Análise de novos agentes quimioterápicos em linhagens celulares de câncer gástrico humano

O câncer gástrico é a terceira causa de morte por câncer no mundo e a quimioterapia combinatória é um dos principais tratamentos para esta doença. Contudo, a principal causa de falha do tratamento é a quimiorresistência. Considerando este obstáculo juntamente com a descoberta de que muitas proteínas envolvidas na mitose podem estar associadas à tumorigênese, vários agentes antimitóticos estão sendo desenvolvidos e testados. As proteínas mitóticas AURKB e NDC80 foram recentemente identificadas como proteínas potenciais a serem inibidas no câncer gástrico. Portanto, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos da inibição de AURKB e NDC80 pelos fármacos experimentais ZM447439 e INH1, respectivamente. Analisamos os efeitos em duas linhagens de adenocarcinoma gástrico avaliando expressão gênica, ciclo celular, morte celular, análise morfométrica nuclear, capacidade de migração e presença de células-tronco tumorais. É importante enfatizar que essas duas pequenas moléculas não foram testadas na quimioterapia do câncer gástrico até o momento. Além disso, após uma revisão da literatura, concluímos que os melhores resultados dos ensaios clínicos foram alcançados quando antimitóticos foram combinados com a terapia convencional. Dessa forma, avaliamos também os efeitos da associação de 5- FU com ZM447439. Nossos resultados demonstraram que a monoterapia com 5-FU, ZM447439 e INH1 induziu a expressão gênica diferencial nas linhagens de câncer gástrico (ACP02 e ACP03) de pelo menos 22 de um total de 82 genes envolvidos em várias vias, como apoptose, ciclo celular, senescência e transição epitélio-mesenquimal. Observamos também que ZM447439 e sua combinação com 5-FU induziram apoptose, catástrofe mitótica, senescência e ciclo celular alterado nas linhagens de câncer gástrico. Outro dado interessante foi a expressão dos marcadores de células-tronco tumorais gástricas, LGR5 e CD24, e a capacidade de formar esferas, indicando que ambas ACP02 e ACP03 podem conter células tronco tumorais. Além disso, a monoterapia com ZM447439 ou 5-FU foi capaz de inibir a formação de esferas. Por outro lado, o INH1 mostrou menor atividade antitumoral, uma vez que apresentou o maior valor de IC50 e foi capaz somente de induzir apoptose e reduzir a migração celular. Interessantemente, a combinação do 5-FU com ZM447439 permitiu o uso de doses menores dos compostos, além de ser capaz de induzir a apoptose num tempo mais curto quando comparado com o tratamento com os fármacos isolados. Em síntese, os resultados observados sugerem o inibidor de AURKB, ZM447439, e sua associação com o agente quimioterápico 5-FU, como tratamentos promissores do câncer gástrico com base em sua elevada atividade antitumoral in vitro.Gastric cancer is the third cause of cancer death worldwide and combinatorial chemotherapy is one of the main treatments for this disease. However, the major cause of treatment failure is chemoresistance. Considering this obstacle together with the discovery that many proteins involved in mitosis might be associated to tumorigenesis, several new anti-mitotics are being developed and tested. The mitotic proteins AURKB and NDC80 were recently shown as potential proteins to be inhibited in gastric cancer. Therefore, the aim of this study was to analyze the effects of AURKB and NDC80 inhibition by the experimental drugs ZM447439 and INH1, respectively. We analyzed the effects in two gastric adenocarcinoma cell lines evaluating gene expression, cell cycle, cell death, nuclear morphometric analysis, migration ability and presence of gastric cancer stem cells. It is important to emphasize these two small molecules have not been tested in gastric cancer chemotherapy until now. Moreover, after reviewing the literature, we concluded the best results of clinical trials were achieved when anti-mitotics were combined with conventional therapy. Thus, we evaluated the effects of 5-FU and ZM447439 combination as well. Our results demonstrated that monotherapy with 5-FU, ZM447439 and INH1 induced differential gene expression in gastric cancer cell lines (ACP02 and ACP03) of at least 22 from 82 genes involved in several pathways such as apoptosis, cell cycle, senescence and epithelial mesenchymal transition. We also observed that ZM447439 and its combination with 5-FU induced apoptosis, mitotic catastrophe, senescence and altered cell cycle in gastric cancer cell lines. Another interesting data was the expression of the gastric cancer stem cell markers LGR5 and CD24, and the ability to form spheres, indicating that both ACP02 and ACP03 may be composed by cancer stem cells. Furthermore, monotherapy with either ZM447439 or 5-FU were capable of inhibiting the formation of spheres. On the other hand, INH1 have shown lower antitumoral activity since it presented the highest IC50 value and was only capable of inducing apoptosis and reducing cell migration. Interestingly, the combination of 5-FU with ZM447439 allowed the use of smaller doses of the compounds, in addition to being able to induce apoptosis in a shorter time when compared to the treatment with the isolated drugs. Taken together, our findings suggest that due to the high antitumoral activity shown by ZM447439 and mainly its association with 5-FU, these might be promising gastric cancer therapies

