Natural infection of Aedes aegypti by Chikungunya and Dengue type 2 Virus in a transition area of north-northeast Brazil

Dengue fever, chikungunya, and Zika are diseases caused by viruses transmitted by Aedes aegypti and Aedes albopictus. In Brazil, the number of human infections is high, but few studies are performed in mosquito vectors. This study aimed to investigate the presence of Zika, Dengue and Chikungunya viruses in Ae. aegypti and Ae. albopictus from the municipalities of Alto Alegre, Caxias, Codó, and São Mateus do Maranhão, located in the state of Maranhão, Northeast Brazil. The mosquitoes were collected with a mechanical aspirator, identified, triturated, and then submitted to RNA extraction and RT-qPCR. The positive samples were confirmed by virus isolation and genome sequencing. Three hundred and forty-eight Ae. aegypti (176 males and 172 females) and 12 Ae. albopictus (eight males and four females) were collected and tested. Ae. aegypti was the only vector positive in two municipalities-Codó, with detection of Chikungunya virus (CHIKV) belonging to the East-Central-South African genotype, and in Caxias, with detection of Dengue virus (DENV)-2 belonging to the Asian/American genotype. The detection of CHIKV and DENV-2 is evidence that those viruses are maintained in arthropod vectors, and shows the epidemiological risk in the area for chikungunya cases and a possible increase of severe dengue cases, associated with the occurrence of dengue hemorrhagic fever. © 2019 by the authors

Padronização da técnica de RT-q PCR Trioplex para detecção do gene L, M e S do vírus Oropouche

Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Programa de Pós-Graduação em Virologia. Ananindeua, PA, Brasil.O vírus Oropouche (OROV), pertencente a família Peribunyaviridae, é um arbovírus causador de uma doença febril aguda em humanos, possuindo o genoma com três moléculas de ácido ribonucleico (S, M e L). É mantido em natureza nos ciclos urbano, onde o vírus é transmitido para o homem através da picada do inseto Culicoides paraenses e silvestre, através da transmissão de vetores Coquillettidia venezuelensis e Ochlerotatus serratus para animais vertebrados (primatas não humanos preguiças e aves). O diagnóstico laboratorial deste vírus tem sido realizado por técnicas sorológicas e isolamento viral, consideradas padrão ouro, sendo de baixo custo, porem demoradas. As técnicas moleculares possuem a vantagem de ser mais rápida específica e sensível, porém os protocolos disponíveis ate o momento tem como alvo o segmento S de OROV, o que pode levar a problemas com especificidade do diagnóstico, principalmente em decorrência dos rearranjos de segmentos gênicos entre os Orthobunyavirus, especialmente do segmento S. Portando este estudo teve como objetivo a padronização da técnica de RT-q PCR trioplex para detecção do gene S, L e M do vírus Oropouche. Um conjunto de iniciadores e sondas foi desenhado com base, para cada segmento (S, L e M), com a avaliação das regiões mais conservadas. Foi realizado o sequenciamento do isolado de OROV (Be H759021) para verificação de mutações. O isolado de BeH759021 foi submetido a duas quantificações, uma do segmento S em cópias /ml por PCR digital, e em PFU/ ml dos três segmentos S, L e M. A partir da quantificação foram feitas duas curvas padrão e análise do limite de detecção (LOD). Para a avaliação de sensibilidade clínica, foram testadas 24 amostras positivas e 24 negativas para OROV pelo diagnóstico primário, em paralelo com os iniciadores e sondas do protocolo de Naveca et al., 2017(NF), para comparação, e de onde se obteve os resultados de sensibilidade, especificidade e acurácia. A análise de especificidade analítica foi realizada pelo programa Primer-Blast e também foram testados RNAs de vírus da família Flaviviride e Togaviridae. Os resultados obtidos do LOD de OROV S do trioplex foi de 65,341 cópias/ml, enquanto que para o NF foi de 15,580 cópias/ml, já o LOD em PFU/ml foi de 25,903; 285,677 e 124,846 para OROV S, M e L, respectivamente. Das 48 amostras clínicas testadas, 21 deram positivas e 27 deram negativas para ambos os protocolos testados (Trioplex e NF), obtendo um resultado de sensibilidade, especificidade e acurácia de 100%, pois não houve divergência entre os resultados. De acordo com os achados, o ensaio de RT-qPCR desenvolvido foi sensível e específico, com a detecção e quantificação dos três segmentos de OROV, o que o torna um instrumento de auxilio em aplicações de diagnóstico, vigilância e investigação deste arbovírus que tem sido subnotificado

