos específicos frente al T. gondii en alpacas de Cusco.The aim of this study was to determine the seroprevalence of anti-Toxoplasma gondiiantibodies in alpacas of a breeding centre in the province of Canchis, Cusco, Peru, by theindirect inmunofluorescence technique (IFAT) using a cut off of 1:200. A total of318blood samples were collected from female alpacas. The seroprevalence was of 25.8 ± 4.8% (82/318). Out of 82 positive sera, 62.2% showed titres of 1:200. The results confirmthe presence of specific anti-T. gondii antibodies in alpacas in Cusc

PRESENCIA DE CARACOLES LYMNAEIDAE CON FORMAS LARVARIAS DE Fasciola hepatica EN ALTITUDES SOBRE LOS 4000 MSNM EN LA SIERRA SUR DEL PERÚ

The objective of the study was to determine the presence of F. hepatica larvae and the species of snails that are intermediary hosts of F. hepatica in altitudes over 4000 m above the sea level (masl). The study covered three altitudes (4000-4200, 4200-4300, 4300-4500 masl) and was collected 150 snails per each altitude during the rainy season (January-March, 2004). The area is part of La Raya Experimental Research Station of San Antonio de Abad University, Cusco. Fifty snails were used for measuring the shell, 50 for observing the reproductive organs and the radula to identify the species, and 50 to observe the larva forms of Fasciola hepatica. Snails found at 4000-4200 masl were of the Lymnaea viatrix species and at 4200-4500 of the Pseudosuccinea columella species. The level of infestation with larva forms of Fasciola hepatica was 48, 46 and 36% at 4000-4200, 4200-4300, and 4300-4500 masl respectively, and this shows that the parasite can survive over 4000 masl. The relationship between level of infestation and altitude was inversely proportional.El objetivo del estudio fue determinar la presencia de formas larvarias de F. hepatica y las especies de caracoles hospederos intermediarios de F. hepatica en altitudes superiores a 4000 msnm. Se trabajó en tres altitudes (4000 a 4200, 4200 a 4300, y 4300 a 4500 msnm) colectándose 150 caracoles por cada altitud en la época de lluvias (enero-marzo) del 2004. El área pertenece a la Estación Experimental de la Raya, Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco. Se utilizaron 50 caracoles para la medición de la concha, 50 para observar el aparato reproductor y la rádula a fin de identificar las especies, y 50 para verificar la presencia de formas larvarias de Fasciola hepatica. Se encontró caracoles de la especie Lymnaea viatrix entre 4000 a 4200 msnm y de la especie Pseudosuccinea columella entre 4200 a 4500 msnm. El porcentaje de infestación de los caracoles con las formas larvarias de Fasciola hepatica fue de 48, 46 y 36% a 4000-4200, 4200-4300, y 4300-4500 msnm, respectivamente, demostrando que el parásito puede sobrevivir sobre los 4000 msnm. La relación entre el nivel de infestación y altitud fue inversamente proporcional