Molecular analysis of pathogens in cerebrospinal fluid by the polymerase chain reaction in HIV-infected patients

Introdução: A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi teste de grande impacto no diagnóstico das meningites e encefalites linfocíticas durante a última década. Esse método foi extensivamente usado no diagnóstico das infecções do sistema nervoso central (SNC), devido a sua habilidade em detectar amostras mínimas de DNA-alvo no líquido cefalorraquiano. Objetivo: O objetivo deste estudo foi identificar a prevalência dos patógenos oportunistas responsáveis por causar problemas neurológicos em pacientes infectados com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) e avaliar sua associação com os achados clínicos, laboratoriais e da tomografia computadorizada cerebral (TCC). Pacientes e métodos: Um estudo transversal foi realizado em 203 amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes do sul do Brasil infectados com HIV e com aparente encefalite e meningite linfocíticas. As amostras foram analisadas para os seguintes agentes pelo método da reação em cadeia da polimerase “nested” ou dupla (N-PCR): citomegalovírus, vírus do Epstein-Barr, vírus do herpes simplex tipos 1 e 2, vírus da varicella zoster, vírus do herpes humano tipo 6, vírus JC, Toxoplasma gondii e micobactérias. Resultado: Pelo menos um patógeno foi encontrado em 77 (38%) dos indivíduos. O Epstein-Barr foi o mais prevalente, com 40 casos (19,7%), seguido pelo citomegalovívus, com 12 casos (15%) e pelo vírus JC, em 9 casos (4,4%). Um N-PCR positivo mostrou associação com aumento de proteínas e de celularidade (P=0,001), meningismo (P=0,017) e tomografia computadorizada anormal (P=0,006). Conclusão: O painel de PCR empregado foi efetivo na identificação de infecções neurológicas severas em pacientes HIV positivos.Introduction: Polymerase chain reaction (PCR) has had great impact on the diagnosis of lymphocytic meningitis and encephalitis over the last decade. It has been extensively used in the diagnosis of central nervous system (CNS) infections for its ability to detect small amounts of target DNA in the cerebrospinal fluid (CSF). Objective: The aim of this study was to identify the prevalence of opportunistic pathogens responsible for neurological disorders in patients infected with human immunodeficiency virus (HIV) and to evaluate its association with clinical, laboratory and cerebral computed tomography (CCT) findings. Patients and methods: A cross-sectional study was performed on 203 cerebrospinal fluids (CSF) from HIV-infected patients from Southern Brazil, with apparent lymphocytic meningitis and encephalitis. CSF samples were analyzed with probes for cytomegalovirus, Epstein-Barr virus, herpes simplex virus types 1 and 2, varicella zoster virus, human herpes virus type 6, JC virus, Toxoplasma gondii and mycobacterium in nested polymerase chain reaction (N-PCR). Results: At least one pathogen was found in 77 (38.0%) individuals. Epstein-Barr virus was the most prevalent with 40 cases (19.7%), followed by cytomegalovirus with 12 cases (5.9%) and JC virus with 9 cases (4.4%). Positive NPCR showed association with high spinal fluid protein and cell count (P=0.001), meningism (P=0.017) and abnormal CCT (P=0.006). Conclusion: The PCR panel used was effective in screening several neurological infections in HIV positive patients

Análise de novos agentes quimioterápicos em linhagens celulares de câncer gástrico humano