Chikungunya virus Detection in Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus during an Outbreak in the Amazon Region

Chikungunya virus (CHIKV) was first reported in Brazil in 2014 and, after it spread countrywide, an outbreak of febrile illness with reports of arthralgia happened in the municipality of Xinguara, Pará, Brazil in 2017, indicating the virus’ circulation. Here, we aimed to investigate CHIKV in mosquito vectors collected during an active surveillance of virus isolation in cell culture by using molecular detection and viral genome sequencing. A total of 492 Aedes, Culex and Mansonia mosquitoes were collected and separated in 36 pools according to the species and sex, and 22.2% (8/36) were positive. CHIKV was indentified in pools of Ae. aegypti females (n = 5), an Ae. aegypti male (n = 1) and in Culex quinquefasciatus females (n = 2). However, as the mosquitoes’ whole bodies were macerated and used for detection, one cannot suggest the role of the latter in the viral transmission. Despite this, vector competence studies must be carried out in the different species to investigate long-term adaptations. Viral genome sequencing has characterized the East-Central-South-African (ECSA) genotype in all positive pools analyzed, corroborating previous reports for the Amazon region

Chikungunya virus detection in Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus during an outbreak in the Amazon Region

Instituto Evandro Chagas/Ministério da Saúde and to Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) grant number 302462/2018-0Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Universidade do Estado do Pará. Departamento de Patologia. Belém, PA, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Programa de Pós-Graduação em Virologia. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Fundação do Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunologia Viral. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Programa de Pós-Graduação em Virologia. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Chikungunya virus (CHIKV) was first reported in Brazil in 2014 and, after it spread countrywide, an outbreak of febrile illness with reports of arthralgia happened in the municipality of Xinguara, Pará, Brazil in 2017, indicating the virus’ circulation. Here, we aimed to investigate CHIKV in mosquito vectors collected during an active surveillance of virus isolation in cell culture by using molecular detection and viral genome sequencing. A total of 492 Aedes, Culex and Mansonia mosquitoes were collected and separated in 36 pools according to the species and sex, and 22.2% (8/36) were positive. CHIKV was indentified in pools of Ae. aegypti females (n = 5), an Ae. aegypti male (n = 1) and in Culex quinquefasciatus females (n = 2). However, as the mosquitoes’ whole bodies were macerated and used for detection, one cannot suggest the role of the latter in the viral transmission. Despite this, vector competence studies must be carried out in the different species to investigate long-term adaptations. Viral genome sequencing has characterized the East-Central-South-African (ECSA) genotype in all positive pools analyzed, corroborating previous reports for the Amazon region

Discovery and genome sequencing of a new virus related to members of the family Tymoviridae, isolated from mosquitoes of the genus Mansonia in Brazil

Energia Sustentavel do Brasil ESBR, P&D ANEEL -(PD -06631-0005/2017) and Evandro Chagas Institute/Ministry of Health of Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, BrasilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, BrasilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, BrasilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, BrasilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, BrasilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Centro de Inovações Tecnológicas. Ananindeua, PA, BrasilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, BrasilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, BrasilState University of Pará. Department of Pathology. Belém, PA, Brazil.Energia Sustentável do Brasil. Porto Velho, RO, Brazil.Oikos Consultoria e Projetos. Porto Velho, RO, BrazilNational Institute of Amazonian Research. Malaria and Dengue Laboratory. Manaus, AM, BrazilNational Institute of Amazonian Research. Malaria and Dengue Laboratory. Manaus, AM, BrazilMinistério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Programa de Pós-Graduação em Epidemiologia e Vigilância em Saúde. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, BrasilA new virus, named Mutum virus, related to members of the family Tymoviridae, was isolated from mosquitoes (Mansonia spp.) in clone C6/36 cells, and its complete genome was sequenced. Its genome is 6494 nt in size with an organization resembling that of tymovirids. The isolated virus is phylogenetically related to two viruses isolated from Culex spp. mosquitoes: Ek Balam virus, reported in Mexico, and Culex-originated Tymoviridae-like virus, isolated in China. The results of this study suggest that this virus is a new member of the family Tymoviridae