CRYPTOSPORIDIUM PARVUM AS RISK FACTOR ON NEONATAL DIARRHEA IN ALPACAS OF PUNO

El presente trabajo evaluó en campo el rol del Cryptosporidium parvum como factor de riesgo en la presentación de diarrea neonatal empleando el diseño epidemiológico de Caso-Control en alpacas del departamento de Puno. El muestreo se realizó durante la temporada de parición, entre los meses de febrero y marzo de 2006. Se recolectaron muestras fecales (n=487) de alpacas entre 1 a 15 días de edad procedentes de las localidades de Antacalla, La Raya, Quimsachata y Macusani. Los frotis fecales, fijados previamente en metanol, fueron procesados según la técnica de tinción de Ziehl-Neelsen Modificado. El 39% (130/336) de los animales con diarrea y el 23% (35/151) de las que estaban sin diarrea fueron positivos a la infección por C. parvum. El análisis de regresión logística demostró que no hubo relación estadística significativa entre la presencia de Cryptosporidium y la diarrea neonatal en alpacas (OR: 1.5, IC 95%: 0.9-2.4). Por otro lado, dentro de las demás variables en evaluación se determinó que la localidad de La Raya fue estadísticamente significativa (P = 0.046), representando un factor de riesgo para la presentación de diarrea neonatal (OR: 2.5, IC 95%: 1.1-6.1).The role of Cryptosporidium parvum as a risk factor for the occurrence of neonatal diarrhea was evaluated using a case-control study design in alpacas from Puno. The study was carried out during the calving season, between February and March 2006. Stool samples (n=487) were collected in alpacas of 1 to 15 days of age in four localities: Antacalla, La Raya, Quimsachata and Macusani. The faecal smears were processed following the Modified Ziehl-Neelsen stain. The 39% (130/336) of alpacas with diarrhea and 23% (35/151) of alpacas without diarrhea were positives to C. parvum infection. The logistic regression showed that this parasite does not represent a risk factor for neonatal diarrhea in the screened animals (OR: 1.5, IC 95%: 0.9-2.4). It was also determined that La Raya was statistically significant (p=0.046) and represented a risk factor for the occurrence of neonatal diarrhea (OR: 2.5, IC 95%: 1.1-6.1)

Expression of TCRγδ receptor genes in jejunum mucosa of baby alpacas (Vicugna pacos)

El objetivo de este estudio fue determinar la expresión de genes del receptor TCRγδ (gamma y delta) en el epitelio yeyunal de 16 crías de alpaca aparentemente sanas, de 2 a 47 días de edad, mediante la cuantificación de ARN mensajero (ARNm) utilizando cebadores específicos. Se tomaron porciones de yeyuno (2 cm de longitud). El ARNm total de la mucosa de la porción media del yeyuno actuó como molde para la síntesis de ADN complementario mediante transcripción reversa (RT), seguida de un PCR-tiempo real para la amplificación y cuantificación de los ARNm de los polipéptidos que conforman las cadenas gamma y delta del TCR. Se utilizó el método 2-ΔΔCt para la cuantificación relativa de ARNm, teniendo como calibrador a dos crías neonatas que no habían consumido calostro. Las crías de 1, 2, 3 y ≥4 semanas de edad expresaron el gen gamma en 4.75, 6.78, 16.24 y 103.11 veces lo expresado por los animales calibradores, respectivamente, y el gen delta fue expresado en 9.43, 20.78, 25.08 y 146.46 veces, respectivamente. Los resultados demuestran que los genes gamma y delta se expresan en forma creciente con la edad, y significativamente a partir de la cuarta semana de edad (p<0.05), indicando que los linfocitos Tγδ se incrementan en la mucosa intestinal con la edad.The aim of this study was to determine the expression of TCRγδ receptor genes (gamma and delta) in the jejunal epithelium of 16 apparently healthy baby alpacas (2 to 47 days of age), by quantifying messenger RNA (mRNA) using specific primers. Jejunumsamples (2 cm long) were collected. Total mRNA of the medium portion of the jejunum acted as template for complementary DNA synthesis by reverse transcription (RT), followed by real-time PCR for the amplification and quantification of the mRNAs of the polypeptides that make up the gamma and delta chains of the TCR. The 2-ΔΔCt method was used for the relative mRNA quantification, using as calibrator two neonatal alpacas that had not consumed colostrum. The alpacas of 1, 2, 3 and >4 weeks of age expressed the gamma gene at 4.75, 6.78, 16.24 and 103.11 folds as expressed by the calibrator animals, respectively, and the delta gene was expressed at 9.43, 20.78, 25.08, and 146.46 folds, respectively. The results demonstrate that gamma and delta genes are increasingly expressed with age, and significantly from the fourth week of age (p<0.05), indicating that Tγδ lymphocytes increase in the intestinal mucosa with age