O câncer gástrico é a terceira causa de morte por câncer no mundo e a quimioterapia combinatória é um dos principais tratamentos para esta doença. Contudo, a principal causa de falha do tratamento é a quimiorresistência. Considerando este obstáculo juntamente com a descoberta de que muitas proteínas envolvidas na mitose podem estar associadas à tumorigênese, vários agentes antimitóticos estão sendo desenvolvidos e testados. As proteínas mitóticas AURKB e NDC80 foram recentemente identificadas como proteínas potenciais a serem inibidas no câncer gástrico. Portanto, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos da inibição de AURKB e NDC80 pelos fármacos experimentais ZM447439 e INH1, respectivamente. Analisamos os efeitos em duas linhagens de adenocarcinoma gástrico avaliando expressão gênica, ciclo celular, morte celular, análise morfométrica nuclear, capacidade de migração e presença de células-tronco tumorais. É importante enfatizar que essas duas pequenas moléculas não foram testadas na quimioterapia do câncer gástrico até o momento. Além disso, após uma revisão da literatura, concluímos que os melhores resultados dos ensaios clínicos foram alcançados quando antimitóticos foram combinados com a terapia convencional. Dessa forma, avaliamos também os efeitos da associação de 5- FU com ZM447439. Nossos resultados demonstraram que a monoterapia com 5-FU, ZM447439 e INH1 induziu a expressão gênica diferencial nas linhagens de câncer gástrico (ACP02 e ACP03) de pelo menos 22 de um total de 82 genes envolvidos em várias vias, como apoptose, ciclo celular, senescência e transição epitélio-mesenquimal. Observamos também que ZM447439 e sua combinação com 5-FU induziram apoptose, catástrofe mitótica, senescência e ciclo celular alterado nas linhagens de câncer gástrico. Outro dado interessante foi a expressão dos marcadores de células-tronco tumorais gástricas, LGR5 e CD24, e a capacidade de formar esferas, indicando que ambas ACP02 e ACP03 podem conter células tronco tumorais. Além disso, a monoterapia com ZM447439 ou 5-FU foi capaz de inibir a formação de esferas. Por outro lado, o INH1 mostrou menor atividade antitumoral, uma vez que apresentou o maior valor de IC50 e foi capaz somente de induzir apoptose e reduzir a migração celular. Interessantemente, a combinação do 5-FU com ZM447439 permitiu o uso de doses menores dos compostos, além de ser capaz de induzir a apoptose num tempo mais curto quando comparado com o tratamento com os fármacos isolados. Em síntese, os resultados observados sugerem o inibidor de AURKB, ZM447439, e sua associação com o agente quimioterápico 5-FU, como tratamentos promissores do câncer gástrico com base em sua elevada atividade antitumoral in vitro.Gastric cancer is the third cause of cancer death worldwide and combinatorial chemotherapy is one of the main treatments for this disease. However, the major cause of treatment failure is chemoresistance. Considering this obstacle together with the discovery that many proteins involved in mitosis might be associated to tumorigenesis, several new anti-mitotics are being developed and tested. The mitotic proteins AURKB and NDC80 were recently shown as potential proteins to be inhibited in gastric cancer. Therefore, the aim of this study was to analyze the effects of AURKB and NDC80 inhibition by the experimental drugs ZM447439 and INH1, respectively. We analyzed the effects in two gastric adenocarcinoma cell lines evaluating gene expression, cell cycle, cell death, nuclear morphometric analysis, migration ability and presence of gastric cancer stem cells. It is important to emphasize these two small molecules have not been tested in gastric cancer chemotherapy until now. Moreover, after reviewing the literature, we concluded the best results of clinical trials were achieved when anti-mitotics were combined with conventional therapy. Thus, we evaluated the effects of 5-FU and ZM447439 combination as well. Our results demonstrated that monotherapy with 5-FU, ZM447439 and INH1 induced differential gene expression in gastric cancer cell lines (ACP02 and ACP03) of at least 22 from 82 genes involved in several pathways such as apoptosis, cell cycle, senescence and epithelial mesenchymal transition. We also observed that ZM447439 and its combination with 5-FU induced apoptosis, mitotic catastrophe, senescence and altered cell cycle in gastric cancer cell lines. Another interesting data was the expression of the gastric cancer stem cell markers LGR5 and CD24, and the ability to form spheres, indicating that both ACP02 and ACP03 may be composed by cancer stem cells. Furthermore, monotherapy with either ZM447439 or 5-FU were capable of inhibiting the formation of spheres. On the other hand, INH1 have shown lower antitumoral activity since it presented the highest IC50 value and was only capable of inducing apoptosis and reducing cell migration. Interestingly, the combination of 5-FU with ZM447439 allowed the use of smaller doses of the compounds, in addition to being able to induce apoptosis in a shorter time when compared to the treatment with the isolated drugs. Taken together, our findings suggest that due to the high antitumoral activity shown by ZM447439 and mainly its association with 5-FU, these might be promising gastric cancer therapies