The importance of entomo-virological investigation of Yellow Fever Virus to strengthen surveillance in Brazil

Brazilian National Council for Scientific and Technological Development (CNPq), grant numbers 314522/2021-2 to A.C.R.C., 166720/2017-8 and 106256/2018-1, to L.H.A.H, and 310295/2021-1, to P.F.d.C.V. Funding was also provided by National Institute of Science and Technology for Emerging and Reemerging Viruses in partnership with CNPq, grant number 406360/2022-7, to P.F.d.C.V.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Pará State University. Center for Biological and Health Sciences. Belém, PA, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Pará State University. Center for Biological and Health Sciences. Belém, PA, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Pará State University. Center for Biological and Health Sciences. Belém, PA, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Pará State University. Center for Biological and Health Sciences. Belém, PA, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Federal University of Pará. Institute of Biological Sciences. Belém, PA, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Goiás Public Health Laboratory. Goiânia, GO, Brazil.Goiás Public Health Laboratory. Goiânia, GO, Brazil.Ministry of Health. Health and Environment Surveillance Secretariat. Brasília, DF, Brazil.World Health Organization. Pan American Health Organization. Public Health Emergency Department. Brasília, DF, Brazil.Oswaldo Cruz Foundation. René Rachou Institute. Belo Horizonte, MG, Brazil.Oswaldo Cruz Foundation. René Rachou Institute. Belo Horizonte, MG, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.The largest outbreak of sylvatic yellow fever virus (YFV) in eight decades was recorded in Brazil between 2016–2018. Besides human and NHP surveillance, the entomo-virological approach is considered as a complementary tool. For this study, a total of 2904 mosquitoes of the Aedes, Haemagogus and Sabethes genera were collected from six Brazilian states (Bahia, Goiás, Mato Grosso, Minas Gerais, Pará, and Tocantins) and grouped into 246 pools, which were tested for YFV using RT-qPCR. We detected 20 positive pools from Minas Gerais, 5 from Goiás, and 1 from Bahia, including 12 of Hg. janthinomys and 5 of Ae. albopictus. This is the first description of natural YFV infection in this species and warns of the likelihood of urban YFV re-emergence with Ae. albopictus as a potential bridge vector. Three YFV sequences from Hg. janthinomys from Goiás and one from Minas Gerais, as well as one from Ae. albopictus from Minas Gerais were clustered within the 2016–2018 outbreak clade, indicating YFV spread from Midwest and its infection in a main and likely novel bridging vector species. Entomo-virological surveillance is critical for YFV monitoring in Brazil, which could highlight the need to strengthen YFV surveillance, vaccination coverage, and vector control measures

The Importance of Entomo-Virological Investigation of Yellow Fever Virus to Strengthen Surveillance in Brazil

The largest outbreak of sylvatic yellow fever virus (YFV) in eight decades was recorded in Brazil between 2016–2018. Besides human and NHP surveillance, the entomo-virological approach is considered as a complementary tool. For this study, a total of 2904 mosquitoes of the Aedes, Haemagogus and Sabethes genera were collected from six Brazilian states (Bahia, Goiás, Mato Grosso, Minas Gerais, Pará, and Tocantins) and grouped into 246 pools, which were tested for YFV using RT-qPCR. We detected 20 positive pools from Minas Gerais, 5 from Goiás, and 1 from Bahia, including 12 of Hg. janthinomys and 5 of Ae. albopictus. This is the first description of natural YFV infection in this species and warns of the likelihood of urban YFV re-emergence with Ae. albopictus as a potential bridge vector. Three YFV sequences from Hg. janthinomys from Goiás and one from Minas Gerais, as well as one from Ae. albopictus from Minas Gerais were clustered within the 2016–2018 outbreak clade, indicating YFV spread from Midwest and its infection in a main and likely novel bridging vector species. Entomo-virological surveillance is critical for YFV monitoring in Brazil, which could highlight the need to strengthen YFV surveillance, vaccination coverage, and vector control measures