Frequência alélica de 14 locos do cromossomo X de indivíduos da região Sul do Brasil

Dois sistemas para amplificação simultânea de short tandem repeats (STRs) do cromossomo X foram desenvolvidos neste trabalho. O Multiplex 1 foi composto por HPRTB, DXS101, DXS7424, DXS6807, DXS6800 e GATA172D05 e o Multiplex 2 foi composto por DXS8378, DXS7133, DXS9898, DXS7423, DXS6809, DXS6789, DXS8377 e DXS6801. Além do desenvolvimento de dois sistemas multiplex, nós apresentamos, neste estudo, a freqüência alélica para esses locos na população do Rio Grande do Sul, Brasil. A amostra foi composta por um total de 266 indivíduos, sendo 125 mulheres e 141 homens. O equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) foi testado na amostra feminina e não foram encontrados desvios significativos após a correção de Bonferroni. Os testes de desequilíbrio de ligação (LD) foram realizados para todos os pares de locos e três resultados significativos, após a correção de Bonferroni, de 91 comparações, foram obtidos entre DXS101 e DXS8377 (P<0,001), DXS7133 e DXS6809 (P<0,001) e DXS7423 e DXS6809 (P<0,001). O poder de discriminação em mulheres (PDF) variou entre 0,832 para DXS6801 e 0,987 para DXS8377. DXS6801 foi o marcador menos informativo (PIC=0,605), enquanto o DXS8377 foi o loco mais polimórfico (PIC=0,911), seguido pelo DXS101 (PIC=0,872).We developed two multiplex systems for the coamplification of X-chromosomal short tandem repeats (STRs). X-Multiplex 1 consisted of HPRTB, DXS101, DXS7424, DXS6807, DXS6800 and GATA172D05 and X-Multiplex 2 consisted of DXS8378, DXS7133, DXS9898, DXS7423, DXS6809, DXS6789, DXS8377 and DXS6801. In addition, we present allele frequencies for this loci in a south Brazilian population comprising 125 females and 141 males. Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) was tested in the female sample and no significant deviations were found, after applying Bonferroni’s correction. Linkage disequilibrium (LD) tests were performed for all pairs of loci and three significant results, even after applying Bonferroni’s correction, out of 91 pairwise comparisons, were obtained between DXS101 and DXS8377 (P<0.001), DXS7133 and DXS6809 (P<0.001) and DXS7423 and DXS6809 (P<0.001). The power of discrimination in females (PDF) varied between 0,832 for DXS6801 and 0,987 for DXS8377. DXS6801 was the least informative marker (PIC=0,605), while DXS8377 was the most polymorphic (PIC=0,911), followed by DXS101 (PIC=0,872)

Organizational factors associated with adherence to low tidal volume ventilation: a secondary analysis of the CHECKLIST-ICU database

Background: Survival benefit from low tidal volume (VT) ventilation (LTVV) has been demonstrated for patients with acute respiratory distress syndrome (ARDS), and patients not having ARDS could also benefit from this strategy. Organizational factors may play a role on adherence to LTVV. The present study aimed to identify organizational factors with an independent association with adherence to LTVV. Methods: Secondary analysis of the database of a multicenter two-phase study (prospective cohort followed by a cluster-randomized trial) performed in 118 Brazilian intensive care units. Patients under mechanical ventilation at day 2 were included. LTVV was defined as a VT ≤ 8 ml/kg PBW on the second day of ventilation. Data on the type and number of beds of the hospital, teaching status, nursing, respiratory therapists and physician staffing, use of structured checklist, and presence of protocols were tested. A multivariable mixed-effect model was used to assess the association between organizational factors and adherence to LTVV. Results: The study included 5719 patients; 3340 (58%) patients received LTVV. A greater number of hospital beds (absolute difference 7.43% [95% confidence interval 0.61–14.24%]; p = 0.038), use of structured checklist during multidisciplinary rounds (5.10% [0.55–9.81%]; p = 0.030), and presence of at least one nurse per 10 patients during all shifts (17.24% [0.85–33.60%]; p = 0.045) were the only three factors that had an independent association with adherence to LTVV. Conclusions: Number of hospital beds, use of a structured checklist during multidisciplinary rounds, and nurse staffing are organizational factors associated with adherence to LTVV. These findings shed light on organizational factors that may improve ventilation in critically ill patients